柑橘提取物对黄羽肉鸡血浆和肝脏抗氧化功能及血浆免疫指标的影响

2021-07-22李贞明崔艺燕刘志昌杜宗亮马现永

饲料工业 2021年13期

■李贞明余苗崔艺燕容庭刘志昌杜宗亮马现永*

（1.广东省农业科学院动物科学研究所，畜禽育种国家重点实验室，农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室，广东省畜禽育种与营养研究重点实验室，广东广州 510640；2.清远市龙发种猪有限公司，广东英德 511500）

抗生素作为饲料添加剂可促进动物的生长，提高饲料转化率、减少疾病发生和降低死亡率等[1]。抗生素的使用极大地促进了畜禽养殖业的发展，但随着抗生素的长期使用和滥用，导致了细菌耐药性、环境污染和动物源食品药物残留等问题[2]。2020年起我国农业农村部正式实施194号公告，全面禁止药物饲料添加剂作为动物促生长剂应用于饲料中[3]。因此，研发绿色安全、无残留和无耐药性的抗生素替代品迫在眉睫。

植物提取物是指从植物中提取，活性成分明确、可测定、含量稳定，对动物和人类没有任何毒副作用，并已通过动物试验证明可改善动物生产性能的一类饲料添加剂的统称[2]。其以绿色安全、无污染、无残留和无耐药性等优势逐渐成为当今营养界的研究热点之一。大量研究表明，日粮中添加植物提取物不仅可提高畜禽机体的抗氧化能力，还可提高其机体的免疫功能[4-6]。中国是柑橘种植面积和产量最大的国家，国家统计局数据显示，2018 年我国柑橘种植面积达248.669 万公顷，产量达4 138.14 万吨。柑橘提取物富含黄酮类、有机酸和多糖类物质，具有抗菌消炎、抗病毒和抗氧化等功能[7-9]。前期研究发现，日粮添加10 mg/kg 的柑橘提取物可提高黄羽肉鸡的生长性能，促进免疫器官的发育，改善肉品质[2，10]。但是否可提高黄羽肉鸡血浆和肝脏的抗氧化能力以及血浆的免疫功能还不得而知。鉴于此，本试验通过在日粮中添加柑橘提取物，研究其对黄羽肉鸡血浆和肝脏抗氧化能力以及血浆免疫功能的影响，旨在为柑橘提取物在肉鸡生产中的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

柑橘提取物由广东某健康环保科技发展有限公司提供，是柑橘汁、柠檬汁、甘油和水的复合果汁，其中果汁含量为50%、总黄酮2.48%、有机酸2.38%。

1.2 试验设计及试验日粮

试验选用广东某科技股份有限公司提供的体重相近且健康的28日龄快大型黄羽肉鸡540只，按照体重随机分为3 组，每组6 个重复，每个重复30 只鸡。其中对照组饲喂无抗生素的玉米-豆粕型基础日粮，试验组分别在基础日粮中添加10 mg/kg 的杆菌肽锌（杆菌肽锌试验组）和10 mg/kg的柑橘提取物（柑橘提取物试验组，称量柑橘提取物，与基础日粮混匀后，制成颗粒料）。基础日粮参照NRC（1994）并结合中国农业行业标准《黄羽肉鸡仔鸡营养需要》（NY/T 33-2004）进行配制，并制成颗粒料。基础日粮组成和营养水平见表1。

表1 基础日粮组成及营养水平（饲喂基础，%）

1.3 饲养管理

正试期于2018 年2～3 月在广东省农业科学院动物科学研究所试验场进行。所有试验鸡采用4 层立体网上饲养，自由采食和饮水。正试期采取自然光照，其他按照常规饲养程序和免疫程序进行饲养和免疫。正试期记录每天的采食量，并观察试验鸡的健康状况。试验为期35 d。

1.4 样品收集

采用翅静脉采血，用EDTA-抗凝管采集10 mL血液，上下颠倒混匀后，2 000 r/min 离心10 min 分离血浆，分装后置于-20 ℃冰箱保存，用于检测血液相关指标。然后颈静脉放血致死，之后解剖，取肝脏组织，并于-80 ℃冰箱保存，用于检测肝脏相关指标。

1.5 血浆抗氧化指标检测

按照试剂盒说明检测黄羽肉鸡血浆中过氧化氢酶（CAT）、总氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.6 肝脏抗氧化指标检测

取部分肝脏组织剪碎，用10倍体积（V/W）的4 ℃生理盐水稀释，在冰浴条件下匀浆，然后4 ℃条件下，4 000 r/min 离心20 min，取上清分装保存于-80 ℃冰箱待测。按照试剂盒说明检测黄羽肉鸡肝脏中TAOC、T-SOD、GSH-Px 活性和MDA 含量，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.7 血浆免疫指标检测

按照试剂盒说明检测黄羽肉鸡血浆中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和干扰素-γ（INF-γ）的含量，试剂盒均购自北京方程生物科技有限公司。

1.8 数据处理

血浆抗氧化、肝脏抗氧化和血浆免疫的结果数据以单一鸡个体为统计单位，采用SPSS 18.0统计软件中单因子方差分析(one-way ANOVA, LSD)方法进行统计分析，当P<0.05时使用Duncan's法多重比较检验。所有数据均表示为“平均值±标准误”，P<0.01表示差异极显著，P<0.05表示差异显著，P>0.05表示差异不显著。

2 结果与分析

2.1 饲粮添加柑橘提取物对黄羽肉鸡血浆和肝脏抗氧化功能的影响(见表2、表3)

