甲状腺癌组织中CK19、ARID1A表达水平及与其临床病理参数及预后的关系

冯凌飞 贺 曾 王景玉

甲状腺癌是现代十分常见的1种恶性肿瘤[1]。其病理类型可分为4类：乳头状癌(PTC)、滤泡样癌(FTC)、髓样癌(MTC)以及未分化癌(ATC)，其中最常见的是PTC。治疗甲状腺癌临床进展比较缓慢，可以选择药物、放射性核素或者根治性肿瘤切除术来进行治疗[2]。有研究表明，细胞角蛋白19(cytokeratin-19，CK19)在肿瘤转移中发挥了重要的作用，而AT丰富结构域1A(AT rich interactive domain 1A，ARID1A)在食管癌、胆管癌、胰腺癌等癌症中的表达显著降低或缺失[3-5]。本研究通过探究甲状腺癌组织和癌旁组织中CK19及ARID1A的阳性表达率，来揭示其与甲状腺癌临床病理参数及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院2013年5月至2015年9月期间术后确诊的BC标本124例，纳入标准：①均经病理切片证实为甲状腺癌；②临床资料完整的患者。排除标准：①术前接受过其他特异治疗者；②资料丢失或5年内随访丢失者。124例获取甲状腺癌组织的患者年龄49～74岁，平均年龄(61.46±6.13)岁；男性65例，女性59例；TNM分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期16例，Ⅲ期47例，Ⅳ期49例；肿瘤直径<1 cm为26例，直径>1 cm为98例；按照甲状腺癌组织学类型分类，其中57例PTC，49例FTC，10例MTC，8例ATC；82例发生淋巴结转移；79例发生包膜侵犯。另外获得同期术后确诊为甲状腺癌患者的BN标本87例，获取BN的患者年龄52～75岁，平均年龄(63.18±5.53)岁；男性49例，女性38例。两组病例年龄、性别比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 检测方法

应用鼠抗人CK19免疫组化单克隆抗体试剂盒(杭州赫贝科技有限公司)，以及鼠抗人ARID1A免疫组化单克隆抗体试剂盒(SANTA生物技术公司)；通过免疫组织化学检测方法得到组织切片；首先，标本都经过10%甲醛固定，脱水，然后，采用石蜡包埋机进行包埋，再将其以4 μm层厚切片；然后使用Envision二步法对CK19进行染色，采用SP法对ARID1A进行染色，使用DAB染色液显色，苏木精复染30～40 s，然后脱水封片于显微镜下观察。

1.3 结果判定

随机选取制备好的切片进行观察，先置于低倍镜下选取染色均匀、定位准确、染色密度强的部位；然后切换高倍镜下观察，以出现黄色、棕黄色或棕褐色颗粒，且渲染颜色显著高于背景色为阳性，阴性为不着色；①染色色度评分：没有染色判为0分、黄色判为1分、黄棕色判为2分、棕褐色判为3分。②通过阳性细胞百分比进行评分：阳性细胞数/细胞总数的值来判定，0～25%计1分、26%～50%计2分、51%～100%计3分。表达强度评分=阳性细胞百分比评分×染色色度评分，评分<1分为阴性、1～2分为弱阳性、2～4分为阳性、>4分为强阳性；表达阳性=弱阳性+阳性+强阳性。

1.4 统计学方法

应用SPSS 20.0进行统计学分析。计数资料以[n(%)]表示，采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 甲状腺癌组织中CK19、ARID1A蛋白阳性表达特点

通过对CK19、ARID1A免疫组化染色，可见其主要分布在甲状腺癌组织中的病变上皮内，CK19在细胞质中表达，ARID1A主要表达定位于细胞核，呈现阴性或弱阳性的表达。

2.2 在甲状腺癌及癌旁组织中CK19、ARID1A蛋白阳性表达情况比较

CK19在癌变组织中阳性表达率为88.71%，显著高于其在癌旁组织中的阳性表达率(33.33%)(P<0.05)，ARID1A在癌变组织中的阳性表达率为48.39%，显著低于其在癌旁组织中的阳性表达率(79.31%)(P<0.05)。见表1。

表1 在甲状腺癌及癌旁组织中CK19、ARID1A蛋白阳性表达情况比较(例，%)

2.3 在甲状腺癌组织中CK19、ARID1A的表达与临床病理特征的关系

CK19在Ⅰ、Ⅱ期甲状腺癌组织中的阳性表达率为64.29%，显著低于其在为Ⅲ、Ⅳ期中的95.83%(P<0.05)，CK19在肿瘤直径<1 cm的甲状腺癌组织中的阳性表达率为57.69%，显著低于其在肿瘤直径>1 cm中的96.94%(P<0.05)，CK19在有淋巴结转移甲状腺癌组织中的阳性表达率为95.12%，显著高于其在无淋巴结转移中的76.19%(P<0.05)，CK19在甲状腺癌组织中的阳性表达率与患者年龄、性别、病理类型和包膜侵犯无相关性(P>0.05)。

