无瓣海桑内生真菌Aspergillus sp.ZJ-S4生物碱类次级代谢产物的分离鉴定及抗炎活性

刘红菊 1，闫冲 1，佘志刚

（1.广东医科大学药学院，广东东莞 523808；2.中山大学化学院，广东广州 510275）

生物碱是一类天然存在的含氮碱性有机化合物，结构复杂并具有广泛的生物活性，具有抗感染、镇痛[1-3]、抗肿瘤[4-5]以及抗菌[6-7]等药理作用。生物碱最初是从植物中发现的，近年来在可培养微生物中分离出多种生物碱[3,8-9]，这为其可持续生产提供了机会。探索多样性和研究较少的环境，寻找能够产生生物活性天然产物的新微生物菌株具有重要意义。近年来，从溶岩洞穴[10]、海洋[11]、特殊环境内生真菌[12]等特殊环境中发现了大量结构复杂、新颖的化合物。典型环境中的微生物产生的天然产物已是发现新药物和先导化合物的重要来源。

红树林生长环境独特，所处的高温、高盐、频繁潮汐、缺氧、强风、强紫外线的生态条件，为植物内部共生的微生物提供了独特的生活环境，蕴藏着丰富并具有特色的微生物资源[13]。本课题组长期致力于红树林内生真菌次级代谢产物的分离和活性研究，得到了多种重要的具有抗结核、抗感染、抗Ⅱ型糖尿病以及抗肿瘤等活性的次级代谢物[14]。本研究从一株无瓣海桑（Sonneratia apetala）的新鲜果实中分离得到了一株曲霉属真菌，在其大米培养基中分离得到了11个吲哚类生物碱，部分化合物显示了较好的体外抗炎活性。

1 仪器与材料

1.1 样品及菌株鉴定

菌株Aspergillussp.ZJ-S4采集于广东徐闻珊瑚礁国家级自然保护区，由红树植物无瓣海桑（Son‐neratia apetala）的新鲜果实中分离得到。通过用真菌ITS间隔序列所得到的碱基序列在Genebank中用Blast进行相似性分析，与菌株Aspergillus clava‐tonanicus（AF459727.1）有99%的相似度，鉴定为曲霉属真菌Aspergillussp.。该菌株目前保藏在中山大学化学院天然产物研究室。

1.2 仪器与试剂

AVANCE III 400/500 MHz核磁共振波谱仪（瑞士Bruker Biospin公司）；DSQ EI-MS质谱仪（美国Thermofisher公司）；MAT95XPHR-EI-MS质谱仪（美国Thermofisher公司）；LCQ DECA XPLC-MS质谱仪（美国Thermofisher公司）；TSQ Quantum Ul‐tra HR-LC-MS质谱仪（美国Thermofisher公司）；Agilent HP 1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司），Ultimate®XB-C18（250 mm×10 mm，5μm）色谱柱;Chiralpak AY-H（250 mm×4.6 mm，5μm；Daicel Chemical Industries，Ltd.）。薄层层析GF254硅胶板（青岛海洋化工厂）；200～300目柱层析硅胶（青岛海洋化工厂）；Sephadex LH-20（GE Healthcare公司）；ODS色谱填料（日本YMC公司）；氘代试剂（美国Sigma公司）；Synergy z BioTek多功能酶标仪（美国BioTek公司）；脂多糖（LPS）、3-（4,5-dimethyl-2-thi‐azolyl）-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide（MTT）细胞增殖和毒性检测试剂盒（美国sigma公司）；DMEM高糖培养液和胎牛血清（澳大利亚HYPCOL公司）；一氧化氮检测试剂盒（碧云天生物技术研究所）；实验所用其他试剂均为分析纯（广州化学试剂厂）。

