浅谈实验室校准原始数据的方法及应用

杨沙沙 刘露

作者单位：410007 湖南长沙，湖南省职业病防治院检验科

目前化学发光法在临床检验领域得到广泛应用，其利用抗原抗体结合反应、化学发光和磁性分离技术相结合的测定方法，以磁性颗粒作为固相载体，吖啶酯作为发光底物，在酸碱变化过程中测定发光值，通过电路和计算机计算发光强度［1］。校准是测试和调整检验系统（包括仪器、试剂、方法学参数等）的过程，用于建立该系统的计量学溯源性［2］。通常实验人员对校准原始数据及其与室内质量控制（质控）的相关性未予足够重视。本研究通过回顾促甲状腺激素（thyroid stimulating hormone，TSH）、游离甲状腺素（free thyroxine，FT4）、游离三碘甲状腺原氨酸（free triiodothyronine，FT3）、雌二醇（estradiol，E2）、铁蛋白（ferritin，Fer）的校准原始数据，分析校准原始数据与室内质控情况，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1仪器与试剂 西门子ADVIA Centaur化学发光分析仪（德国西门子公司），试剂、校准品均为原装配套产品；质控品为美国伯乐公司生产。

1.2研究方法

1.2.1质控品与校准品的配制与分装 将质控品和校准品从冰箱取出复温，复溶冻干粉，严格按说明书操作［3-4］。复溶20～30 min后，将溶液颠倒混匀6～8次，分装至标注批号及日期的冻存管内，在-20 ℃条件下保存，有效期为1个月。

1.2.2质控品检测及结果判定 每日取分装的低、中、高浓度质控品在室温下复溶20～30 min后进行检测。采用Westgard多规则质控方法（12S、13S、2-2S、R4S）判断室内质控情况，并记录总结。

1.2.3校准流程及数据分析 在更换试剂批号、校准到期、质控失控或仪器大修后进行校准。低浓度校准品（low concentration calibrator，CAL-L）、高浓度校准品（high concentration calibrator，CAL-H）在室温下复溶20～30 min后上机检测。校准完成后记录各浓度校准原始数据的发光值，并进行室内质控检测。将各指标CAL-L、CAL-H的有效校准原始数据根据试剂和校准品批次组合分组（TSH 8组，FT412组，FT35组，E2 6组，Fer 4组），分析各组发光值，计算不同指标的变异系数（coefficient of variation，CV），比较校准原始数据的CV与允许总误差（total allowable error，TEa）的差异。

1.2.4室内质控数据 收集2017年6月— 2019年12月TSH、FT4、FT3、E2、Fer的室内质控CV。各指标TEa为室间质量评价规范设定的25%，本实验室质控目标为室内精密度＜1/3TEa。

1.3统计学处理 采用Excel 软件处理数据，计数资料以次（百分比）表示，计算各组均值、标准差及CV。

2 结果

2.1校准情况

2.1.1校准有效率 2017年6月—2019年12月本实验室各指标共校准287次，校准无效总次数18次，校准无效率为6.27%。见表1。

表1 2017年6月—2019年12月各指标校准无效率比较

2.1.2校准无效原因统计 校准无效的主要原因有高CV、低浓度范围偏差、比例超范围、高浓度范围偏差等，未定义比例、未定义斜率造成的校准无效占比较低。各无效类型在不同指标中的分布见表2。

表2 不同校准无效类型在各指标中的分布

2.2不同指标校准原始数据的CV比较 各指标的TEa均为25%，以＜25%为判断标准，TSH、FT4、Fer各组CAL-L、CAL-H发光值的CV均在TEa范围内；FT3第3组CAL-L、CAL-H发光值的CV为29.02%、135.66%，第4组CAL-H发光值的CV为76.59%，其余各组CAL-L、CAL-H发光值的CV均在TEa范围内；E2第5组CAL-H发光值的CV为55.21%，第6组CAL-H发光值的CV为37.21%，其余各组CAL-L、CAL-H发光值的CV均在TEa范围内。见表3。

表3 不同指标低、高浓度校准品（CAL-L、CAL-H）原始数据的变异系数（CV）比较

2.3 2017年6月— 2019年12月室内质控情况 TSH、FT3、E2、Fer的室内质控CV均小于8.33%，即低于1/3TEa。而FT42018年12月和2019年1月室内质控CV分别为9.97%和8.92%，室内质控未达标，其他月份室内质控CV均控制在1/3TEa内。

3 讨论

为临床提供准确的检测结果是检验科的目标，而保证检验质量是检验医师的职责，提高检验质量需要建立一套全面的质控体系［5-6］。据统计，目前有7%～13%的差错产生于检验中［7］。大量文献表明，校准品、试剂、质控品以及仪器问题和人为因素是发生质控失控的主要原因［8-10］。本研究中校准无效率达6.27%，仪器提示校准无效原因以高CV最多见（占38.89%），且在多个指标中均有体现，与仪器、试剂、校准品都有关系。为提高校准成功率，需要做到以下几点：① 保证仪器正常运行，定期进行维护保养；② 由于化学发光试剂含有顺磁微粒，上机前需将磁珠充分混匀，且TSH、E2检测试剂需避光保存；③ 校准品应保存于适宜条件，溶解过程严格按流程操作，上机前充分混匀，避免气泡产生。

在仪器提示校准有效时出现质控失控，排除质控品问题、人为因素、仪器故障后，校准原始数据依然需要重点关注。同批号校准品与同批号试剂作为组合，组内数据有可比性。本研究结果显示，各组校准原始数据的差异较大，FT3第3组CAL-L和CAL-H发光值的CV、第4组CAL-H发光值的CV以及E2第5组与第6组CAL-H发光值的CV均高于该指标的TEa。结合校准数据和室内质控数据，可见FT3、E2的室内质控CV有＞1/3TEa的情况。临床实验室内质控通常被用作考察检测结果可靠性的标准，通过项目的不精密程度来评价测量过程的稳定程度［11］。只有室内质控在控情况下，检验结果才能得到保证。TEa可以作为判断校准原始数据是否有效以及室内质控是否在控的预测因子，同时也能作为检验结果准确与否的预测因子。

试剂稳定性是质控品最重要的指标［12］。当变异较大时，排除仪器故障、校准品失效等因素后，可能原因为试剂变质或瓶间差大，此时更需注意试剂质量。试剂从出厂到使用需经过输运、储存等多个环节，大部分医院对检验试剂的验收及入院后的监管力度不够［13］。任一环节出现问题都会影响检验结果的准确性。日常工作中为保证试剂的有效性需注意以下方面：① 入库验货时，对有冷藏、冷冻要求的试剂，重点检查是否使用规定设施运输［14］，温度记录设备是否实时监测且温度在规定范围内；② 目测试剂性状，因含有磁珠，试剂入库前可进行混匀验证，若磁珠不能混匀或有凝块，则为不合格；③ 部分化学发光试剂需避光保存；④ 对用量少、使用周期长的试剂，需详细记录开瓶日期。

现阶段实验室信息管理系统在室内质控中运用广泛，但未能从仪器中直接提取校准原始数据。进口试剂校准品的有效期较短，导致本研究样本量少，若收集更多的校准品发光值数据，则CV计算更加准确。临床工作中关注的多为质控品的精密度，而校准原始数据的精密度和准确度易被忽视。如何确定校准原始数据的精密度仍是未来探索方向。

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