乌奴龙胆的挥发性成分分析*

顿珠次仁 裴欢欢 严志宏**

（1.西藏藏医药大学，西藏 拉萨 850000；2.江西中医药大学，江西 南昌 330004）

乌奴龙胆是龙胆科龙胆属植物乌奴龙胆（Genti⁃anaurnulaH.Smith）的全草，别名冈噶琼（藏名），主要分布于我国西藏、青海西南部等地。乌奴龙胆出处为《西藏常用中草药》，收录入《中药大辞典》，其中记载乌奴龙胆原形态为多年生草本，高3cm～5cm。叶密集对生，似轮生状；叶片扇形，全缘，无柄。花1～3 朵顶生，蓝紫色，并带有紫黑色条纹；萼管状，常5 裂，裂片扇形；花冠钟形，先端5 裂，裂片全缘；雄蕊5；子房上位。蒴果成熟时2瓣裂。

通过四种不同体系对乌奴龙胆乙醇提取物的各个极性部位体外抗氧化活性进行比较研究。结果表明，各极性部位对DPPH 自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除作用，也具有一定的还原能力。[1]藏药乌奴龙胆（GentianaurnulaH.Smith）（龙胆科）的全草中分离到5个新的环烯醚萜甙，命名为乌奴龙胆甙（gentioumoside）A-E。[2]

乌奴龙胆的性味为性寒，味苦，功能主治为清热解毒，止泻。治流感发烧，咽喉肿痛，黄疸，热性腹泻。用于血和赤巴合并症，木布病，血管闭塞病，中毒性发烧，热性腹泻，流行性感冒，咽喉肿痛，黄疸病等。乌奴龙胆中含有多种化学成分，包括醛类、烯烃、酮类、酯类物质等化学成分。目前国内外对乌奴龙胆挥发性化学成分研究较少，在指导藏药乌奴龙胆向中药应用方面具有一定的指导意义。

目前对挥发性成分化学成分提取和分析的方法主要有水蒸气蒸馏法、顶空固相微萃取（HS-SPME）、溶剂提取法、同时蒸馏萃取法、亚临界流体、超临界CO2萃取法等结合GC 或GC-MS。水蒸气蒸馏和溶剂萃取法等结合GC 或GC-MS 是分析中草药中挥发油的传统方法。但是它需要相对大量的样品，并且会造成部分分析物的损失，而HS-GC-MS的分析方法以分离和鉴定挥发油，此方法快速、准确，弥补了传统方法的不足。其中顶空分析作为一种无有机溶剂萃取的样品处理技术，通常与气相色谱-质谱（GC-MS）技术结合用来分析复杂基质中的挥发性有机物，具有快速、高效、环保、灵敏度高等特点，在常规分析中发挥着重要作用，在中草药中挥发油的分离和鉴定方面具有广阔的前景。

本课题首次采用HS-GC-MS 分析乌奴龙胆挥发性成分，分析时将干燥粉碎的药材装入顶空样品瓶中，经加热平衡后，取挥发性气体直接进入GC-MS 系统进行分析，减少了样品预处理的复杂操作，即避免一些化学成分加热分解、转化的可能，又可快速分析乌奴龙胆挥发性成分，为乌奴龙胆挥发性成分的进一步研究和产品开发提供科学依据。

1 实验仪器与药材

1.1 实验仪器

Agilent 7697A 自动顶空进样器、7890A 型气相色谱仪、5975C 单四极杆质谱仪（安捷伦公司，美国）；电子天平（型号YHC-11002B 瑞安市英衡电器有限公司监制）。20 ml顶空瓶（安捷伦公司，美国）。

1.2 药材

乌奴龙胆药材来自西藏。经西藏藏医药大学嘎务副教授鉴定为龙胆科龙胆属植物乌奴龙胆（Genti⁃anaurnulaH.Smith）。

1.3 样品制备

乌奴龙胆药材经过简单剪碎处理，再用分析称精密称取0.6g 的不同产地乌奴龙胆样品分别装入未使用过洁净的20 mL顶空瓶中密封，待测。

2 方法

2.1 顶空进样条件

样品用量为0.60g；样品瓶加热温度130℃；定量环温度140℃；传输线150℃；样品瓶加热时间为20 min；样品环平衡时间0.05 min；进样时间1min。

2.2 气相色谱条件

HP-5 毛细管柱型弹性色谱柱（0.25μm×250μm×30m）；载气：高纯氮气，纯度99.999%；柱流量1.0mL/min；分流进样，分流5：1；进样量1.0 mL，走两针，进样口温度为250℃；溶剂延时为3min。程序升温条件：初始温度为40℃（保持3min），以10℃/min 的速度升温至300℃（保持5min），

2.3 质谱条件

EI 离子源，电子能量70 e V；离子源温度230℃；传输线温度为280℃；四级杆温度为150℃；全扫描模式；扫描范围：m/z50～650。

2.4 数据处理

总离子流图中的各个峰经质谱扫描后得到质谱图，利用气相色谱数据处理系统通过NIST11.L 谱库检索并结合相关文献鉴定检测出的成分，对检出的峰按峰面积归一化法计算各成分在总挥发性成分中的相对百分含量。

3 检测结果

从乌奴龙胆中分离和鉴定出的成分个数为57种。总离子流图见图1，成分表见表1。

表1 乌奴龙胆中分离和鉴定的成分表

表1 （续）

图1 乌奴龙胆总离子流图

4 结论与讨论

采用顶空气相色谱-质谱联用的方法检测乌奴龙胆的挥发性成分，在检测并鉴定出的挥发性成分中，均以烯烃类成分为主，含量最高的是（+）-柠檬烯（45.055%），其他含量较高的成分还有γ-松油烯、左旋-alpha-蒎烯、α-松油醇、左旋-beta-蒎烯、4-异丙基甲苯，由此可知这6 种成分可能是其挥发性成分中的主要成分。

本次还从乌奴龙胆中新发现了异戊醛、香叶醇、柠檬醛、芳樟醇、无水醋酸钠、反式石竹烯、橙花醇、（Z）-3，7-dimethylocta-2，6-diena、germacreneD，1-meth⁃yl-5-methylene-8-（1-methylethyl）-1，6-cyclodecadi⁃ene、3-异丙基-6-亚甲基-1-环己烯、（E）-Β-罗勒烯、醋酸、松油烯、4-萜烯醇、罗勒烯等成分，为乌奴龙胆药材的挥发性成分的进一步研究和产品开发提供数据支撑。