气相色谱法同时测定甲磺酸伊马替尼原料药中7 种有机溶剂残留量*

2021-06-28沈丹丹王建华罗立骏曾令高

中国药业 2021年12期

邹江，沈丹丹，王东，王建华，罗立骏 △，曾令高

（1. 重庆市食品药品检验检测研究院·麻醉精神药品质量监测重点实验室，重庆 401121； 2. 重庆大学生物工程学院，重庆 400044）

甲磺酸伊马替尼是全球首个获批的小分子酪氨酸激酶抑制剂，其对 BCR － ABL 酪氨酸激酶［1－3］、血小板衍生生长因子受体［4］和 c － kit 酪氨酸激酶［5］有高度特异性，且不影响正常造血干细胞的生长。人用药品注册技术要求国际协调会议《残留溶剂的指导原则》（Q3C）指出，残留溶剂是指原料药（API）、辅料及制剂的生产过程中使用过的溶剂，通过分离、纯化等步骤不能保证完全将其除去，通常是指有机溶剂。20 世纪90 年代，残留有机溶剂的毒性及致癌作用引起了各国研究机构和监管部门的重视，将其作为药品质量控制的一个重要内容。甲磺酸伊马替尼原料药在其合成、晶型制备等过程中使用了多种有机溶剂［6－9］，如二类溶剂甲醇、四氢呋喃、N，N－二甲基甲酰胺（DMF），三类溶剂乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯，均对人体和环境具有潜在毒性，甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、DMF 的限度分别为 0.3% ，0.5% ，0.5% ，0.5% ，0.5%，0.072% ，0.088%［10］。本研究中参照 2020 年版《中国药典（四部）》通则 0861 残留溶剂测定法［11］，建立了毛细管气相色谱法同时测定甲磺酸伊马替尼原料药中上述7 种有机溶剂含量，并进行了方法学研究。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

7890B 型气相色谱仪，包括FID 检测器（美国Agilent公司）；XPE205 型电子分析天平（瑞士 MettlerToledo 公司）。

1.2 试药

甲磺酸伊马替尼原料药（石药集团欧意药业有限公司，批号分别为 695171257，695180104，695180203）；乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、二甲基亚砜均为分析纯，甲醇、四氢呋喃、DMF 均为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：以6%氰丙基苯－94%二甲基硅氧烷为固定液的 Agilent DB － 624 型毛细管柱（30 m × 320 mm，1.8 μm）；程序升温：初始温度为 45 ℃，保持 4 min，再以 15 ℃ ／min 的速率升至 200 ℃ ，保持 2 min；载气：氮气；流速：2 mL ／min；进样口温度：220 ℃，分流比：15 ∶1；检测器：火焰离子化检测器；检测器温度：250 ℃；氢气流量：40 mL ／min；空气流量：400 mL ／min；进样量：1 μL。

2.2 溶液制备

取甲醇 3.010 3 g、乙醇 5.023 9 g、丙酮 5.015 5 g、异丙醇 5.007 6 g、乙酸乙酯 5.223 9 g、四氢呋喃 0.743 2 g、DMF 0.921 0 g，精密称定，分别置 100 mL 容量瓶中，用二甲基亚砜定容，摇匀，各精密量取5 mL，置同一50 mL容量瓶中，用二甲基亚砜定容，即得混合对照品贮备液，精密量取5 mL，置50 mL 容量瓶中，用二甲基亚砜定容，即得混合对照品溶液。取甲磺酸伊马替尼约1 g，精密称定，置10 mL 容量瓶中，用二甲基亚砜溶解并定容，摇匀，即得供试品溶液。取二甲基亚砜作为空白溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验：取2.2 项下空白溶液和混合对照品溶液各适量，按2.1 项下色谱条件进样分析，色谱图见图1。甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、DMF 依次出峰，分离度均大于1.5，基线分离良好；空白溶液在与上述7 种对照品溶液相同保留时间处无干扰峰，表明专属性良好。

