甲状腺微小乳头状癌中BRAF V600E基因突变的临床意义

李秀萍，陈 燕，杨国青，熊 薇，牛 健

(西安市中心医院病理科，陕西 西安 710002)

甲状腺癌在我国城市地区女性所患恶性肿瘤中居于第四位，源自甲状腺滤泡或者滤泡旁的上皮细胞，其中甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma，PTC)占全部甲状腺癌的85%～90%[1]。世界卫生组织对于甲状腺微小乳头状癌(Papillary thyroid microcarcinoma，PTMC)界定为直径≤10 mm，也就是说只要最大径≤10 mm，无论有没有淋巴结转移，都可以定义为PTMC。随着彩色多普勒超声检查技术的普及和人们对健康的日益重视，PTMC的检出率随即升高，而大多PTMC为惰性肿瘤，患者可长期与癌共存而不影响生活质量。鉴于此，只要定期检测肿瘤就好。但是有些PTMC被发现时已经发生淋巴结转移，因此失去手术最佳治疗时机，为此，笔者回顾性分析经本院诊治的PTMC患者，为PTMC的恰当治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集西安市中心医院2017年10月至2020年3月经外科手术治疗的PTMC患者70例，其中女性42例，男性28例，年龄19～68岁，平均年龄(43.8±10.4)岁。所有患者经过手术治疗并对中央区淋巴结和/或患侧区淋巴结清扫，术后经病理学检查符合PTMC，无论是否有淋巴结转移。

1.2 主要试剂及仪器

人类BRAF V600E突变检测试剂盒(荧光PCR法)购于福建厦门艾德生物科技股份有限公司，福尔马林固定石蜡包埋组织切片(FFPE)核酸提取试剂盒购于福建厦门艾德生物科技股份有限公司。仪器：SLAN-96S荧光定量PCR仪。

1.3 检测方法

按照脱氧核糖核酸提取试剂盒操作步骤分离脱氧核糖核酸，并用分光光度计检验脱氧核糖核酸质量，260 nm和280 nm波长下吸光度比值范围在1.6～2.2合格。按照人类BRAF V600E突变检测试剂盒要求及操作顺序进行PCR扩增，最后收集信号，判读结果。

1.4 统计学方法

使用SPSS 18.0统计软件进行数据处理，计数资料用卡方检测，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

在70例PTMC患者中，BRAF V600E突变型(样本扩增曲线呈S型且Ct值<30，见图1)40例，BRAF V600E野生型(样本扩增曲线不呈S型，见图2)30例，BRAF V600E突变率为57.1%，在伴有淋巴结转移的PTMC中BRAF V600E突变率为100%，明显高于没有淋巴结转移的PTMC，差异具有统计学意义(P<0.05)。在其他临床病理学特征中(性别、年龄、伴结节性甲状腺肿或桥本甲状腺炎)BRAF V600E突变没有显著差异(P>0.05，见表1)。

图1 BRAF V600E突变型

图2 BRAF V600E野生型

表1 BRAF V600E突变与PTMC临床病理学特征关系

3 讨论

BRAF基因编码RAF家族的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，位于人类的7号染色体，是RAS-RAF-MEK-ERK/MAPK信号转导通路的重要组成部分，在细胞的分裂及增生转化中充分发挥着不可或缺的作用[2]。BRAF V600E位于BRAF基因第15外显子，它的突变是15外显子的T1799A点突变，致使其编码产物发生改变，缬氨酸(V)被谷氨酸(E)替代(命名为V600E)，从而让细胞分裂能力提高，诱导异常增殖，促使肿瘤发生[3]。在结肠癌、甲状腺乳头状癌、卵巢浆液性癌均能检测到BRAF V600E的突变，另据研究[4]在黑色素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)中BRAFV600基因分别有50%、4%的突变率。

在PTC中，肿瘤的发生、进展与BRAF V600E突变息息相关，BRAF V600E在本次实验PTMC中的突变率占57.1%，其中伴淋巴结转移的病例全部突变，而在没有伴淋巴结转移的病例中突变率占50%。谢伯剑，等[5]曾对行中央淋巴结清扫的200例PTMC患者进行研究，注意到BRAF V600E突变阳性率为84.5%，并证实BRAF V600E突变与中央区淋巴结转移之间存在一定关联，能很好地预测PTMC的淋巴结转移情况。PTMC患者中，有文献报道中央区淋巴结转移率高达20%～65%[6]，在病理学诊断为T3、T4期的PTMC患者中，伴颈部淋巴结转移概率分别为20.7%、7.2%，最易受累的中央区淋巴结转移概率高达82%[7]，可见，在病变的早期妥善处理淋巴结尤为重要。而BRAF V600E突变能很好地预测淋巴结转移情况，可对术中方式提供主要的参考。

桥本甲状腺炎与结节性甲状腺肿是良性病变，桥本甲状腺炎在显微镜下可见甲状腺组织内大量的淋巴细胞伴有淋巴滤泡形成及其他炎细胞浸润，正常的甲状腺组织破坏，滤泡腔胶质浓稠，上皮有嗜酸性变。结节性甲状腺肿是甲状腺的滤泡呈结节状增生。本研究结果显示，在PTMC中无论是否合并桥本甲状腺炎或结节性甲状腺肿，BRAF V600E突变没有明显不同，它们似乎并不影响BRAF V600E的基因表达。深入研究得出结论，PTC与桥本甲状腺炎合并时，癌细胞的侵袭性更低，BRAF V600E突变也会相应调低[8]，Park，等[9]认为桥本甲状腺炎抑制肿瘤进展可能与降低骨桥蛋白表达有关。对于结节性甲状腺肿，目前相关研究均表明BRAF V600E基因不存在突变[5，10]。

总而言之，在PTMC中，BRAF V600E的突变与淋巴结转移密切相关，通过检测BRAF V600E突变情况可指导临床进一步对手术方式的选择，比如对于突变型结合影像资料早期行淋巴结清扫。