重症肺炎基因多态性检测及救治策略研究

胡晓华 邓 旺 魏忠强 邓 勇

（1.巫溪县人民医院呼吸与危重症医学科，重庆 405809；2.重庆医科大学附属第二医院呼吸与危重症医学科，重庆 400010）

肺炎是一种严重危害人类健康的疾病，随着抗生素在临床治疗中的广泛使用，使得临床死亡率下降。但是由于病原体变异耐药，新生病原体的出现等，均为临床治疗带来前所未有的挑战[1]。既往研究表明，急性呼吸道感染性疾病近十几年不断增加，新的感染性疾病不断出现，由于细菌、病毒等病原体基因的变异，导致其不能有效治疗或发生传染性强、病死率高的肺炎，仍有部分难以确定原因的“不明原因肺炎”或“传染性肺炎”发病机制尚未阐明，导致临床治疗难度较大，严重危害人类健康[2-3]。积极采取有效的措施干预治疗对改善患者预后具有重要的意义。本研究以重症肺炎、普通肺炎为研究对象，探讨重症肺炎基因多态性检测及救治策略，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取巫溪县人民医院2018年5月至2020年3月重症肺炎患者76例设为观察组，另选取同期治疗的普通肺炎患者59例设为对照组，回顾性分析两组患者临床资料。观察组男性45例，女性31例；年龄42～74岁，平均年龄 （59.39±6.32）岁；病程1～7 d，平均病程 （3.32±0.26）d；体质量指数（BMI）18～26 kg/m2，平 均BMI （23.23±2.61） kg/ m2；合并症：高血压5例，糖尿病7例，高脂血症6例。对照组男性34例，女性25例；年龄39～75岁，平 均 年 龄 （60.13±6.33）岁；病 程1～8 d，平 均病 程 （3.36±0.29）d；BMI 17～27 kg/m2，平 均BMI （23.07±2.57）kg/m2；合并症：高血压3例，糖尿病4例，高脂血症4例。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义 （P ＞0.05），具有可比性。纳入标准：①观察组患者符合《内科学》（第7版）[4]中重症肺炎的诊断标准。主要标准：患者需要机械通气，脓毒性休克需要应用血管加压素。次要标准：呼吸频率≥30次；血氧分压（PaO2）/吸入氧气浓度（FiO2），即氧合指数≤250；多肺叶浸润，意识模糊、定向力障碍；高尿素血症 （尿素氮≥7.1mmol/L）；感染致白细胞减少 （周围血WBC＜4×109/L）；血小板减少 （PLT＜100×109/ L）；低血压需要积极的液体复苏。符合主要标准1条或3条次要标准即可确诊；对照组符合《内科学》（第7版）[4]中普通肺炎诊断标准，两组患者均经X线CT检查确诊；②均能完成生化指标、肺功能测定，且患者均耐受；③具有完整的临床资料。排除标准：①合并精神异常、血液系统疾病或伴有自身免疫系统疾病者；②严重肝肾功能异常、抗生素等药物过敏史者；③凝血功能异常、恶性肿瘤者。本研究经巫溪县人民医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法 标本采集：采集两组患者入院后次日外周空腹血3 mL，转速4 500 r/min，35 min离心，血清分离后放置在低温下，备用。检测方法：采用酶联免疫吸附试验测定两组血管紧张素转化酶 （ACE）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10 （IL-10）水平。 基因多态性测定：①建立常见病原微生物的核酸引物库。迄今已经发现的各种病毒、细菌等微生物的基因序列已在Genbank里公布，借助该平台能查出常见病原体的基因序列，如：流感病毒、SARS、登革热、禽流感、亨德拉病毒及汉坦病毒肺综合征及艾滋病等，采用Primer Premier5.0 DEMO设计软件设计相应的引物，建立常见病原微生物的引物库[5]。②常见病原微生物的筛选。将引物库内的各种引物根据顺序完成标本中脱氧核糖核酸（DNA）、核糖核酸（RNA）进行聚合酶链式反应（PCR）扩增，如能获得相应的DNA活RNA片段，则为已经明确的病原体感染，能为临床治疗提供依据，实现病原学上疾病治疗，及时采取相应的防护措施，防止疾病的流行爆发；对于PCR难以扩增出相应片段的标本完成基因测序。③对筛选后的标本进行基因测序并与Genbank中数据进行对比。对于患者的标本筛选难以明确，则应对该类患者进行暂时隔离，同时对其标本完成基因测序，并将测定获得的结果与Genbank数据进行对比，观察样本与数据库中存在的差异，判断该病原体是否为新的种类或由原有病原体变异获得。④采用实时荧光PCR技术测定两组Toll样受体-4（TLR-4）基因启动子-229Gly、ACE-基因启动子-276Gly、TNF-α基因启动子-238G/A、IL-10基因启动子-1082A/G多态性，并将测得的结果采用DNA Starla-sergene软件进行对比、检索，并进行比较，及时发现多态性规律、易感性与疾病预后的关系。

