改良涂片法复核血小板计数减少

关丽君

辽宁省沈阳市妇婴医院检验科，辽宁沈阳 110011

血小板是血液有形成分之一，是出血后止凝血的重要参与者，因此，快速而准确地判定血小板减少可为临床诊治血小板减少相关疾病提供有利帮助。目前，临床上计数血小板的方法主要有血小板电阻抗法(PLT-I)、血小板光学法(PLT-O)、血小板荧光法(PLT-F)及显微镜法(PLT-M)[1]。前3种都属于仪器法，具有重复性好、检测速度快、精密度高等优点，但是当仪器检测血小板出现异常血小板的情况时，各计数方法间差异较大，仍需使用PLT-M进行复核，因此，PLT-M是世界卫生组织推荐的具有较高精确度的血小板计数“金标准”[2-3]。但传统的PLT-M操作步骤相对繁琐，影响因素较多，对于血小板计数极低的危急重症患者结果回报耗时较长。因此，为更有效地争取临床诊治时间，笔者在此基础上建立改良涂片法进行复核血小板减少的标本。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集本院2015年3-12月门诊及住院患者血常规结果血小板<100×109/L的94份标本，所得血小板计数为A组。其中男4例，女90例，年龄2 d至80岁；主要集中于22～36岁，以孕产妇为主(72例)。

1.2仪器与试剂 迈瑞BC-6800全自动血液细胞分析仪及原装配套试剂，仪器按要求维护保养、校准、质控、参与室间质评确保仪器稳定可靠，OLINPUS CX31显微镜，改良Neubauer计数板，珠海贝锁生物技术有限公司提供刘氏染色液A液、B液，血小板计数稀释液等。

1.3方法

1.3.1传统目视计数法计数 根据《临床检验基础》复检规则要求，对仪器检测血小板<100×109/L的94份标本即时进行传统目视计数法计数[4-5]，所得相应血小板计数为B组。

1.3.2改良涂片法计数

1.3.2.1改良血涂片制备和染色 将仪器检测血小板<100×109/L的94份血常规标本即时制备成血涂片[6]，制备过程需注意将血滴0.05 mL调整为10 μL，推片角度要依据血细胞比容(HCT)做相应调整，即HCT越大推片角度应越小，按照刘氏染液操作说明进行刘氏染液染色，以备镜检。

1.4统计学处理 利用SPSS21.0统计软件进行统计学分析。非正态分布的计量数据以M(P25，P75)表示，组间比较采用秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1筛选标本 94份血细胞分析仪检测结果显示，血小板<100×109/L的标本经手工复核发现，其中6例为假性血小板减少(其中5例为血小板聚集，1例为巨大血小板，经采集末梢血预稀释模式下检测及显微镜复核后血小板均在正常范围)，余88例为真性血小板减少。

2.2秩和检验分析 88份真性血小板减少标本采用上述3种方法计数血小板，A组为83.500(61.500×109/L，91.750×109/L);B组为84.000×109/L(67.250×109/L，92.000×109/L)；C组为83.000×109/L(66.250×109/L，92.000×109/L)。A、B、C 3组结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

血小板减少包括假性减少和真性减少，血小板假性减少主要由于穿刺不顺、输入血液制品、乙二胺四乙酸依赖、脂血及药物的影响等[8]；血小板真性减少主要由于如恶性血液系统疾病、自身免疫性疾病、感染、药物、妊娠晚期等原因导致的生成减少、消耗或破坏增加、血液稀释等[9-10]。作为妇产专科医院的医生，笔者比较关注妊娠期血小板减少，妊娠期血小板减少是常见的仅次于妊娠期贫血的血象异常合并症[11-12]。引起妊娠期血小板减少的病因很多，无论哪种病因都提示，可能发生妊娠期女性血栓栓塞、产科出血、内脏出血，新生儿早产、凝血异常等不良母婴结局[11,13-14]，因此，为临床提供快速而准确的血小板计数结果，是检验科医生不可推卸的重要职责。

目前，随着检测技术的不断进步，血小板计数方法多种多样[1]，其复核方法亦层出不穷。众多研究显示，PLT-O、PLT-F可对PLT-I检测出的血小板减少标本进行复核[15-17]，其中PLT-O已被广泛用于复核PLT-I检测异常结果[18]；此外，还有自动血细胞形态分析系统复核法[19]，但是仪器复核方法成本都相对较高，且对于血小板聚集的标本，仍需采用人工镜检法进行确认[15-16]。有研究显示，脂肪乳注射液(C14-24)输注后的标本经PLT-I提示低值后用PLT-O复核，结果显示正常，其原因在于脂肪乳颗粒在体内分解代谢成血小板体积的大小，经核酸荧光染料染色后会呈现与血小板类似的荧光强度，易被仪器误认成血小板而进行计数[20]。因此，仪器复核法不仅费用高，且对血小板聚集和脂肪乳干扰等特殊情况的标本仍需结合手工复核方法进行确认。手工复核方法除了传统的目视计数法外，现有高倍镜估测法[21]、血小板与红细胞/白细胞比值法[22-23]、R值估测法[24]。传统的目视计数法为手工复核的“金标准”，但是操作步骤繁琐，耗时较长，整个复核过程在15～20 min，并且对于疑似血小板聚集的标本仍需涂片观察确认；其余几种方法都未被广泛应用于临床，可能仍存在一些问题有待解决。为此，本研究针对血小板减少标本，结合众多手工复核方法建立改良涂片法进行复核，结果显示，改良涂片法可成功复核血小板减少标本，计数结果与传统目视计数法比较差异无统计学意义(P>0.05)。该方法从制备血涂片到镜检结束耗时约5 min，并且镜检的同时可观察是否有血小板聚集、巨大血小板、红细胞碎片等干扰因素存在。改良涂片法可大大弥补传统复核方法的不足，能够提升回报血小板复核结果的速度，为危急重症患者的抢救争取时间。但是用此方法复核时应注意：(1)复核人员要具备快速制备血涂片的能力及扎实的形态学基础；(2)要结合HCT调整推片的角度；(3)计数视野下红细胞应均匀分布且不重叠，计数的视野数应≥10个；(4)由于是主观判断，人员间差异可能相对较大，因此实验室要定期进行人员间比对等。

综上所述，任何一种血小板复核方法都不存在绝对的优势，本研究有效地将传统手工复核方法与血涂片复核方法的结合，成功地建立改良涂片法复核血小板减少标本，在提高准确回报血小板结果速度的同时节约了检测成本，为临床及时诊治血小板减少及相关疾病提供了可靠有利的依据，为检验科工作提供了便利。作为妇产特色专科医院，及时准确地回报血小板结果，对血小板减少的母婴来说有可能是改善不良结局的重要前提之一。本研究的不足在于纳入标本数量相对较少，有待于扩大标本量做进一步验证。