EV71型IgG、IgM和IgA抗体在手足口病诊断中的意义

赖芳， 温欢雨， 梁雪燕

手足口病多发生于年龄<5岁的婴幼儿，由多种不同的肠道病毒引起，临床表现为口腔及四肢部位出现斑丘疹、疱疹等，可累及中枢神经和呼吸系统，导致神经源性肺水肿、无菌性脑膜炎、脑干脑炎等危重状况，有传染性，且致死率及致残率均较高，为儿童的生命健康带来巨大的威胁和挑战[1-2]。肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是手足口病常见的致病病毒，易产生脑干脑炎等严重中枢神经系统并发症，疾病进展快，病情重，幸存患儿常伴随显著的疾病后遗症[3]。快速检测病原菌，及早确诊，进行对症治疗对手足口病患儿的预后非常重要[4]，本研究以2019年3月至2020年3月我院收治的手足口病患儿为研究对象，探究EV71型IgG、IgM和IgA抗体在手足口病诊断中的应用价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2019年3月至2020年3月在我院就诊的EV71感染的手足口病患儿116例为研究对象，其中普通型67例和重症49例。普通型患儿中男32例，女35例；年龄0.4～6岁，平均(2.37±1.68)岁。重症患儿中男24例，女25例；年龄0.4～6岁，平均(2.66±1.93)岁。普通型患儿和重症患儿在性别、年龄方面比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 诊断标准 参照《手足口病诊疗指南(2018年版)》中手足口病的诊断标准[5]。轻症患儿仅发热或在口腔或四肢部位出现皮疹，重症患儿出现神经系统或心肺系统并发症。

1.3 纳入标准 (1)符合手足口病的诊断标准；(2)年龄0.4～6岁；(3)病程<5 d的急性期患儿；(4)本研究经医院伦理委员会审批，患儿家属知情同意。

1.4 排除标准 (1)近期应用免疫调节剂者；(2)合并结核等其他病原菌感染者；(3)并发恶性肿瘤者；(4)合并免疫系统功能异常者。

1.5 方法 取患儿的咽拭子或粪便样本，加入500 μL HBSS溶液，混匀，8 000 r/min离心5 min(离心半径10 cm)，取上清提取RNA，使用EV71 RNA检测试剂盒(中山大学达安基因股份有限公司)，进行EV71的核酸检测，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，判定标准为Ct值<35为阳性，Ct值≥35需重复检测，无Ct值为阴性。清晨采集手足口病患儿空腹状态下的静脉血3 mL，3 000 r/min离心10 min(离心半径10 cm)，取血清进行抗体检测。使用EV71-IgM、EV71-IgG、EV71-IgA抗体检测试剂盒(上海金标生物科技有限公司)进行检测，检测原理为胶体金免疫层析法，操作严格按照试剂说明书进行，判定标准为仅对照区出现红线为阴性，仅检测区出现红线为结果无效，需重新检测，对照区和检测区均出现红线为阳性。

1.6 统计学方法 使用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 手足口病患儿EV71型IgG、IgM和IgA抗体检出情况 116例患儿中核酸检测阳性率为72.41%(84/116)，EV71型IgM抗体阳性检出率为68.10%(79/116)，IgG抗体阳性检出率62.07%(72/116)，IgA抗体阳性检出率60.34%(70/116)，与EV71核酸检测阳性率比较，差异均无统计学意义(χ2=0.516，2.818，3.786，P>0.05)。

2.2 不同病情EV71感染手足口病患儿的EV71型IgG、IgM和IgA抗体检出情况 重症手足口病患儿的EV71型IgM、IgG抗体阳性率高于普通型，差异均有统计学意义(P<0.01)；重症和普通型手足口病患儿的EV71型IgA抗体阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同病情EV71感染手足口病患儿的EV71型IgG、IgM和IgA抗体检出情况[n(%)]

3 讨论

手足口病是近年来高发的儿科急性传染病，一年四季均可发病，4～7月发病率最高，多发于婴幼儿，起病急，进展快，为患儿家庭带来了沉重的经济生活负担，影响儿童的健康成长，成为各国日益关注的公共卫生问题[6-7]。EV71和柯萨奇病毒A16是手足口病的主要致病原，EV71发现于1969年，基因组为单股正链RNA分子，颗粒为球形结构，表面无突出和包膜，EV71感染在手足口病流行中占比较高，部分患儿并发中枢神经等系统的并发症而死亡[8-9]。因此，对手足口病患儿进行早期诊断和对症干预有重要意义。

目前手足口病感染的病原学诊断金标准为病毒分离培养，但该法操作要求高，耗时长且成本高，随着分子生物学的发展，实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)成为病毒诊断的重要方法[10]。患儿感染EV71病毒后，机体产生免疫应答，在抵抗病毒和自身恢复过程中发挥重要作用。IgM抗体是在病毒感染早期即产生的免疫球蛋白，恢复期血清浓度下降或消失，林威等[11]发现发病第1天患儿体内即可产生EV71型IgM抗体，发病5～8 d时血清浓度达峰值，在疾病的早期诊断中显示出较好的效果。IgG抗体则是机体抗感染的重要部分，可中和有害代谢物、毒素和病原体，疾病恢复期IgG抗体的血清可达平时数倍；呼吸道分泌型的IgA抗体可预防局部感染，在防御外来病原体方面有重要作用[12]。

本研究对实时荧光定量PCR法和EV71型IgG、IgM和IgA抗体检测对手足口病患儿的检出能力进行统计，结果显示和实时荧光定量PCR相比，EV71型IgG、IgM和IgA抗体检测阳性率无显著差异，提示核酸检测和血清学检测在检测能力上相差不大。血清学检测对实验设备和操作技术要求较低，检测所需时间短，成本低，逐渐在基层医疗机构推广使用。重症手足口病患儿的EV71型IgM抗体阳性检出率高于普通型，提示EV71感染是引发重症的危险因素，可根据EV71型IgM抗体检测结果进行快速分疹，做好防护，进行对症治疗，改善患儿预后[13]。有研究报道EV71型IgG3抗体能够介导抗体依赖性病毒感染增强作用，加重病情，而无中和病原体的活性[14]，本研究中重症手足口病患儿的血清EV71型IgG抗体阳性检出率高于普通型，可能与EV71型IgG介导的抗体依赖性增强效应参与疾病进程，导致更严重的临床表现有关，提示可考虑研发中和抗体的EV71疫苗，以避免潜在的抗体依赖性增强效应现象。分泌型IgA抗体发挥预防局部感染的作用，有研究显示和对照组相比，手足口病患儿的血清IgA抗体降低，降低机体呼吸道防御能力，更易发生口腔皮疹[15]。本研究中重症患儿和轻症患儿的EV71型IgA阳性检出率无显著性差异，提示临床治疗中可适当补充免疫球蛋白，增强患儿免疫能力。

综上所述，EV71型IgM、IgG和IgA抗体检测在手足口病诊断中有较好的诊断能力，重症手足口病患儿的血清EV71型IgM和IgG抗体阳性检出率高于轻症患儿，进行血清学抗体检测对于手足口病的分诊和对症治疗有重要意义。