性别决定区Y框蛋白2、含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5在宫颈癌中的表达及与临床病理特征的关系分析

刘 铭，吴坤英，郭宝芝，宋芷霜，张 青，李新敏

(1.郑州市妇幼保健院妇产科 河南 郑州 450053；2.郑州市妇幼保健院病理科 河南 郑州 450053)

宫颈癌属女性生殖系统常见恶性肿瘤，好发于30～55岁女性，在全球范围内每年约有50万宫颈癌新发病例，占所有新发恶性肿瘤患者的5%左右，同时每年病死患者约21万，我国每年约有13万宫颈癌新发病例，约占所有宫颈癌新发病例27%，且呈现出发病率逐渐升高及发病人群年轻化趋势，对我国女性生命安全构成严重威胁[1-3]。同时，宫颈癌起病较隐匿，大部分患者于疾病确诊时已处于中晚期，存在转移症状，治疗难度大，预后差，远期生存率低[4-5]。探寻一种宫颈癌早期诊断及病情评定方法对提高疾病早期确诊率、指导临床进行及时科学治疗、提升患者生存率尤为重要。性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y box 2，Sox-2)为重要转录因子之一，于胚胎干细胞保持自我更新和多向性发展中具有重要作用，对维持胶质瘤祖细胞遗传特性和增殖中也扮演着重要角色，其表达异常与食管癌、乳腺癌、肺癌等多种恶性肿瘤发生、进展密切相关[6]。含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(leucine repeat containing G-protein coupled receptor 5，Lgr5)为小肠和毛囊等成体组织敏感干细胞标志物，在基底细胞癌、肝癌、结直肠癌等多种类型恶性肿瘤组织均有高表达[7]。本研究以免疫组化S-P法检测74例宫颈癌、39例宫颈上皮内瘤变及36例正常宫颈组织石蜡包埋标本Sox-2、Lgr5蛋白表达情况，旨在分析两者表达和宫颈癌患者肿瘤分化程度等病理参数的关系，以期为临床诊断、病情评价及基因靶向治疗提供一定参考。报道如下。

1 资料及方法

1.1 一般资料收集2016年3月至2017年9月我院经病理检查证实的74例宫颈癌、39例宫颈上皮内瘤变及36例正常宫颈组织石蜡包埋标本，标本均源自行手术切除治疗且经病理检查证实的宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及子宫肌瘤患者。纳入标准：1)术前均未采取放化疗及免疫治疗；2)临床资料完整；3)术后经病理检查证实为宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及子宫肌瘤。排除标准：1)心、肾、肝、肺等脏器存在器质性病变者；2)合并其他类型恶性肿瘤者；3)合并精神系统疾病、血液系统疾病及认知功能障碍者；4)哺乳、妊娠期女性；5)无法配合完成随访者。其中宫颈癌患者年龄24～79(45.31±8.92)岁；体质量40～86(55.27±7.06)kg；病理类型：腺癌19例，鳞癌55例；肿瘤分化程度：低分化39例，高、中分化35例；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期44例；浸润深度：T1～T222例，T3～T452例；淋巴结转移：有淋巴结转移50例，无淋巴结转移24例。宫颈上皮内瘤变患者年龄25～78(44.60±8.13)岁，体质量41～88(55.62±6.84)kg。子宫肌瘤患者年龄23～77(45.02±8.37)岁，体质量42～89(56.14±6.72)kg。3组患者年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究已经获得医院伦理委员会的审核同意。

1.2 方法Sox-2、Lgr5蛋白表达检测方法：将石蜡包埋组织标本实施切片，应用免疫组化S-P法检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织中Sox-2、Lgr5蛋白表达，检测试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，严格按试剂盒说明实施操作，所有操作均由同一组病理科医师完成，将已知抗体阳性标本设为阳性对照，PBS代替一抗设为阴性对照。

结果判断方法：每张切片以随机方法选择4个高倍镜视野，每个视野计数约200个细胞，依据阳性细胞百分比和细胞染色程度综合施行结果判定。阳性细胞百分比>50%计为3分，26%～50%计为2分，6%～25%计为1分，≤5%计为0分；染色程度：棕褐色计为3分，棕黄色计为2分，淡黄色计为1分，不着色计为0分。将上述2项评分相乘得出综合评分，评分为9分判定为强阳性(+++)，6～8分判定为阳性(++)，2～5分判定为弱阳性(+)、不足2分判定为阴性(-)，将强阳性、阳性、弱阳性均归入阳性结果[8]。

1.3 观察指标比较观察宫颈癌、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织标本Sox-2、Lgr5蛋白表达情况，并分析Sox-2、Lgr5蛋白表达和宫颈癌患者性别、体质量、病理类型、肿瘤分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移的关系。

