鄂种植基地雷公藤中有机氯农药残留量测定

肖安菊，龚达林，刘三波，喻 昕

（1.湖北理工学院医学院，湖北 黄石 435003；2.华润三九（黄石）药业有限公司，湖北 黄石 435003）

六六六、滴滴涕、五氯硝基苯等有机氯农药对人畜有毒，对环境有极大的危害［1］，虽然中国于1983年禁止生产和使用，但由于它们在土壤中降解极其缓慢［2］，造成中国多个省（市）土壤污染现象很严重［3］，植物生长过程中还是有少量吸收，故《中国药典》2015年版对黄芪、甘草等多种药材中有机氯农药残留量进行了限定［4］；中国对外贸易经济合作部发布的《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》则对药用植物原料、饮片、提取物及制剂都规定了有机氯农药限量标准［5］。华润三九（黄石）制药采集湖北通城和湖南益阳的雷公藤（Tripterygium wilfordii）种源在黄石市阳新县种植了万亩雷公藤，对雷公藤根中9种有机氯农药残留量进行了检测，对全面评价雷公藤的药用品质和制定有机氯残留量限定标准具有一定的指导意义。

1 材料与方法

1.1 材料、仪器与试药

雷公藤采自黄石市阳新县种植基地，分别是用种子、根、茎不同部位繁殖生长5年，湖北通城和湖南益阳的2个种源分别编号为TJ、TG、TZ、YJ、YG、YZ。12月采集各样品，根洗净，晒干，粉碎，过60目筛，试验前60℃烘烤4 h，备用。

Agilent7980B气相色谱仪、ECD检测器、HP-5柱（30 mm×0.25 mm×0.25μm），Agilent公司；SB-25-12DT超声波清洗仪，宁波新芝生物科技有限公司；BSA124S万分之一电子天平，赛多利斯科学仪器有限公司；DHG-9140A电热恒温鼓风干燥箱，上海姚氏仪器设备厂；RE100-Pro旋转蒸发仪，大龙兴创实验仪器（北京）有限公司。

（α-、β-、γ-、δ-）六六六标准溶液（100μg∕mL）、五氯硝基苯标准溶液（100μg∕mL）、（O，P’-DDT、P，P’-DDT、P，P’-DDE、P，P’-DDD）滴滴涕标准溶液（100μg∕mL）均购于农业部环境质量检验监督测试中心；正己烷、二氯甲烷、丙酮（农残级，MREDA）、硫酸，优级纯，国药集团；色谱用硅胶，青岛海洋化工有限公司；无水硫酸钠，优级纯，武汉市洪山中南化工试剂有限公司。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 依据《中国药典》2015版第四部2341项下方法修改测定。测定条件：分流进样量1μL，进样口温度290℃，检测器温度300℃，载气为高纯N2。程序升温：色谱柱100℃保持1 min，以4℃∕min升至200℃，再以2℃∕min升至230℃，以8℃∕min升至280℃并保持15 min。

1.2.2 供试品溶液制备 取雷公藤粉末10 g，精密称定，置于广口瓶中，加入丙酮∶二氯甲烷（1∶2）混合溶液90 mL，超声处理30 min。移至索氏提取器中，用50 mL丙酮∶二氯甲烷（1∶2）混合溶液清洗广口瓶，收集超声液和洗液于圆底烧瓶，索氏回流提取8 h（90℃）。提取液旋转蒸发近干（40℃），40 mL正己烷分3次倒入替换残留的原溶剂。再用10 mL正己烷分3次润洗圆底烧瓶，合并洗液于离心管中，加1 mL浓硫酸，振摇1 min，离心10 min（3 000 r∕min）。取5 mL上清液于色谱柱纯化（层析柱自下而上装填3 g无水硫酸钠、6 g硅胶、3 g无水硫酸钠，且预先用15 mL正己烷淋洗柱），用40 mL正己烷∶二氯甲烷（3∶2）混合液洗脱，收集洗液于茄形瓶，旋转蒸发至近干，分别用1、0.5、0.5 mL正己烷润洗茄形瓶，收集洗液于EP管中，微滤即得［6-8］。

1.2.3 标准曲线的制备 精密量取六六六、DDT和五氯硝基苯标准品溶液（100μg∕mL）各100μL，于25 mL容量瓶中，加正己烷制成400 ng∕mL的混合贮备液。分别取储备液适量于10 mL容量瓶中，加正己烷稀释制成5、10、15、20、25、30 ng∕mL的梯度混合溶液，进样检测，绘制标准曲线。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

9种有机氯农药对照品的标准曲线见表1，混合对照品和样品的色谱见图1。

表1 9种有机氯农药对照品的标准曲线

图1 9种有机氯对照品和样品图谱

2.2 精密度试验

取梯度混合溶液，连续测定5次，按照峰面积计算，（α-、β-、γ-、δ-）六六六、五氯硝基苯、O，P’-DDT、P，P’-DDT、P，P’-DDE、P，P’-DDD的RSD依次是1.38%、2.58%、0%、0%、1.19%、0%、3.02%、1.67%、0%，说明仪器精密度很好。

2.3 稳定性试验

取益阳种源茎繁殖的雷公藤样品10 g，精密称定，依照“1.2.2”的方法制备供试品溶液，按照“1.2.1”条件，于0、4、8、12、16 h测定5次 ，（α-、β-、γ-、δ-）六六六、五氯硝基苯、O，P’-DDT、P，P’-DDT、P，P’-DDE、P，P’-DDD的平均含量分别为0.003 0、0.028 3、0、0、0.002 1、0、0.001 5、0.002 0、0μg∕g，RSD分别为3.22%、3.19%、0%、0%、2.79%、0%、2.87%、1.98%、0%，表明所建立的方法稳定性良好。

2.4 加样回收试验

取益阳种源茎繁殖的雷公藤样品10 g，分别精密加入混合贮备液100、300、500μL，各3份，依照“1.2.2”制备供试品溶液，按照“1.2.1”条件测定，计算每种农药的平均回收率及RSD，结果见表2。

表2 样品的加样回收试验结果 （单位：%）

2.5 样品含量测定

取雷公藤各样品10 g，各品种平行做3份，依照“1.2.2”制备供试品溶液，按照“1.2.1”条件分别测定，读取峰面积数据代人回归方程计算含量，结果见表3。

表3 各样品中9种有机氯农药含量（n=3） （单位：μg∕g）

3 讨论

有机氯农药残留量较低，而中药中杂质较多，故本研究选用超声与回流提取相结合保证有机氯农药提取完全；仅用磺化的方法纯化，供试品淡黄色，采用磺化与硅胶柱色谱串联纯化方法，供试品无色，很大程度减少了杂质的干扰。

试验结果表明，有机氯残留量与雷公藤种源、繁殖方式无关，主要是受到种植基地土壤中残留量的影响。相对于其他3种异构体，β-六六六的积蓄性最强，在雷公藤中含量最高；滴滴涕总体含量较低。黄石阳新种植基地的雷公藤中残留了少量有机氯农药。按照2015版《中国药典》标准（≤0.2μg∕g）和2001版《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》对药材中有机氯的含量限量标准（≤0.1μg∕g），湖北通城和湖南益阳2个种源3种繁殖方式种植5年的雷公藤中9种有机氯残留量均符合标准。就农残而言，湖北阳新适合种植雷公藤药材。研究为雷公藤药材质量控制和质量标准的提升提供了有效方法和科学依据。