ZEB2蛋白表达和E-caderin蛋白对NPC转移的临床应用价值

张媛媛 陈选英 薛晓会

鼻咽癌(NPC)是1种常见的恶性肿瘤，多发地区在东南地区和中国南方，发病早期容易发生转移，是导致患者死亡的主要原因[1]。NPC患者进行放疗治疗不彻底，局部残留病灶导致复发，限制其疗效和预后。因此，研究NPC的转移机制和寻找疾病的分子标志物可以提高治疗效果，改善预后，具有重要的临床应用价值[2]。在肿瘤不断生长和增殖过程中，它们分泌的蛋白质不仅是肿瘤细胞生长，侵袭和转移所必需的，这些蛋白质还可以从肿瘤细胞分泌并进入血液中，作为肿瘤标志物[3]。上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)是1种重要的细胞粘附分子，粘附连接作用受到破坏时会导致细胞分离[4]。E-box结合锌指蛋白也称Zeb蛋白，是特异性DNA序列转录因子，其家族成员包括Zeb1和Zeb2[5]。在本研究中，我们从我们的病理中心和相应的鼻咽癌邻近标本中选取鼻咽癌转移标本，探讨转录抑制因子ZEB2蛋白表达和靶蛋白E-caderin蛋白在鼻咽癌转移中的临床应用价值。现有报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取在我院病理中心获取的术后鼻咽癌组织标本90例，符合要求的鼻咽癌癌旁标本90例，研究对象纳入时间2017年2月至2019年4月。纳入标准：①鼻咽癌的诊断标准参考《鼻咽癌规范化诊疗指南2013年版》中的标准；②术前经食管镜取活组织病检、术后病理学检查证实；③患者手术前未接受辅助性放化疗；④鼻咽癌癌旁组织标本为距离肿瘤边缘<5 cm的食管组织；⑤本研究获得医学伦理委员会的批准，研究对象的各种基础资料完整。排除标准：①伴有其他部位的原发性肿瘤；②因其他类型肿瘤实施放化疗；③伴有免疫系统疾病、长期使用免疫调节剂的患者；④合并其他类型的严重食管病变。

90例鼻咽癌患者，年龄43～79岁，平均(59.8±10.3)岁，TNM分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期36例、Ⅲ期29例、Ⅳ期4例；肿瘤组织分化程度：高分化20例、低分化32例、中分化38例；淋巴结转移阳性59例；浸润深度：肌层55例、未达肌层35例；病灶最大径>5 cm 47例。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化染色 将样品用甲醛固定，脱水并包埋在石蜡中。制备4 μm厚的连续切片，在65 ℃下脱蜡，并使用30 ml/l的过氧化氢使内源过氧化物酶失活5 min，微波修复抗原，在4 ℃湿盒中加入一抗过夜，在37 ℃下加入生物素化的二抗30 min，用辣根过氧化物酶标记的抗生物素蛋白在37 ℃加入30 min，然后用氨基苯甲酰胺冲洗(DAB)显色，苏木精复染，脱水，密封后在光学显微镜下观察。

1.2.2 免疫组化阳性结果判断 ZEB2、E-caderin蛋白阳性染色分别表达于细胞核和细胞质中，通过棕色或棕色的细胞核和/或细胞质判断阳性染色。每个切片选择5个400倍视野，计算阳性细胞的数量计算为肿瘤细胞总数的百分比：没有阳性细胞或阳性细胞<10%，其被判定为阴性;阳性细胞计数≥10%，并被判定为阳性。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 两组中ZEB2蛋白、E-caderin蛋白阳性表达率比较

鼻咽癌组织中的ZEB2蛋白、E-caderin蛋白阳性表达率(67.78%、71.11%)显著高于癌旁组织的22.22%、74.44%，差异具有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1 两组ZEB2蛋白、E-caderin蛋白阳性表达率比较(例，%)

2.2 ZEB2蛋白、E-caderin蛋白表达与鼻咽癌组织病理学参数的关系

ZEB2蛋白阳性表达率与TNM分期和浸润深度显著相关(P<0.05)；与淋巴结转移、病灶直径、组织学分化程度无显著相关(P>0.05)，见表2。

表2 ZEB2蛋白表达与鼻咽癌癌组织病理学参数的关系(例，%)

