急性心肌梗死患者血清微小RNA-133a的表达及临床意义

张敏，李阳春，雷蓉，吕湛

急性心肌梗死（AMI）是指各种原因导致的冠状动脉（冠脉）血管堵塞，引发局部心肌缺血、缺氧、坏死，导致心脏泵血功能急剧下降，严重威胁患者生命。随着社会生活模式的转变，AMI的发病率、死亡率逐年上升且呈年轻化趋势，及早诊治和预防是现阶段临床工作的重点[1]。目前，AMI评估采用肌钙蛋白、肌酸激酶等心肌损伤标志物，但此类指标在胸痛发作数小时后才可被检测，且特异性较差。近年来，基因组学发展迅速，越来越多微小RNA家族成员被用于心血管疾病的研究，其中微小RNA-133a（miR-133a）是学者们的重点关注对象，其在心肌细胞中特异性表达，可能参与了心力衰竭、心肌纤维化、心肌重塑及梗死心肌新生血管形成等病理过程[2]。已有学者证实miR-133a对心肌梗死早期诊断具有一定应用价值[3]，但具体机制不清。本研究通过分析AMI患者血清miR-133a的表达及临床意义，以期为AMI的诊治及预防提供帮助。

1 对象与方法

1.1 研究对象选取2018年1月至2019年12月于川北医学院附属医院随诊的AMI患者321例为研究对象（AMI组）。入组标准：发病至入院时间不超过6 h；AMI的诊断符合美国心脏病学院及心脏病学会颁布的AMI相关诊断标准[4]；临床资料完整；自愿进入本研究。排除标准：既往心血管疾病或心血管疾病治疗史；感染性疾病；恶性肿瘤；肝、肾等重要器官功能障碍；血液系统及免疫性疾病。另选取同期门诊体检的健康者100例为对照组（CON组）。患者均签署知情同意书，本研究已获我院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集患者一般资料，包括年龄、性别、吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、冠心病家族史、脑卒中、体质指数（BMI）、血压、左室射血分数（LVEF）等。

1.2.2 生化指标采集入组对象空腹静脉血10ml，静置5 min，经3000转/min离心15 min（离心半径14 cm），置于-20℃冰箱中备用。使用SYSMEXBX-5000全自动生化检测仪（日本，希森美公司）检测生化指标：心肌肌钙蛋白（cTnI）、肌酐（Scr）、脑钠肽（BNP）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、空腹血糖（FBG）。

1.2.3 miR-133a检测采集患者静脉血10 ml，2 h内分离血清，使用定量聚合酶链反应检测血清miR-133a水平，步骤包括：总RNA提取-逆转录-PCR扩增。逆转录试剂盒购于Takara公司（日本），引物由生工生物工程有限公司提供（上海），引物序列：上游（5'-CGCCGGTTACTGA GACACATTC-3'）、下游（5'-TGCAGATCGAAT ATTCCAGCATAC-3'）。miR-133a的PCR判读：ΔCt=样品Ct均值-内参Ct均值，以2-ΔCt表示基因的相对表达量。

1.2.4 冠脉钙化评分患者行冠脉造影后，使用Gensini评分系统[5,6]对冠脉病变狭窄程度进行定量评分：以最狭窄处为标准，狭窄直径1%～25%记1分，26%～50%记2分，51%～75%记4分，76%～90%记8分，91%～99%记16分，完全闭塞记32分。病变血管权重：左主干为5，前降支：近段为2.5，中段为1.5；对角支：D1为1，D2为0.5；回旋支：近段为2.5，远段及后降支均为1，后侧支为0.5；右冠：近、中、远段和后降支均为1。各病变血管积分为评分与权重之积，总积分为各病变血管积分之和，积分越高病变越重。

1.3 统计学方法本研究数据使用SPSS 23.0进行分析。计量资料符合正态分布使用均值±标准差表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料使用例（构成比）表示，组间差异使用χ2进行分析。使用Pearson相关分析miR-133a与AMI相关指标的相关性，应用Logistic回归分析AMI的危险因素，采用受试者工作特征曲线（ROC）检测miR-133a对AMI的诊断效能。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清miR-133a及一般资料比较AMI组患者血清miR-133a、TC、BNP、cTnI、CKMB、Gensini评分、年龄、高血压及冠心病比例明显高于CON组，而LVEF明显低于CON组（均P＜0.05）；两组患者在性别、吸烟、饮酒、糖尿病、脑卒中、BMI、收缩压、舒张压、FBG、TG、LDL、HDL、Scr等方面比较，无明显差异（P＜0.05），表1。

表1 两组miR-133a水平及一般资料比较

2.2 血清miR-133a水平与AMI指标的相关性Pearson相关分析显示AMI患者血清miR-133a水平与cTnI（r=0.673，P＜0.001）、CK-MB（r=0.768，P＜0.001）、Gensini评分（r=0.772，P＜0.001）均呈明显正相关，与LVEF（r=-0.667，P＜0.001）呈明显负相关，相关性趋势图见图1。

