乳酸脱氢酶与脂肪细胞因子resistin在胰腺癌中的表达及其临床意义

尚鸳鸳 朱桂丽 邢建强

胰腺癌是1种恶性程度很高的消化道恶性肿瘤[1-3]，死亡率较高，诊断和治疗均存在较大困难[4-5]。相关学者[6]发现肥胖人群中胰腺癌的发病率明显高于普通人群，但其机制尚不明确[7-8]。目前临床采取的治疗仍然是以外科手术治疗为主，并结合放化疗等综合治疗[9-11]。虽然手术是唯一可能根治的方法，但已有相关研究指出胰腺癌早期诊断困难，因此其治愈性切除率仅5%，术后5年生存率低且并发症多[12]。早期诊断和靶向治疗可以成为综合治疗的手段弥补手术治疗的不足。部分研究者认为监测癌胚抗原CEA和糖类抗原CA19-9能够早期提示胰腺癌患者的病情轻重并指导手术治疗[13-15]，然而其诊断结果假阳性率高。有研究发现乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase，LDH)和脂肪细胞因子resistin与胰腺癌预后有关。本文通过检测胰腺癌患者的LDH和resistin表达的情况，探讨乳酸脱氢酶与脂肪细胞因子resistin在胰腺癌中的表达及其临床意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

2013年6月至2019年1月我院收治的135例胰腺癌患者，男性78例，女性57例，年龄42～75岁，平均年龄(56.28±8.16)岁。参考2002年日本胰腺病协会修订的分期标准：Ⅰ期12例，Ⅱ期42例，Ⅲ期63例，Ⅳ期18例。收集患者的病理蜡块患者均对本研究知情且签署同意书。

1.2 入选标准

纳入标准：①术前未行放化疗；②病理确诊为胰腺癌；③接受根治性手术。排除标准：①精神疾病；②患者或家属不同意签知情协议书。

1.3 研究方法

将入组胰腺癌患者病理蜡块制备成切片后，依照试剂盒的说明书按次脱蜡，水化和抗原修复，滴入一抗兔抗人resistin抗体(SigmaR1779)，稀释浓度比值1∶200，磷酸缓冲溶液(PBS)作为阴性对照组，经冲洗后切片滴入二抗IgG(Dako EnVision K5007)，二氨基联苯胺(DAB)显色，封片及镜检。

采集经病理明确诊断的胰腺癌患者血清乳酸脱氢酶，通过TIMER数据库搜索LDH在135例胰腺癌组织中和正常胰腺组织中的差异表达及临床预后等情况。

1.4 脂肪细胞因子 resistin表达结果判断标准

Resistin阳性诊断(Volm方法)：依据切片中阳性细胞着色强度和所占比例，选择十个高倍视野判断结果。标本0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。阳性细胞所占比例0是0分，1%～25%是1分，>25%～50%是2分，>50%是3分。最后将阳性细胞着色强度和阳性细胞占比分值相加得出得分，<3分即阴性，≥3分即阳性。

1.5 随访

随访起始时间从首次根治性手术日期开始，无病生存期主要起点时间为初次LDH检查时间，主要终点时间为术后首次发现肿瘤复发、转移或其他原因死亡为止，末次回访时间为2019年5月。随访方式为电话回访与门诊复诊。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 胰腺癌组织中resistin表达

胰腺癌组织中resistin表达阳性率为49.1%(65/135)。resistin表达水平与年龄、性别、体质量指数无关(P>0.05)，与JPS病理分期有关(表1)。

表1 Resistin表达水平与胰腺癌临床参数的关系/例

2.2 Resistin表达与胰腺癌患者预后的关系

共有5例患者在研究中失访，余130例患者的中位随访时间为23(2～48)个月。截至末次随访，resistin阴性组和阳性组患者的中位无病生存期为分别为28个月、9个月，差异具有统计学意义(χ2=9.833，P<0.05)，见图1。

图1 resistin表达与胰腺癌患者预后的关系

2.3 LDH在胰腺癌中的表达

在胰腺癌中，LDH mRNA的表达水平为(13.35±1.06)，而正常胰腺组织中的表达水平为(4.43±3.32)。LDH mRNA在胰腺癌组织中的表达水平明显高于正常胰腺组织(t=29.738，P<0.05)，见图2。

图2 LDH在胰腺癌组织和正常胰腺组织中表达水平

2.4 胰腺癌患者预后影响因素Cox比例风险回归模型结果

Cox比例风险回归模型结果分析：年龄、LDH、肿瘤分期是影响胰腺癌患者预后的独立因素，见表2。

表2 Cox比例风险回归模型结果分析

3 讨论

Resistin为脂肪细胞因子分泌的多肽类细胞因子，位于人体染色体19p13.3，是108个氨基酸残基组成，分子结构含有半胱氨酸与丝氨酸残基，因二硫键链接的二聚体形式存在[16]。既往研究，胰腺癌患者更多的是通过CT和MRI进行检测和诊断。CT扫描具有简单、易操作、时间短等优点，MRT具有精准性的成像结果，然而，二者在一定程度上误诊率较高。目前领域，有学者[17]检测基质金属蛋白酶MMP2/MMP9在胰腺癌组织中mRNA和总蛋白的表达，发现有神经周浸润的胰腺癌组织MMP2/MMP9表达有所增加，但在早期胰腺癌组织中，MMP2/MMP9在癌旁组织与肿瘤组织中蛋白表达增加不明显。胰腺癌具有较强的侵袭性[18]，因此需要我们进一步探讨影响胰腺癌高侵袭转移性的相关机制与敏感基因对改善患者预后的意义[19]。资料报道[20]，resistin的生理功能和肥胖、胰岛素抵抗与慢性炎症有关。此外，还有相关实验证明，resistin 通过核转录因子-kB径路介导机体的炎症反应，促进肿瘤白介素-12，坏死因子-α等促炎因子合成表达增加，让机体保持过度炎症反应状态。本研究使用免疫组化方法对135例胰腺癌患者病理组织标本的脂肪细胞因子resistin 的表达情况进行检测，结果显示resistin 表达水平与胰腺癌JPS病理分期有关。Resistin表达阳性越高提示JPS病理分期越晚。同时resistin表达阳性者的无病生存期是短于表达阴性者。总结以上，resistin的表达可能和胰腺癌发生、发展均有联系。本研究还通过TIMER数据库所知，LDH表达在局部免疫微环境中呈正相关。史里等检测到LDH和转录因子Krvppel样因子4在胰腺癌组织中呈负相关。观察Cox比例风险回归模型，LDH能较为准确地评估胰腺癌临床预后，故LDH可能会被作为临床预后指标之一。此外，基于把肿瘤分期作为协变量，使用拟合函数方法分析，可能致使Cox比例风险回归模型结果没有统计学意义。本研究通过实验发现resistin 与LDH 在肿瘤分期上的表达水平出现了相关性。Resistin的高表达水平与血清LDH水平升高均作用于体内环境，促进肿瘤出现和进展，影响胰腺癌的预后。

综上所述，resistin及LDH参与胰腺癌肿瘤发生发展的过程，但是二者是如何在肿瘤局部免疫微环境中发挥作用，还需要进一步通过实验更深入发掘。