ARID1A在四种病理类型甲状腺癌组织中的阳性表达率随着其恶性程度的升高而逐渐降低，差异具有统计学意义(P<0.05)，ARID1A在有淋巴结转移甲状腺癌组织中的阳性表达率为56.76%，显著高于其在无淋巴结转移中的36.00%(P<0.05)，ARID1A在甲状腺癌组织中的阳性表达率与患者年龄、性别、分化程度、肿瘤直径和包膜侵犯无关(P>0.05)，见表2。

表2 在甲状腺癌组织中CK19、ARID1A表达与其病理特征的关系(例，%)

2.4 甲状腺癌组织中CK19、ARID1A表达与患者预后的关系

CK19和ARID1A在甲状腺癌组织中的阳性表达率均与患者的复发率和死亡率无显著相关性(P>0.05)，见表3。

表3 在甲状腺癌组织中CK19、ARID1A的表达与患者预后的关系(例，%)

3 讨论

2017年我国癌症中心统计的数据显示，甲状腺癌疾病的发病率在我国大、中、小城市分别为28.9%、12.9%、7.8%，对人类的生命安全造成极大威胁[6]。因此探究甲状腺癌发生、发展时的相关基因，以及其在癌细胞侵袭、转移时的作用机制，有利于甲状腺癌的早期诊断和治疗。CK19是由KRT19基因编码的构成细胞骨架的一种中间丝状物[7]，ARID1A是1个非常重要的抑癌基因，在细胞的增殖、分化，DNA的修复，肿瘤的发生、发展、转移与复发等方面发挥了重要的作用[8]。因此本研究通过观察CK19和ARID1A在BC和BN中的表达水平，来探究其与甲状腺癌临床病理参数及预后的关系。

本研究结果显示，CK19在BC中的阳性表达率88.71%显著高于其在BN中的阳性表达率33.33%，与林军等[9]的研究结果相类似，提示CK19对鉴别甲状腺肿瘤的良恶性有着重要意义。此外，研究结果还显示，CK19在有淋巴转移的甲状腺癌组织中的阳性表达率95.12%显著高于其在没有淋巴转移中的76.19%，在分化程度为Ⅰ、Ⅱ期的甲状腺癌组织中的阳性表达率64.29%显著低于其在分化程度为Ⅲ、Ⅳ期中的95.83%，在肿瘤直径<1 cm的甲状腺癌组织中的阳性表达率57.69%显著低于其在肿瘤直径>1 cm中的96.94%，说明CK19参与了甲状腺癌的发生发展过程，并且与肿瘤的转移密切相关，这可能是因为CK19可以增强细胞的运动性，而且还可以加强细胞外物质的降解。Laco等[10]报道甲状腺癌的甲状腺外转移与CK19的表达水平以及钙粘蛋白表达水平的下调密切相关。此外，Alix-Panabieres等[11]也推测CK19不仅可以作为甲状腺癌的肿瘤标志物,还在其分化、浸润、早期转移及复发的过程中起到了生物学作用。本研究结果显示，ARID1A癌变组织中的阳性表达率48.39%显著低于其在癌旁组织中的阳性表达率79.31%，在四种病理类型的甲状腺癌组织中的阳性表达率随着其恶性程度的升高而逐渐降低；并且在有淋巴转移的甲状腺癌组织中的阳性表达率56.76%显著高于其在没有淋巴转移中的36.00%。其原因是WI/SNF是1种重要的染色质重塑复合物，而ARID1A是其亚基里突变频率最高的基因，因此ARID1A基因的突变会导致染色质重塑异常，进而扰乱基因的表达，引发胃癌等多种肿瘤的发生。研究结果[12]显示，ARID1A的突变还能促使肿瘤细胞的侵袭和转移。此外，Wang等[13]的研究结果也发现，ARID1A的过表达会抑制癌细胞的形成，而其表达量过低会影响癌细胞的增殖和分化，进而导致患者预后情况不佳。

综上所述，甲状腺癌组织中CK19的阳性表达率高，且与癌细胞的发展、浸润与转移密切相关；而ARID1A的低表达或缺失与甲状腺癌发生、发展及转移相关，在不同病理组织类型的甲状腺癌中，恶性程度越高，ARID1A的表达水平越低。