2 方法

2.1 提取与分离

菌株在25℃条件下用大米培养基培养28 d后，所得菌丝和大米培养基用等体积的乙酸乙酯提取3次，浓缩得到32.6 g粗浸膏。所得粗浸膏通过柱层析硅胶（200～300目)进行初步分离，以乙酸乙酯-石油醚为流动体系，在20∶80～100∶0（体积比）范围内进行梯度洗脱，收集得到7段组分（Fr.1-Fr.7）。Fr.2经硅胶柱层析法（乙酸乙酯-石油醚，体积比30∶70）分离纯化后得到5段组分（Fr.2.1-Fr.2.5），Fr.2.3经葡聚糖凝胶sephadex LH-20（三氯甲烷-甲醇，体积比1∶1）2次分离纯化后得到化合物3（8 mg）和4（7 mg）；Fr.3经硅胶柱层析法（乙酸乙酯-石油醚，体积比40∶60）分离纯化后得到5段组分（Fr.3.1～Fr.3.5)，Fr.3.2经高效液相色谱法（2 mL/min，甲醇-水，体积比65∶35）进行分离纯化后得到化合物5（8 mg）和6（7 mg），Fr.3.3经高效液相色谱法（2 mL/min，甲醇-水，体积比70∶30）进行分离纯化后得到化合物7（11 mg）、8（10 mg）和9（10 mg）；Fr.4经硅胶柱层析法（乙酸乙酯-石油醚，体积比40∶60）分离纯化后得到6段组分（Fr.4.1-Fr.4.6），Fr.4.2经高效液相色谱法（2 mL/min，甲醇-水，体积比60∶40）进行分离纯化后得到化合物1（6 mg）和2（8 mg），Fr.4.3经葡聚糖凝胶sephadex LH-20（三氯甲烷-甲醇，体积比1∶1）2次分离纯化后得到化合物10（10 mg）和11（5 mg）。

2.2 化合物对NO生成量的影响

取对数生长期的RAW 264.7细胞，按1×105个/孔接种于96孔板，100µL/孔。放入培养箱中培养24 h使细胞贴壁并进入对数生长期，更换新的完全培养基（含10%胎牛血清的DMEM），加入LPS（终浓度1µg/mL）和样品溶液或吲哚美辛溶液，每个浓度设3孔重复。阳性对照组只加LPS不加药物，阴性对照组只加细胞和完全培养基，空白孔只加完全培养基。培养箱培养24 h后，取细胞培养上清液50µL加入新的96孔板，再分别加入NO检测试剂Ⅰ与Ⅱ各50µL。用酶标仪测定540 nm处的吸光度。

2.3 化合物对细胞活力的影响

取对数生长期的RAW 264.7细胞，按1×105个/孔接种于96孔板，100µL/孔。放入培养箱中培养24 h使细胞贴壁并进入对数生长期，更换新的完全培养基，加入LPS（终浓度1µg/mL）和样品溶液或吲哚美辛溶液，每个浓度设3孔重复。阳性对照组只加LPS不加药物，阴性对照组只加细胞和完全培养基，空白孔只加完全培养基。培养箱培养24 h后，每孔加入1 mg/mL的MTT溶液50µL，培养箱继续培养4 h，吸去培养基和MTT，再向各孔中加入150µL的DMSO，震荡混匀，用酶标仪测定490 nm处的吸光度值。

3 结果

3.1 结构鉴定

化合物1：白色固体；HR-ESI-MSm/z502.209 75[M-H]−(calcd.for C27H28N5O5,502.209 04)；分子式C27H29N5O5。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ：8.34(1H，d，J=7.9 Hz，H-5)，7.84(1H，m，H-6)，7.57(1H，t，J=7.5 Hz，H-7)，7.75(1H，d，J=8.1 Hz，H-8)，5.72(1H，d，J=5.5 Hz，H-11)，2.94(1H，dd，J=15.2,7.7 Hz，H-12)，3.05(1H，dd，J=15.3，3.1 Hz，H-12)，5.08(1H，s，H-14)，7.50(1H，d，J=7.7 Hz，H-18)，7.32(1H，t，J=7.7 Hz，H-19)，7.1(1H，t，J=7.6 Hz，H-20)，7.36(1H，d，J=7.8 Hz，H-21)，3.16(1H，dt，J=13.8，6.9 Hz，H-23)，1.24(3H，d，J=7.1 Hz，H-24)，0.93(3H，d，J=6.6 Hz，H-25)，1.33(3H，s，H-26)，1.29(3H，s，H-27)，6.82(1H，br s，2-OH)。13CNMR(125 MHz,CDCl3)δ：170.1(C-1)，85.0(C-2)，150.4(C-3)，146.9(C-4)，128.0(C-5)，135.2(C-6)，127.8(C-7)，127.2(C-8)，120.8(C-9)，161.0(C-10)，52.6(C-11)，41.0(C-12)，74.9(C-13)，79.1(C-14)，65.4(C-15)，175.3(C-16)，137.5(C-17)，115.6(C-18)，130.5(C-19)，125.3(C-20)，124.2(C-21)，137.7(C-22)，36.0(C-23)，14.8(C-24)，18.0(C-25)，25.6(C-27)，24.4(C-28)。以上数据与文献[15]报道的基本一致，故鉴定化合物1为epi-fiscalin E。