线性关系考察：精密量取2.2 项下混合对照品贮备液0.25，1.00，2.50，5.00，7.50，10.00 mL，分别置 50 mL容量瓶中，用二甲基亚砜定容，摇匀，制成系列溶合对照品溶液，取适量，按2.1 项下色谱条件进样测定，以峰面积（A）为纵坐标、各成分质量浓度（C，mg／mL）为横坐标进行线性回归。结果见表1。

检测限考察：精密量取2.2 项下混合对照品贮备液0.5 mL，置100 mL 容量瓶中，用二甲基亚砜定容，摇匀，按 2.1 项下色谱条件进样测定，以信噪比（S ／ N）＝3 计算检测限。结果见表1。

图1 气相色谱图1.methanol 2.ethanol 3. acetone 4.isopropanol 5. tetrahydrofuran 6.ethyl acetate 7.dimethylformamideA.Blank solution B.Mixed reference solutionFig.1 GC chromatograms

表1 7 种有机溶剂的线性范围、回归方程、检测限Tab.1 Linear range，regression equation and LOD of seven organic solvents

精密度试验：取 2.2 项下混合对照品溶液，按2.1 项下色谱条件连续进样6 次，记录峰面积。结果甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、DMF 峰面积的 RSD 分别为 1.72% ，2.03% ，2.20% ，2.22% ，2.12%，2.04%，4.91%（n ＝ 6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取2.2 项下混合对照品溶液适量，室温下放置 0，2，4，8，12 h 后，按 2.1 项下色谱条件进样测定，计算各成分峰面积。结果甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、DMF 的 RSD 分别为4.37%，6.95% ，8.32% ，14.94% ，4.72% ，7.22% ，11.57%（ n ＝5），表明对照品溶液室温下放置8 h 内相对稳定。

加样回收试验：取甲磺酸伊马替尼约0.5 g，精密称定，置5 mL 容量瓶中，共9 份，分别加入约相当于各成分限度50%，100%，150%的混合对照品溶液，用二甲基亚砜定容，平行3 份，按2.1 项下色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表2。

2.4 样品含量测定

取3 批原料药，按2.1 项下色谱条件进样测定。结果7 种残留有机溶剂含量测定结果均低于检测限。

3 讨论

DMF 的沸点很高，不宜采用顶空进样法，采用直接进样法灵敏度高，精密度及重复性好。选择溶剂时，由于四氢呋喃、DMF 限度要求较低，对灵敏度要求高，因此需制备的样品质量浓度很高。样品仅在水、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜中的溶解度满足要求，若采用二甲基乙酰胺为溶剂，会对DMF 的检测产生较大干扰，同时考虑到直接进样，以水为溶剂影响色谱柱使用寿命，故采用二甲基亚砜为溶剂。选择色谱柱时，本研究中涉及的有机溶剂极性差异较大，采用常见的非极性和弱极性色谱柱 HP －1（30 m × 0.25 mm，1.0 μm）和HP － 5（30 m ×0.25 mm，1.0 μm），发现丙酮和异丙醇难以实现基线分离；采用强极性色谱柱 DB－WAX（30 m×0.25 mm，0.25 μm），HP － Innowax（30 m × 0.25 mm，0.5 μm），HP － Innowax（30 m × 0.32 mm，0.5 μm），异丙醇和乙醇的分离度均不佳。同时发现，使用上述色谱柱时均存在不同程度的空白干扰。选用中等极性色谱柱DB － 624，能实现对各组分的良好分离，未发现空白干扰。

本研究中建立了同时测定甲磺酸伊马替尼中7 种残留溶剂含量的方法，3 批样品的检测结果均符合有关规定。所建立的方法操作简便、快速，灵敏度及回收率均较高，可为制订及完善甲磺酸伊马替尼原料药相关法定标准提供参考。