miRNA-1290在胃癌患者血清中的相对表达水平及临床意义

刘 倩，段 莎

陕西省人民医院消化二科，陕西西安 710068

近年来随着人们生活方式的改变，胃癌发病率呈逐年上升趋势[1]。早期胃癌无明显症状，约80%的胃癌患者在确诊时就已经处于晚期，其治疗手段以手术切除为主，但预后较差，5年生存率不足10%[2]，因此，提高患者早期诊断率对患者预后具有重要意义。微小RNA(miRNA)是新发现的一类小分子非编码RNA，在肿瘤细胞的分化、增殖、凋亡、周期调控等过程中发挥重要作用。有研究表明，miRNA-1290与肿瘤的发生、发展过程联系密切[3]，但关于其在胃癌中相对表达水平情况的研究较少。本文旨在探究miRNA-1290在胃癌患者体内的表达情况，为临床胃癌早期诊断寻找新的标志物，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年3月至2020年9月本院消化内科收治的64例胃癌患者作为胃癌组，其中男41例，女23例；年龄42～78岁，平均(58.79±7.35)岁；肿瘤分期(TNM)：Ⅰ期15例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期12例；肿瘤直径<5 cm 30例，肿瘤直径≥5 cm 34例；分化程度：低分化21例，中分化24例，高分化19例。另选取同时间段在本院进行体检的64例健康者作为对照组，男40例，女24例，年龄40～78岁，平均(57.84±7.42)岁。纳入标准：(1)符合胃癌临床诊断标准[4]；(2)经胃镜检查和病理活检确诊；(3)纳入研究前未接受化疗、放疗和免疫治疗等抗肿瘤治疗；(4)签署该项研究的知情同意书。排除标准：(1)合并其他部位肿瘤者；(2)出现其他脏器转移者；(3)患有血液病、免疫系统疾病或结缔组织疾病者；(4)心、肝、肾等脏器功能严重损伤者；(5)急慢性感染者；(6)临床资料缺失者。本研究获得本院伦理委员会批准。

1.2研究方法

1.2.1标本采集 健康体检者于体检时进行血液标本采集。所有胃癌患者采集血液标本，取清晨空腹静脉血3 mL，放入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中备用，常温环境下使用离心机离心10 min(转速3 000 r/min，离心半径13.5 cm)，将上清液取出，放入无RNA酶的管中，4 ℃环境下再次离心10 min(转速12 000 r/min)，用新的离心管保存上清液，于-80 ℃环境下保存。

1.2.2仪器与试剂 反转录试剂盒(购自美国Thermo公司)，Trizol试剂(购自美国Thermo公司)，实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)仪(购自美国PE公司)，qRT-PCR试剂盒(购自美国Invitrogen公司)。

1.2.3血清miRNA-1290相对表达水平计算 取血清标本，加入1 mL TRIzol提取剂，提取总RNA，并进行测定。采用qRT-PCR反转录试剂盒对提取的总RNA进行反转录反应，先加水将RNA稀释至2 ng/μL，再加入反转录溶液，16 ℃环境下反转录60 min、42 ℃环境下反转录30 min、85 ℃环境下反转录10 min，对反转录得到的cDNA进行冷却处理及常规稀释，将cDNA于-20 ℃保存。取2 μL cDNA标本作为PCR定量检测模板，在qRT-PCR反应仪上进行PCR反应，PCR扩增条件：95 ℃预变性3 min，95 ℃变性5 s，61 ℃延伸30 s，35个循环。采用2-△△Ct法计算血清中miRNA-1290相对表达水平。

1.3观察指标 (1)比较胃癌组及对照组血清miRNA-1290相对表达水平；(2)分析miRNA-1290相对表达水平与患者临床特征的关系；(3)分析胃癌组血清miRNA-1290相对表达水平对胃癌的诊断价值。

2 结 果

2.1胃癌组及对照组血清miRNA-1290相对表达水平比较 qRT-PCR检测结果显示，胃癌组血清miRNA-1290相对表达水平为4.58±0.54，明显高于对照组的(1.17±0.35)，差异有统计学意义(t=42.393，P<0.001)。

2.2胃癌患者miRNA-1290相对表达水平与临床特征的关系 不同TNM分期、淋巴结转移情况、分化程度、肿瘤直径胃癌患者血清miRNA-1290表达水平差异有统计学意义(P<0.05)；不同性别、年龄、病理类型胃癌患者血清miRNA-1290相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 胃癌患者miRNA-1290相对表达水平与临床特征的关系

续表1 胃癌患者miRNA-1290相对表达水平与临床特征的关系

2.3胃癌患者血清miRNA-1290相对表达水平对胃癌的诊断价值 ROC曲线显示，miRNA-1290诊断胃癌的灵敏度为91.4%，特异度为87.3%，AUC为0.816(95%CI=0.691～0.942，P<0.05)，最佳截断值为4.92。见图1。

图1 血清miRNA-1290对胃癌诊断价值的ROC曲线

3 讨 论

胃癌指源于胃黏膜上皮细胞的恶性肿瘤，主要为胃腺癌，发病率较高，具有早期诊断率低、复发率高的特点，寻找有效地早期诊断方法对改善患者预后具有重要意义[5-7]。miRNA是一类内源性非编码RNA，一般由18～25个核苷酸组成，在生命过程中主要通过与靶基因核糖体RNA(mRNA)3′端非编码区互补配对，抑制翻译过程发挥作用[8]。许丽芳等[9]研究中指出，miRNA参与个体发育，在细胞分化、增殖、侵袭、吸附、凋亡等方面具有重要的调控作用，miRNA异常调控常伴随基因突变、缺失、DNA甲基化水平异常等表观遗传学的改变，这些基因表观遗传学的改变与肿瘤的发生及发展存在密切联系[10-11]。

miRNA包括抑癌和促癌两大类，抑癌miRNA一般在肿瘤细胞中表达较低，主要作用是促进细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭后转移；促癌miRNA一般在肿瘤细胞中高表达，作用是抑制细胞凋亡，促进肿瘤细胞的增殖、侵袭后转移[11-12]。miRNA-1290是miRNA中的一个重要组成分子，有研究发现，miRNA-1290在肝癌、肺癌、宫颈癌、胃癌患者中的相对表达水平异常升高，可能成为肿瘤早期诊断及预测预后的一项重要标志分子[13]。本研究发现，胃癌患者血清miRNA-1290相对表达水平明显高于健康人，提示miRNA-1290在胃癌的发生、发展过程中发挥了重要作用[14-15]。通过观察胃癌患者miRNA-1290相对表达水平与不同临床特征的关系发现，不同TNM分期、淋巴结转移情况、分化程度、肿瘤直径胃癌患者血清miRNA-1290相对表达水平差异有统计学意义(P<0.05)；不同性别、年龄、病理类型胃癌患者血清miRNA-1290相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。提示miRNA-1290的相对表达水平与胃癌的进展程度有关[16-17]。ROC曲线显示，AUC为0.816，miRNA-1290诊断胃癌具有较高的灵敏度和特异度，可作为临床胃癌早期诊断及判断患者预后的靶基因。miRNA-1290能够抑制细胞凋亡，促进胃癌细胞的增殖、分化及转移，可能与调控某种基因有关，具体作用机制有待进一步研究[18]。

综上所述，miRNA-1290在胃癌患者血清中相对表达水平升高，对胃癌具有一定的诊断价值，可作为胃癌早期诊断的一项重要分子标志。