经比较发现，E-caderin蛋白阳性表达率与TNM分期和是否发生转移显著相关(P<0.05)；与病灶直径、组织学分化程度、浸润深度无显著相关性(P>0.05)，见表3。

表3 E-caderin蛋白表达与鼻咽癌组织病理学参数的关系(例，%)

2.3 鼻咽癌患者中ZEB2与E-caderin蛋白表达的相关性

鼻咽癌组织中Zeb2阳性病例中有42例E-cadherin阳性，Zeb2阴性病例中E-eadherin阳性率为75.86%(22/29)，两者表达呈显著负相关性(Z=0.031，P<0．000)(表4)。

表4 两组标本中ZEB2蛋白、E-caderin蛋白阳性表达情况比较(例，%)

3 讨论

在生长和增殖过程中，肿瘤不断与身体交换，它们分泌的蛋白质不仅是肿瘤细胞生长，侵袭和转移所必需的。这些蛋白质可以从肿瘤细胞分泌进入血液，成为肿瘤标志物，例如由前列腺癌细胞分泌的前列腺特异性抗原(PSA)和肝癌细胞分泌的甲胎蛋白可用作诊断，功效监测和复发及转移预测的肿瘤标志物[5-6]。肿瘤发展，侵袭和转移是涉及多个分子的多步骤，高选择性非随机过程，并且基因水平的变化不可避免地导致大量分泌蛋白功能发生变化[7]。然而，由于这些方法的局限性，以前关于肿瘤分泌蛋白的大多数研究都集中在单一或某些类型的蛋白质上[8]。随着蛋白质组学的出现，开始对分泌蛋白质进行研究，分泌蛋白不限于由经典分泌途径分泌的蛋白质，还包括由非经典分泌途径分泌的蛋白质，包括细胞表面脱落的蛋白质和其他途径释放的蛋白质，与肿瘤的发展密切相关[9]。

E-cadherin是1种钙依赖性跨膜糖蛋白，使细胞之间紧密连接，维持稳定的组织结构，它在各种上皮细胞中普遍存在，参与细胞内聚并在组织结构重建和形状维护中起着关键作用[10]。E-eadherin主要介导同源细胞的粘附功能，其表达降低或功能丧失降低了癌细胞与邻近细胞之间的粘附，导致肿瘤细胞的活性和活动范围增加，从而增加癌细胞的转移和浸润能力[11-12]。Zeb蛋白家族的成员，如Snail和Zeb，都含有螺旋-环-螺旋基序，可以特异性结合E-eadherin基因，促进E-cadherin在启动子区E-box中的表达[13]。据报道，Zeb1和Zeb2抑制各种肿瘤细胞中E-cadhefin的表达，Zeb与转录共抑制因子CtBP1结合形成转录抑制因子复合物，从而抑制E-cadhefin转录[14]。Zeb2通过与E-cadhefin基因启动子的E-box结合来抑制肿瘤细胞的表达[15]。

本次研究结果显示，鼻咽癌组织中的ZEB2蛋白、E-caderin蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织。推测ZEB2蛋白、E-caderin蛋白可能参与鼻咽癌的发生和发展过程。并且ZEB2蛋白阳性表达率与不同TNM分期和浸润深度比较，差异具有统计学意义；与淋巴结转移、不同病灶直径、不同组织学分化程度差异无统计学意义。E-caderin蛋白阳性表达率与不同TNM分期和是否发生转移组间比较，差异具有统计学意义；与不同病灶直径、不同组织学分化程度、不同浸润深度差异无统计学意义。说明ZEB2蛋白、E-caderin蛋白的表达均与病灶的直径无关，随着浸润的加深和TNM分期的增加，ZEB2蛋白阳性率显著增加；E-caderin蛋白的阳性率表达与分化程度及远处转移相关。NPC患者ZEB2和E-caderin蛋白表达的相关性来看，两者表达呈显著负相关。两者之间存在调节关系，促进NPC的侵袭和转移;联合检测ZEB2和E-caderin有望成为评估肿瘤恶性生物学行为的参考指标。

综上所述，ZEB2、E-caderin在鼻咽癌组织中表达上调，与NPC的发生发展密切相关。