图1 血清miR-133a水平与AMI相关指标的相关性

2.3 AMI发病的危险因素分析Logistic回归分析显示miR-133a（OR=1.924）、年龄（OR=1.874）、高血压（OR=3.696）、冠心病家族史（OR=2.758）及Gensini评分（OR=1.674）均为AMI发病的危险因素（P＜0.05），表2。

表2 AMI发病的危险因素分析

2.4 血清miR-133a对AMI的诊断价值分析miR-133a诊断AMI的ROC曲线下面积为0.872（95%CI：0.796～0.896，P＜0.001），约登指数、敏感度、特异度分别为0.722、88.16%和84.00%。ROC曲线见图2。

图2 血清miR-133a诊断AMI的ROC曲线

3 讨论

AMI是常见的心血管急重症之一，是冠心病的严重类型，临床表现为急性胸痛、胸闷，甚至致死性心律失常、心力衰竭而导致猝死。AMI早期行缺血心肌再灌注，可明显改善患者预后，这对AMI诊断的及时、准确性提出了更高的要求[7]。心肌细胞缺氧坏死后，CK-MB、cTnI、BNP等心肌损伤标志物释放入血，与既往研究相符[8]，此类指标对AMI的早期诊断做出了较大贡献，但在疾病早期其敏感度欠佳，峰值出现多在患者发病数小时后，对于时间就是生命的AMI患者来说极为不利[8]。

miRNA是一系列高度保守、长度在18～23个核苷酸间的非编码核糖核酸，通过与目标mRNA中的特异性序列结合，对靶基因转录后的翻译和修饰进行调控，可维持靶基因的稳定性，在细胞分化、生长及程序性调亡等过程中起到重要作用[9]。不同状态下的miRNA具有组织和细胞特异性，释放入血后可保持稳态，这为AMI早期诊断提供了新思路。miR-133a是一种具有横纹肌组织表达特异性的miRNA，在心肌和骨骼肌中广泛表达，参与了心脏发育、心律失常、心肌肥厚及心肌调亡等病理生理过程，研究发现miR-133a可能是调节心肌缺血应激损伤后心脏适应性的重要因子[10,11]。Gacoń等[12]研究发现，病变冠脉闭塞的心肌梗死患者血清miR-133a水平是病变冠脉未闭塞患者的7倍，但CTnI的表达无明显差异，提示miR-133a可较好反应患者的病情程度。唐冬娟等[13]研究显示，AMI患者血清miR-133a水平显著升高，与CK-MB、cTnI、Gensini评分呈正相关，且对AMI和30 d内不良心血管事件的发生均有较好的诊断价值，说明miR-133a与冠脉病变程度及预后具有一定相关性。冯俊等[14]报道证实，丹参酮Ⅱ可激活MAPK ERK1/2通路上调miR-133a的表达，增强心肌细胞的抗低氧损害、较少低氧导致的心肌细胞调亡。Xu等[15]研究显示，miR-133a在蛋白和基因水平抑制Caspase-9的表达，Caspase-9是一种蛋白质切割酶，可造成细胞凋亡，增加miR-133a水平有利于细胞的生存。还有研究[16]显示，TAGLN2是miR-133a的潜在目的基因之一，TAGLN是一种肌动蛋白结合蛋白，可与肌动蛋白纤维结合参与其聚合和降解，具有稳定和调节细胞骨架、维持细胞正常运动等作用，上调miR-133a可能促进TAGLN2的分泌，间接保护心肌。上述研究均提示miR-133a的上调可能发挥增强心肌细胞抗损伤、抑制调亡等重要生理作用。

理想生物学标志物，不仅可准确判断病情严重程度，且对疾病预测具有较高敏感性和特异性。本研究分析发现，AMI患者血清miR-133a与心肌损伤标志物、冠脉钙化评分、心功能均具有较好的相关性，miR-133a可作为AMI的独立危险预测因素。进一步分析发现其诊断AMI的敏感性、特异性及准确度较高，证实了miR-133a与AMI患者心肌损伤、病变严重程度具有较好的量化关系，可作为预防和早期干预AMI的标志物之一，与既往研究相符[12-15]。此外，本研究还发现年龄、高血压、冠心病家族史及Gensini评分均是AMI的危险因素，AMI的发生与个体差异、遗传等因素相关，上述因素也是较为明确的AMI危险因素，临床中对于此类患者应及早制定相关措施，以减少不良心血管事件的发生。

综上所述，AMI患者血清miR-133a的表达水平明显升高，且对AMI的预测和诊断价值较高，可为AMI的早期诊治提供新思路。