化合物2：白色固体；EI-MS：m/z486[M+H]+；分子式C27H27N5O4。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ：7.69(1H，d，J=8 Hz，H-5)，7.77(1H，m，H-6)，7.57(1H，dd，J=18.0，7.8 Hz，H-7)，8.30(1H，d，J=7.8 Hz，H-8)，5.83(1H，dd，J=8.3，4.4 Hz，H-11)，2.65(1H，dd，J=14.6，4.4 Hz，H-12)，2.29(1H，dd，J=14.5,8.4 Hz，H-12)，5.08(1H，s，H-14)，7.50(1H，dd，J=18.0，7.8 Hz，H-18)，7.32(1H，t，J=7.5 Hz，H-19)，7.07(1H，t，J=7.5 Hz，H-20)，7.26(1H，d，J=4.1 Hz，H-21)，2.42(3H，s，H-24)，2.01(3H，s，H-25)，1.42(3H，s，H-26)，1.55(3H，s，H-27)。13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ：168.3(C-1)，120.9(C-2)，145.7(C-3)，147.1(C-4)，127.7(C-5)，134.9.2 (C-6)，127.6(C-7)，127.1(C-8)，120.0(C-9)，160.5(C-10)，51.4(C-11)，40.3(C-12)，74.2(C-13)，78.4(C-14),64.9.4 (C-15)，175.3(C-16)，138.1(C-17)，115.9(C-18)，130.2(C-19)，125.3(C-20)，1241(C-21)，137.6(C-22)，132.4(C-23)，22.0(C-24)，21.2(C-25)，26.5(C-27)，25.6(C-28)。以上数据与文献[16]报道的一个未命名的半合成化合物结构一致，因此确定化合物2为新的天然产物，命名为quinadoline D。

化合物3：白色固体；HR-ESI-MS：m/z505.208 31[M+H]+(calcd.for 505.208 71)，分子式为C27H29N5O5。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ：5.4(1H，d，J=2.3 Hz，H-2)，8.32(1H，d，J=7.10 Hz，H-5)，7.83(1H，m，H-6)，7.55(1H，t，J=8.82 Hz，H-7)，7.76(1H，t，J=8.08 Hz，H-8)，6.14(1H，d，J=9.52 Hz，H-11)，2.40(1H，d，J=14.89 Hz，H-12)，3.05(1H，dd，J=10.14，15.07 Hz，H-12)，5.19(1H，s，H-14)，7.54(1H，d，J=8.45 Hz，H-18)，7.10(1H，t，J=7.56 Hz，H-19)，7.34(1H，t，J=7.68 Hz，H-20)，7.26(1H，d，J=7.33 Hz，H-21)，3.13(1H，m，H-23)，1.09(3H，d，J=6.7 Hz，H-24)，1.34(3H，d，J=7.1 Hz，H-25)，1.61(3H，s，H-26)，1.50(3H，s，H-27)，8.61(1H，br s，N-OH)。13C NMR(125 MHz,CDCl3)δ：167.7(C-1)，80.9(C-2)，147.4(C-3)，146.6(C-4)，127.3(C-5)，135.4(C-6)，128.2(C-7)，127.8(C-8)，120.3(C-9)，162.2(C-10)，51.5(C-11)，39.4(C-12)，76.2(C-13)，86.5(C-14),71.1(C-15)，172.3(C-16)，136.3(C-17)，116.3(C-18)，125.3(C-19)，130.6(C-20)，123.4(C-21)，137.3(C-22)，29.0(C-23)，15.2(C-24)，19.7(C-25)，18.2(C-27)，23.0(C-28)。以上数据与文献[17]报道的基本一致，故鉴定化合物3为quinadoline A。