表2 饲粮添加柑橘提取物对黄羽肉鸡血浆抗氧化功能的影响

表3 饲粮添加柑橘提取物对黄羽肉鸡肝脏抗氧化功能的影响

由表2 可知，与对照组和杆菌肽锌组相比，柑橘提取物组肉鸡血浆中T-AOC 的活力显著提高，分别提高了33.88%和40.63%（P<0.05）。与对照组和杆菌肽锌组相比，柑橘提取物组肉鸡血浆中GSH-Px 的活力极显著提高，分别提高了10.58%和6.59%（P<0.01）。各组间的CAT、T-SOD 和MDA 均无显著性差异（P>0.05）。

由表3 可知，与对照组和杆菌肽锌组相比，柑橘提取物组黄羽肉鸡肝脏中T-AOC 的活力显著提高，分别提高了25.25%和22.22%（P<0.05）。与对照组和杆菌肽锌组相比，柑橘提取物组黄羽肉鸡肝脏中MDA 的含量显著降低，分别降低了45.45%和43.75%（P<0.05）。各组间的T-SOD 和GSH-Px 均无显著性差异（P>0.05）。

2.2 饲粮添加柑橘提取物对黄羽肉鸡血浆免疫功能的影响(见表4)

表4 饲粮添加柑橘提取物对黄羽肉鸡血浆免疫功能的影响

由表4 可知，与对照组相比，柑橘提取物组黄羽肉鸡血浆中IgA 的含量显著提高，而IL-6 的含量显著降低，IgA 的含量提高了85.85%，IL-6 的含量降低了23.68%（P<0.05）。与对照组相比，杆菌肽锌组和柑橘提取物组黄羽肉鸡血浆中IL-8 的含量极显著降低，分别降低了35.48%和38.42%（P<0.01）。各组间的IgG、IgM、IL-10、TNF-α和INF-γ均无显著性差异（P>0.05）。

3 讨论

3.1 饲粮添加柑橘提取物对黄羽肉鸡血浆和肝脏抗氧化功能的影响

动物机体内的抗氧化系统主要分为非酶类和酶类两种抗氧化系统，非酶类主要包括谷胱甘肽和维生素类；酶类主要包括CAT、SOD 和GSH-Px 等[11]。评定动物机体的抗氧化能力，除了检测上述几种酶在血浆和肝脏中的活性，还可通过检测其过氧化产物（MDA）的含量和机体综合抗氧化能力（T-AOC）来评定[12]。T-AOC 是衡量动物机体的抗氧化能力的综合指标；GSH-Px 是动物机体细胞内氧化自由基和过氧化的清除剂；MDA 是脂质过氧化的终端产物，可反应动物机体的脂质过氧化的程度[8,13]。崔艺燕等[14]研究发现，日粮中添加300 mL/t 的柑橘提取物可提高仔猪的抗氧化能力。而试验前期研究结果也发现，柑橘提取物可提高黄羽肉鸡肌胸肉的抗氧化能力，提高肉品质[5]。试验结果显示，日粮中添加柑橘提取物可提高黄羽肉鸡血浆中T-AOC 和GSH-Px 的活性；提高黄羽肉鸡肝脏中T-AOC 的活性，降低MDA 的含量。也就是说，日粮中添加柑橘提取物可提高黄羽肉鸡机体的抗氧化能力，这与试验前期研究结果[5]以及崔艺燕等[14]的研究结果一致。前人研究表明，黄酮类、有机酸和多糖等活性物质具有较强的抗氧化能力[15-17]。柑橘提取物中含有大量的黄酮类、有机酸和多糖等活性物质，因此，柑橘提取物可提高黄羽肉鸡机体的抗氧化能力与其富含的活性物质有关，但具体作用机制还需进一步研究。

3.2 饲粮添加柑橘提取物对黄羽肉鸡血浆免疫功能的影响

IgA 是免疫细胞分泌的一种免疫球蛋白，其含量的高低反映了机体免疫力的强弱；IL-6 和IL-8 是免疫细胞分泌的一种细胞因子（促炎因子），具有调节炎症反应和免疫应答等作用，其含量的高低反映了机体的免疫情况[18-20]。崔艺燕等[21]研究发现，日粮中添加300 mL/t 的柑橘提取物可增强仔猪的免疫力。而本试验前期研究发现，柑橘提取物可提高黄羽肉鸡肠道屏障功能，改善肠道环境，从而提高黄羽肉鸡机体免疫力[22]。试验结果显示，日粮中添加柑橘提取物可提高黄羽肉鸡血浆中IgA的含量，并降低IL-6和IL-8的含量，也就是说，柑橘提取物可提高黄羽肉鸡机体的免疫力，这与试验前期研究结果以及崔艺燕等[21]的研究结果一致。张明[23]研究发现，黄酮类物质可提高肉鸡血清中IgA 的含量，并抑制IL-8 的表达，增强肉鸡机体的免疫力。也有研究表明，黄酮类和多糖等活性物质具有抗菌消炎、抗病毒等作用，但其潜在机制并不清晰[2]。可能是黄酮类和多糖等活性物质进入动物机体后，与辅助型T 细胞2（Th2）类细胞进行特异性结合，进一步激活Th2 类细胞分泌抗炎因子，并抑制促炎因子的分泌；同时辅助B 细胞，激活体液免疫，产生IgA等免疫球蛋白，从而提高动物机体的免疫力[24-26]。柑橘提取物中富含黄酮类和多糖等活性物质，可能是其富含的活性物质激活了黄羽肉鸡的免疫系统，从而增强了黄羽肉鸡机体的免疫力。