1.3 观察指标 ①生化指标：记录并比较两组ACE、TNF-α、IL-10水平；②基因多态性：记录并比较两组Toll样受体-4（TLR-4）、ACE、TNF-α、IL-10基因多态性。

1.4 统计学分析 采用SPSS 20.0软件处理，计数资料采用[例 （%）]表示，行χ2检验；计量资料采用 （）表示，行t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者ACE、TNF-α、lL-10水平比较 观察组患者ACE、TNF-α、IL-10水平高于对照组，差异有统计学意义 （P＜0.05），见表1。

表1 两组患者ACE、TNF-α、lL-10水平比较 （）

表1 两组患者ACE、TNF-α、lL-10水平比较 （）

注：ACE：血管紧张素转化酶 ；TNF-α：肿瘤坏死因子-α；IL-10：白细胞介素-10 。

组别 例数 ACE（ng/mL）TNF-α（pg/mL）IL-10（pg/mL）观察组 76 18.68±2.31142.39±11.4318.55±3.23对照组 59 5.23±1.0 59.74±5.61 10.21±1.54 t值 7.392 5.671 9.482 P值 0.000 0.000 0.000

2.2 两 组 患 者TLR-4-229、ACE-276、TNF-α-238、lL-10-1082基因型比较 两组患者TNF-α等位基因-238G/A基因型GG、GA+AA比较，差异无统计意义（P＞0.05）；观察组TLR-4等位基因 229Gly基因型AA，ACE276Gly基因型TT及IL-10等位基因1082A/G基因型AA比例均高于对照组，差异有统计意义 （P＜0.05），见表2。

表2 两组患者TLR-4-229Gly、ACE-276Gly、TNF-α-238G/A、lL-10-1082A/G多态性基因型比较[例（%）]

3 讨论

基因多态性也叫遗传多态性，指在某一个生物群体中，同时或者经常存在的两种，或者多种不连续变异的基因。细胞因子或炎症介质基因的变异会导致机体对特定类型病原体易感性增加，从而加重病情，严重者将会发展为脓毒性休克。但是，基因多态性也决定个体对治疗的反应，影响治疗有效性。因此，加强基因多态性的研究将有助于及时、尽早发现肺炎易感患者及肿胀肺炎高危者，通过研究基因调控的某些因子的变化，能阻断或增加某些基因的表达，从而达到疾病治疗的目的[6]。本研究中，观察组ACE、TNF-α、IL-10水平高于对照组（P＜0.05），均起到调节炎症反应强度的作用；两组患者TNF-α-基因启动因子238G/A位点基因型GG、基因型GA+AA比较差异无统计意义（P＞0.05），表明TNF-α-基因启动因子238G/A多态性与肺炎严重程度不具有相关性；观察组TLR-4-基因启动因子229Gly位点基因型AA，ACE基因启动因子276Gly基因型TT及IL-10-基因启动因子1082A/G基因型AA均高于对照组（P＜0.05），从本研究结果看出，重症肺炎患者伴有明显的基因多态性变化，能为临床治疗提供参考依据。

为了提高重症肺炎患者治疗效果，应针对基因多态性采取相应的措施进行干预，具体如下：①抗感染治疗策略。针对重症肺炎的特点，采用大量循证医学证据在抗生素使用中提出新的观点、新的治疗策略。加强患者基因多态性筛查，加强肺炎流行病学调查及病原体监测，建立适合患者的抗感染治疗策略[7]；②呼吸机支持策略。针对重症肺炎患者的临床表现、疾病特点等，给予呼吸支持干预，合理、科学使用机械通气，根据患者恢复调整呼吸机相关参数，掌握好患者撤机技术，降低呼吸机治疗引起的并发症；③通气策略。在患病过程中不同原因引起的呼吸衰竭会导致患者存在明显的病理、生理的差异性[8]。因此，通气治疗前应完善有关检查，评估患者的身体状态，合理的适应通气治疗干预，并完成相关参数的测定。

综上所述，TLR-4、ACE、TNF-α、IL-10在重症肺炎患者中呈高表达，加强其多态性测定反映患者疾病严重程度，给予救治对策干预有助于改善患者肺功能水平，能获得良好的治疗预后，促进患者恢复，降低死亡率。