化合物4：白色针晶；EI-MS：m/z439[M]+；分子式为C25H21N5O3。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：8.33(1H，dd，J=8.0，1.2 Hz，H-8)，7.92(1H，d，J=3.6 Hz，N-H)，7.78(1H，ddd，J=8.5，7.2，1.5 Hz，H-6)，7.67(1H，d，J=7.6 Hz，H-5)，7.55(1H，d，J=8.0 Hz，H-24)，7.49(1H，d，J=7.4 Hz，H-21)，7.34(1H，td，J=7.7，1.1 Hz，H-22)，7.15(1H，td，J=7.7，1.1 Hz，H-23)，5.75(1H，dt，J=3.8，1.8 Hz，H-11)，4.98(1H，d，J=1.2 Hz，H-14)，4.64(1H，d，J=5.5 Hz，H-2)，3.81(1H，ddd，J=8.8，4.0，1.0 Hz，H-18)，3.04(2H，dd，J=13.9，3.9 Hz，H-12)，2.40(1H，m，H-15)，1.98(1H，m，H-17)，1.89(1H，m，H-17)，1.82(1H，m，H-15)，1.47(2H，m，H-16)。13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：174.2(C-19)，171.1(C-1)，159.0(C-10)，151.1(C-3)，147.3(C-4)，137.9(C-20)，137.1(C-25)，135.0(C-6)，127.8(C-7)，129.7(C-22)，127.5(C-8)，127.4(C-5)，126.8(C-23)，124.0(C-24)，117.0(C-21)，121.2(C-9)，92.0(C-14)，69.6(C-18)，61.0(C-2)，56.6(C-15)，53.7(C-13)，53.1(C-11)，34.1(C-12),29.8(C-17)，25.1(C-16)。以上数据与文献[17]报道的基本一致，故鉴定化合物4为quinadoline B。

化合物5：白色固体；EI-MSm/z432[M]+，分子式为C23H20N4O5。1H NMR(500 MHz，DMSO)δ：5.23(1H，s，H-2)，7.81(1H，d，J=7.6 Hz,H-5)，7.34(1H，t，J=7.5 Hz，H-6)，7.54(1H，t，J=7.6 Hz，H-7)，7.49(1H，d，J=7.7 Hz，H-8)，5.57(1H，t，J=10.0 Hz，H-12)，3.43(1H，dd，J=11.1，13.1 Hz，H-13a)，3.05(1H，dd，J=9.4，13.2 Hz，H-13b)，8.77(1H，s，OH-16)，8.23(1H，d，J=7.9 Hz，H-20)，7.63(1H，t，J=7.5 Hz，H-21)，7.91(1H，t，J=7.6 Hz，H-22)，7.75(1H，d，J=8.1 Hz，H-23)，8.55(1H，s，H-26)，1.34(3H，s，H-27)，1.23(3H，s，H-28)。13C NMR(125 MHz,DMSO)δ：86.7(C-2)，84.0(C-3)，132.9(C-4)，126.6(C-5)，125.8(C-6)，132.3(C-7)，115.2(C-8)，138.8(C-9)，171.2(C-11)，57.3(C-12)，34.9(C-13)，171.8(C-14)，70.9(C-15)，160.2(C-18)，121.9(C-19)，126.6(C-20)，128.1(C-21)，135.6(C-22)，127.9(C-23)，148.1(C-24)，148.1(C-26)，16.8(C-27)，23.2(C-28)。以上数据与文献[18]报道的基本一致，故鉴定化合物5为tryptoquivaline L。

