脂联素在前列腺癌组织中的表达及意义研究＊

唐柯南 程丽宪 严玲玲 翁海燕 黄梦婷 林诚凤 何月 林荣臻 林清坪

前列腺癌男性高发的恶性肿瘤之一，发病率位居男性恶性肿瘤的第二位。近年来，随着我国居民生活方式的改变和老龄人口的增加，本病发病率呈逐年上升趋势。肥胖是前列腺癌的高危因素之一，通过胰岛素和胰岛素样生长因子1（IGF-1）相关通路、脂联素和瘦素等脂肪因子、影响性激素合成利用等促进病情的发生发展[1]。脂联素是脂肪细胞分泌的一种细胞因子，具有抗肿瘤作用，其表达水平与肥胖呈负相关关系[2]。流行病学研究显示，前列腺癌组织中脂联素表达明显降低，且随着组织学分级和Gleason评分升高而降低[3]。因此，低脂联素血症和脂联素受体缺陷被认为与前列腺癌密切相关。本研究进一步分析脂联素在前列腺癌组织中的表达及意义，现汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月-2020年6月在厦门医学院附属第二医院治疗的60例前列腺癌患者的病理组织作为A组（高分化、中分化、低分化各20例），年龄41～84岁，平均（67.3±9.6）岁；选取同期60例前列腺增生患者的病理组织作为B组，年龄43～85岁，平均（67.1±9.4）岁；选取同期60例健康体检者的前列腺组织作为C组，年龄40～85岁，平均（67.2±9.7）岁。所有A组患者均经病理组织检查确诊为前列腺癌；B组和C组患者均经前列腺B超、PSA和fPSA检测等排除前列腺癌；排除合并其他恶性肿瘤，近期使用过二甲双胍、抗雄药物，合并非酒精性脂肪肝病、糖尿病、心脑血管疾病、严重尿路感染等。本研究患者均知情同意，医院伦理委员会审批通过。对比三组一般资料差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

三组均进行病理组织脂联素检测。（1）试剂与仪器。兔抗人脂联素抗体（Anti-Adi-ponectin）购自北京奥博森生物技术公司；两步法免疫组织化学试剂盒、DBA显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司；IMAGE-proplus 5.1医学图像分析系统。（2）试验方法。脂联素表达用免疫组化法检测，制作4 μm厚连续切片石蜡标本，常规脱蜡至水，滴加3%H2O2液孵育5～10 min，阻断内源性过氧化物酶，用0.01 mmol/L、pH=7.4的PBS冲洗3 min，共冲洗3次。枸橼酸盐缓冲液0.1 mmol/L修复组织中脂联素，PBS冲洗3 min，共3次。滴加兔抗人Adiponec-tin多克隆抗体，37 ℃孵育2 h，PBS冲洗3 min，共3次。滴加二抗（鼠抗兔IgG/生物素），37 ℃温箱孵育30 min，PBS冲洗3 min，共3次。分别滴加50～100 pl新鲜配制的DBA溶液，在室温下，用光镜DBA显色10 min，蒸馏水充分冲洗。苏木素复染，酒精梯度脱水、透明、中性树胶封片[4]。（3）阴性对照。用0.01 mmol/L、pH=7.4的PBS液分别代替一抗、二抗用作每次染色的阴性对照。（4）结果判定。细胞质内有棕黄色颗粒，即判定为脂联素阳性细胞，表达强度用IMAGE-proplus 5.1医学图像分析系统组织光密度值测量程序测定，重新校正各平均光密度值[5]。

1.3 观察指标

记录三组间的脂联素表达水平，记录A组中高分化、中分化、低分化的脂联素表达水平；分析脂联素与BMI、Gleason 评分的相关性。

1.4 统计学处理

采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析，计量资料以（±s）表示，采用t/F检验，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，双变量相关性分析采用Pearson和Spearman相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组间组织中脂联素表达比较

A组脂联素表达水平明显低于B组和C组（P＜0.05），而A组中，高分化、中分化、低分化的脂联素表达水平差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 三组间组织中脂联素表达比较 （±s）