1.4 统计学处理采用SPSS 24.0处理相关数据，计数资料用百分数表示，比较用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 宫颈癌、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中Sox-2、Lgr5蛋白表达比较Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率分别为77.03%、79.73%，均高于宫颈上皮内瘤变组织(38.46%、41.03%)和正常宫颈组织(5.56%、2.78%)，差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

表1 宫颈癌、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中Sox-2、Lgr5蛋白表达比较 n(%)

2.2 Sox-2、Lgr5蛋白表达与宫颈癌患者性别、体质量的关系Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率与患者性别、体质量均无关(P均>0.05。见表2。

表2 Sox-2、Lgr5蛋白表达与宫颈癌患者性别、体质量的关系 n(%)

2.3 Sox-2、Lgr5蛋白表达与宫颈癌患者临床病理参数的关系Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率与患者病理类型无关(P>0.05)；Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率与患者的肿瘤分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关，肿瘤分化程度为低分化、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤浸润深度为T3～T4、有淋巴结转移患者Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率高于肿瘤分化程度为高中分化、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤浸润深度为T1～T2及无淋巴结转移患者(P均<0.05)。见表3。

表3 Sox-2、Lgr5蛋白表达与宫颈癌患者临床病理参数的关系 n(%)

3 讨论

宫颈癌为临床常见恶性肿瘤，病因较复杂，与吸烟、初产年龄过小、多产多孕、多性伴、高危型人乳头瘤病毒、滴虫、沙眼衣原体感染等具有一定相关性，疾病早期常无明显临床表现，确诊时多已处于中晚期，致使治疗难度增加，易出现转移及复发，生存率低[9-11]。故探寻一种高效的宫颈癌早期诊断和病情评估方法一直为临床研究重点。

既往研究[12]发现，宫颈癌患者机体中也存在肿瘤干细胞，在宫颈癌疾病发生、进展中扮演着重要角色。Sox为重要的转录因子家族，在性别决定与分化、神经系统发育、多组织脏器形成等过程中均有着重要作用[13]。Sox-2可参与介导干细胞转录过程，与Kruppel类因子4、八聚体结合转录因子4等产生共同作用，诱导成体细胞形成多功能干细胞，起到干细胞调控作用[14-15]。有学者[16]报道，对机体Sox-2基因的表达实施干涉能抑制乳腺癌细胞转向S期，促使其停滞在G1期，改变细胞形态。亦提示Sox-2基因表达与肿瘤增殖有着密切关系。徐文彬[17]研究发现，宫颈癌组织中Sox-2蛋白表达显著高于非宫颈癌宫颈病理组织，且其表达情况与患者病理组织分级、淋巴结转移密切相关。本研究结果显示，Sox-2蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率高于宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织，且肿瘤分化程度为低分化、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤浸润深度为T3～T4、有淋巴结转移患者Sox-2蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率高于肿瘤分化程度为高中分化、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤浸润深度为T1～T2及无淋巴结转移患者(P<0.05)。这表明Sox-2在宫颈癌中呈高表达，且表达与患者肿瘤分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有着密切关系。推测其原因与宫颈癌患者机体中有肿瘤干细胞，且恶性程度越高宫颈癌组织中存在干细胞特性肿瘤细胞数量越多等有关。

Lgr5属G蛋白偶联受体超家族中的一员，于胚胎、器官发育和体内细胞代谢调节、信号转导等方面均具有重要功能。临床研究[18]证实，Lgr5是人类毛囊和小肠等成体组织的敏感干细胞标志物，于多种恶性肿瘤中均呈现高表达，属肿瘤干细胞潜在标志物。吕转等[19]研究发现，Lgr5在食管癌中呈高表达，且表达情况与食管鳞癌复发、转移侵袭等密切相关。另有研究[20]显示，肝癌中也具有Lgr5高表达细胞。但其在女性生殖器官恶性肿瘤中的有关报道尚较少。马琳等[21]研究发现，卵巢癌组织中Lgr5蛋白阳性表达率明显高于其在正常组织中的阳性表达率。张惠洁等[22]研究报道，乳腺癌中Lgr5呈高表达，且其表达与患者年龄、肿瘤部位、大小无关，与肿瘤浸润、转移、临床分期有关。上述研究亦提示了其在妇科肿瘤发生、进展中的作用。本研究结果显示，Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率均高于宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织，且肿瘤分化程度为低分化、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤浸润深度为T3～T4、有淋巴结转移患者Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率高于肿瘤分化程度为高中分化、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤浸润深度为T1～T2及无淋巴结转移患者(P均<0.05)。这表明Lgr5在宫颈癌中呈高表达，且表达与患者肿瘤分化程度、临床分期、浸润深度、淋巴结转移有着密切关系。

综上所述，Sox-2、Lgr5在宫颈癌中均呈高表达，且表达水平与患者疾病进展有着密切关系，可将两者作为宫颈癌早期诊断、病情及预后评价的重要指标，通过阻断两者信号传导通路可能发现治疗宫颈癌的新靶点。