化合物6：白色固体；EI-MS：m/z504[M]+；分子式C27H28N4O6。1H NMR(500 MHz，DMSO)δ：5.51(1H，s，H-2)，7.55(1H，d，J=7.3 Hz，H-5)，7.11(1H，t，J=7.6 Hz，H-6)，7.34(1H，t，J=7.5 Hz，H-7)，7.35(1H，d，J=7.4 Hz，H-8)，5.69(1H，d，J=7.0 Hz，H-12)，2.26(1H，dd，J=14.5，7.0 Hz，H-13a)，2.47(1H，dd，J=14.6，8.5 Hz，H-13b)，6.88(1H，s，OH-16)，8.33(1H，d，J=7.9 Hz，H-20)，7.55(1H，m，H-21)，7.8(1H，m，H-22)，7.69(1H，d，J=8.1 Hz，H-23)，5.51(1H，s，H-27)，2.75(1H，d，J=12.9 Hz，H-28)，1.10(3H，d，J=6.6 Hz，H-29)，1.15(3H，d，J=6.7 Hz，H-30)，1.60(3H，s，H-31)，1.48(3H，s，H-32)。13C NMR(125 MHz，DMSO)δ：86.1(C-2)，84.3(C-3)，135.3(C-4)，125.2(C-5)，127.3(C-6)，130.4(C-7)，115.9(C-8)，138.1(C-9)，169.3(C-11)，51.5(C-12)，35.9(C-13)，169.3(C-14)，75.0(C-15)，161.3(C-18)，120.2(C-19)，124.3(C-20)，127.7(C-21)，137.7(C-22)，127.3(C-23)，146.9(C-24)，149.2(C-26)，79.3(C-27)，35.6(C-28)，19.2(C-29)，19.9(C-30)，25.2(C-31)，26.0(C-32)。以上数据与文献[16]报道的一个未命名的半合成化合物结构一致，因此化合物6为新的天然产物，命名为quinadoline E。

化合物7：白色固体；EI-MS：m/z532[M]+；分子式：C28H28N4O7。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.19(1H，s，H-2)，7.41(1H，d，J=7.6 Hz，H-5)，7.22(1H，t，J=7.7 Hz，H-6)，7.45(1H，t，J=7.7 Hz，H-7)，7.60(1H，d，J=7.9 Hz，H-8)，5.69(1H，d，J=9.85 Hz，H-12)，3.20(1H，dd，J=13.8，10.6 Hz，H-13a)，3.02(1H，dd，J=13.8，9.3 Hz，H-13b)，4.36(1H，d，J=7.1 Hz，H-15)，7.29(1H，s，OH-16)，8.23(1H，d，J=7.9 Hz,H-20)，7.53(1H，t，J=7.3 Hz，H-21)，7.83(1H，dd，J=11.9，4.8 Hz，H-22)，7.77(1H，d，J=8.1 Hz，H-23)，5.57(1H，d，J=9.1 Hz，H-27)，2.65(1H，td，J=6.7，13.5 Hz，H-28)，1.02(3H，d，J=9.0 Hz，H-29)，1.18(3H，d，J=6.6 Hz，H-30)，2.17(3H，s，H-33)，1.60(3H，s，H-34)。13C NMR(125 MHz,CDCl3)δ：90.3(C-2)，84.4(C-3)，133.9(C-4)，124.1(C-5)，125.8(C-6)，132.1(C-7)，116.2(C-8)，137.9(C-9)，169.4(C-11)，55.0(C-12)，33.7(C-13)，169.6(C-14)，78.2(C-15)，161.7(C-18)，120.3(C-19)，126.9(C-20)，128.3(C-21)，135.6(C-22)，128.0(C-23)，146.7(C-24)，152.7(C-26)，77.3(C-27)，32.0(C-28)，18.9(C-29)，18.8(C-30)，171.3(C-32)，20.9(C-33)，11.3(C-34)。以上数据与文献[19]报道基本一致，故鉴定化合物7为nortryptoquivaline。