表1 三组间组织中脂联素表达比较 （±s）

组别 脂联素表达水平（平均光密度）A组 高分化（n=2 0） 0.2 0 8±0.0 3 2中分化（n=2 0） 0.1 9 2±0.0 2 3低分化（n=2 0） 0.1 9 0±0.0 2 8 F值 0.2 7 2 P值 ＞0.0 5 B组（n=6 0） 0.3 2 5±0.0 3 0 C组（n=6 0） 0.3 3 9±0.0 2 1 F值 2.8 4 5 P值 ＜0.0 5

2.2 不同BMI值及Gleason评分的脂联素表达比较

BMI≥30 kg/m2的脂联素表达水平明显低于BMI在25～29 kg/m2及＜25 kg/m2者，Gleason评分在2～4分者脂联素表达水平明显高于Gleason评分在5～7分和8～10分者（P＜0.05），见表2。

表2 不同BMI值及Gleason评分脂联素表达比较 （±s）

表2 不同BMI值及Gleason评分脂联素表达比较 （±s）

组别 脂联素表达水平B M I（n=6 0） ≥3 0 k g/m 2（n=2 0） 0.1 8 1±0.0 2 8 2 5～2 9 k g/m 2（n=2 0） 0.1 9 6±0.0 3 2＜2 5 k g/m 2（n=2 0） 0.2 5 1±0.0 2 7 F值 2.1 5 7 P值 ＜0.0 5 G l e a s o n评分（n=6 0） 2～4分（n=2 0） 0.2 1 7±0.0 2 6 5～7 分（n=2 0） 0.1 9 8±0.0 3 1 8～1 0 分（n=2 0） 0.1 8 5±0.0 2 4 F值 2.0 4 6 P值 ＜0.0 5

2.3 BMI值及Gleason评分与脂联素表达的相关性分析

组织脂联素的表达与BMI、Gleason评分呈负相关（r=-0.574，P＜0.001 ；r=-0.511，P＜0.001）。

3 讨论

前列腺癌是威胁男性健康的主要恶性肿瘤之一，随着我国人口老龄化、饮食结构的改变、诊断技术的提高等，前列腺癌的发病率和死亡率也明显上升。流行病学研究显示，肥胖、高BMI是前列腺癌的高危因素，与肿瘤细胞的侵袭和转移密切相关[6]。肥胖或超重患者的前列腺癌风险较高，且前列腺癌的侵袭性、病理分期、死亡率与Gleason评分呈正相关。但肥胖与前列腺癌在分子水平上的关系尚未完全明确[7]。

脂肪组织可分泌多种细胞因子，通过内分泌作用调节机体组织功能。脂联素是脂肪细胞合成分泌最多的一种细胞因子，可作用于机体靶器官，发挥抑制增殖、抗炎、胰岛素增敏、抗动脉粥样硬化、抑制肿瘤等多种功效[8]。在生理状态下，血清脂联素水平在0.5～30 μg/ml，而在肥胖、超重、胰岛素抵抗、代谢综合征等病理状态下，血清脂联素水平明显降低[9-10]。前列腺癌的发生发展与机体内环境和局部微环境的变化密切相关，浸润区的前列腺癌细胞可与微环境相互作用，导致癌细胞的远处转移。而血管形成是微环境改变的重要因素，脂联素可通过VEGF-A达到抑制血管生成，阻碍癌细胞远处转移，这给脂联素抗肿瘤提供了有力依据[11]。

本研究结果显示，A组脂联素水平明显低于B组和C组（P＜0.05），而A组中，高分化、中分化、低分化的脂联素水平相比差异无统计学意义（P＞0.05）；BMI≥30 kg/m2的脂联素表达水平明显低于BMI在25～29 kg/m2及＜25 kg/m2者，Gleason评分在2～4分者脂联素表达水平明显高于Gleason评分在5～7分和8～10分者（P＜0.05）；组织脂联素表达与BMI、Gleason评分呈负相关（r=-0.574，P＜0.001；r=-0.511，P＜0.001）。进一步证实前列腺癌组织中的脂联素表达明显降低，而肥胖者脂联素表达明显下调或缺失与机体内分泌调节失衡有关。Gleason评分也与脂联素表达有一定关联，说明前列腺癌恶性程度越高，脂联素表达越低，可作为临床评估病情严重程度和预后的标志[12]。

综上所述，脂联素在前列腺癌组织中的表达明显下降，与BMI及Gleason评分呈负相关，对肿瘤细胞的侵袭和转移有一定抑制作用，可作为临床诊断和治疗前列腺癌的新途径。