化合物8：白色固体；EI-MS：m/z546[M]+；分子式：C29H30N4O7。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.00(1H，s，H-2)，7.40(1H，d，J=7.5 Hz，H-5)，7.25(1H，m，H-6)，7.46(1H，t，J=7.7 Hz，H-7)，7.61(1H，d，J=7.9 Hz，H-8)，5.68(1H，d，J=9.85 Hz，H-12)，3.17(1H，dd，J=13.7，10.5 Hz，H-13a)，3.05(1H，dd，J=13.8，9.5 Hz，H-13b)，7.12(1H，s，OH-16)，8.22(1H，d，J=7.9 Hz，H-20)，7.54(1H，t，J=7.5 Hz，H-21)，7.83(1H，m，H-22)，7.77(1H，d，J=8.0 Hz，H-23)，5.59(1H，d，J=9.0 Hz，H-27)，2.64(1H，m,H-28)，1.03(3H，d，J=6.8 Hz，H-29)，1.17(3H，d，J=6.6 Hz，H-30)，2.17(3H，s，H-33)，1.48(3H，s，H-34)，1.50(3H，s，H-35)。13CNMR(125 MHz,CDCl3)δ：87.9(C-2)，84.4(C-3)，133.9(C-4)，124.1(C-5)，125.0(C-6)，132.0(C-7)，116.1(C-8)，138.1(C-9)，169.8(C-11)，55.0(C-12)，34.0(C-13)，171.1(C-14)，71.6(C-15)，161.6(C-18)，120.3(C-19)，126.9(C-20)，128.0(C-21)，135.6(C-22)，128.2(C-23)，146.7(C-24)，152.7(C-26)，77.3(C-27)，32.0(C-28)，19.0(C-29)，18.7(C-30)，171.2(C-32)，20.9(C-33)，17.2(C-34)，23.0(C-35)。以上数据与文献[19]报道的基本一致，故鉴定化合物8为tryptoquivaline。

化合物9：白色固体；EI-MS：m/z546[M]+；分子式：C29H30N4O7。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.01(1H，s，H-2)，7.80(1H，d，J=7.9 Hz，H-5)，7.26(1H，t，J=7.5 Hz，H-6)，7.47(1H，t，J=7.7 Hz，H-7)，7.59(1H，d，J=8.8 Hz，H-8)，5.86(1H，dd，J=18.4，8.9 Hz，H-12)，3.67(1H，dd，J=12.3，10.9 Hz，H-13a)，2.69(1H，dd，J=9.0，12.6 Hz，H-13b)，6.89(1H，s，OH-16)，8.29(1H，d，J=7.9 Hz，H-20)，7.54(1H，t，J=7.5 Hz，H-21)，7.80(1H，m，H-22)，7.75(1H，d，J=7.9 Hz，H-23)，5.56(1H，d，J=9.6 Hz，H-27)，2.63(1H，m,H-28)，0.84(3H，d，J=6.6 Hz，H-29)，1.01(3H，d，J=6.6 Hz，H-30)，2.11(3H，s，H-33)，1.27(3H，s，H-34)，1.43(3H，s，H-35)。13C NMR(125 MHz,CDCl3)δ：88.2(C-2)，83.8(C-3)，132.2(C-4)，125.7(C-5)，126.2(C-6)，131.6(C-7)，115.7(C-8)，138.8(C-9)，171.0(C-11)，55.0(C-12)，35.1(C-13)，171.2(C-14)，71.7(C-15)，161.7(C-18)，120.9(C-19)，126.8(C-20)，128.1(C-21)，135.1(C-22)，127.9(C-23)，146.5(C-24)，152.3(C-26)，78.4(C-27)，31.5(C-28)，18.6(C-29)，19.0(C-30)，171.4(C-32)，20.8(C-33)，17.0(C-34)，22.6(C-35)。以 上 数 据 与 文 献[19]报道基本一致，故鉴定化合物9为27-epi-trypto‐quivalin。

化合物10：白色固体；EI-MS：m/z342[M]+；分子式为C20H14N4O2。1H NMR(500 MHz，DMSO)δ：5.66(1H，m，H-2)，7.82(1H，m，H-6)，7.54(1H，mt，H-7)，8.15(1H，dd，J=8.0，1.3 Hz，H-8)，5.32(1H，d，J=5.4 Hz，H-11)，3.46(1H，dd，J=17.3，2.7 Hz，H-12a)，3.26(1H，dd，J=17.4，4.4 Hz，H-12b)，7.38(1H，d，J=8.2 Hz，H-16)，7.11(1H，t，J=7.5 Hz，H-17)，6.99(1H，t，J=7.4 Hz，H-18)，7.42(1H，d，J=7.9 Hz，H-19)。13CNMR(125 MHz,DMSO)δ：169.3(C-1)，54.4(C-2)，152.2(C-3)，146.9(C-4)，134.8(C-6)，127.2(C-7)，126.4(C-8)，120.3(C-9)，159.2(C-10)，51.1(C-11)，25.5(C-12)，105.0(C-13)，131.5(C-14)，134.8(C-15)，111.6(C-16)，122.2(C-17)，119.3(C-18)，118.2(C-19)，127.2(C-20)。以上数据与文献[20]报道的基本一致，故鉴定化合物10为prelapatin B。

化合物11：白色固体；EI-MSm/z344[M]+；分子式C20H16N4O2。1H NMR(500 MHz，DMSO)δ：3.07(1H，d，J=17.0 Hz，H-2a)，3.80(1H，dd，J=17.0，4.5 Hz，H-2b)，7.55(1H，t，J=8.4 Hz,H-5)，7.83(1H，m，H-6)，7.55(1H，t，J=8.4 Hz，H-7)，8.21(1H，d，J=8.1 Hz，H-8)，5.27(1H，d，J=4.9 Hz，H-11)，3.43(2H，dd，J=10.2，6.9 Hz，H-12)，6.86(1H，d，J=2.2 Hz，H-14)，7.26(1H，t，J=7.9 Hz，H-16)，6.77(1H，t，J=7.5 Hz，H-17)，7.00(1H，t，J=7.5 Hz，H-18)，7.31(1H，d，J=8.1 Hz，H-19)。13C NMR(125 MHz,DMSO)δ：160.0(C-1)，43.8(C-2)，149.3(C-3)，147.0(C-4)，126.3(C-5)，134.7(C-6)，126.6(C-7)，126.7(C-8)，119.9(C-9)，167.6(C-10)，56.5(C-11)，26.5(C-12)，107.8(C-13)，124.4(C-14)，136.0(C-15)，117.8(C-16)，118.6(C-17)，121.2(C-18)，111.4(C-19)，127.2(C-20)。以上数据与文献[21]报道的基本一致，故鉴定化合物11为glyantrypine。

3.2 化合物的NO抑制活性研究

以吲哚美辛为阳性对照，分别考察了化合物1～10对LPS诱导RAW 264.7小鼠巨噬细胞产生NO的抑制作用，结果表明化合物2、6、7、10具有中等抑制作用，IC50分别为（30.2±0.4）μmol/L、（41.2±0.6）μmol/L、（53.7±0.4）μmol/L和（36.9±0.3）μmol/L，其他化合物活性弱或无活性，见表1。同时，采用MTT法考察了化合物对RAW 264.7细胞的毒性作用，结果显示化合物在大于50μmol/L的测试浓度下均未表现出细胞毒作用。

表1 化合物对LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的抑制活性Table 1 Inhibitory activity of some compounds against LPSinduced NO production in RAW 264.7 cells(n=3,x±s)

4 结论

本研究从一株无瓣海桑内生曲霉属真菌的大米培养基中分离得到11个吲哚生物碱类化合物，根据理化数据和波谱数据分别鉴定了其结构，其中化合物2和6为新发现的天然产物。以上生物碱具有独特的结构特征，分别属于异戊二烯基吲哚衍生物、喹唑啉吲哚衍生物和吡嗪喹唑啉吲哚衍生物。此类生物碱通常从曲霉属真菌[16,21]的代谢产物中分离出来，少数从嗜麦芽窄食单胞菌[15]、新萨托菌[18]、子囊菌[19]、枝孢菌[20]的代谢产物中得到。已报道的生物活性包括致颤性[19]、抗菌[22]、抗肿瘤[23]等，未见抗炎活性的报道。本文考察了化合物1～10对LPS诱导RAW 264.7小鼠巨噬细胞产生NO的抑制作用，显示化合物2、6、7、10具有较好的体外抗炎活性；构效关系研究发现部分化合物结构极为相似，活性却差别明显，如化合物1～4结构差别很小，而只有化合物2显示出较强的抗炎活性；化合物5～9结构类似而活性不同，说明某个取代基的不同与吲哚类生物碱抗炎活性有明显的相关性。本文研究结果对于研究结构与抗炎活性之间的构效关系具有一定的参考意义，为进一步的结构修饰和药理学研究提供了线索。