养殖实训场主要病原菌耐药性检测

张业怀

（广西农业职业技术学院，广西 南宁 530007）

随着养殖实训场饲养动物的种类、数量及排泄物不断增多，随之带来的是环境污染、动物发病增多，抗生素长期使用导致病原菌耐药性产生严重。为了更好地防控动物疫病发生，减少环境污染，降低病原菌耐药风险，以广西农业职业技术学院养殖实训场为调研对象，对养殖实训场环境中细菌种类及主要病原菌污染及耐药情况进行调查研究，以期为养殖实训场的环境控制和临床用药提供科学指导。

1 材料与方法

1.1 试验菌株

选取广西农业职业技术学院养殖实训场前期调查研究分离鉴定获得的具有致病性作用的大肠杆菌（6 株）、沙门氏菌（5 株）、葡萄球菌（12 株）和不动杆菌（6株）共29株。

1.2 培养基及药敏纸片

普通琼脂培养基、肉汤培养基由本实验室提供；16 种抗生素药敏纸片（见表1、3），均购自杭州微生物试剂公司。

1.3 试验菌株的药敏性检测

采用药敏纸片琼脂扩散法对种4 主要病原菌进行药敏试验，即将各种病原菌接分别接种肉汤培养基，37℃培养24h，然后用灭菌生理盐水稀释，用细菌平板计数法测定并稀释成含菌量为1×106菌悬液，用灭菌棉签均匀涂布于普通琼脂平板上，每个平板均匀地贴5 张药敏纸片于培养基上，置37℃培养24～48h，分别用游标卡尺测量抑菌圈直径，每株菌做2个重复，判定标准参照美国临床实验室标准化协会（CLSI，2013）推荐的标准，分析4 种主要病原菌的耐药情况。耐药率是按同一种细菌的耐药株数除以总株数×100%来计算。

2 结果与分析

2.1 4种病原菌耐药性试验

将4 种病原菌（29 株）对16 种抗生素药敏试验结果列于表1，从表1可看出，29株细菌对红霉素、链霉素、卡那霉素、青霉素的耐药率均较高，分别为86.21%（25/29）、89.66%（26/29）、96.55%（28/29）、79.31%（23/29）；对头孢噻肟、吡哌酸、恩诺沙星、左氟沙星、环丙沙星、先锋霉素和丁胺卡那霉素敏感，其中吡哌酸和头孢噻肟对4 种主要病原菌未检出耐药菌株。

表1 养殖场4种主要病原菌耐药率

2.2 4种病原菌多重耐药性检测

将4 种病原菌对多种抗菌素耐药的结果进行统计列于见表2，结果表明：4 种病原菌均存在多重耐药菌株，其中，耐3 种抗生素以上的菌株占86.21%（25/29），耐6 种抗生素以上的菌株占44.83%（13/29），耐9 种抗生素的菌株为4 株，所占比例13.79%（4/29）（见表2）。但不同菌种的菌株多重耐药现象存在差异，其中大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌的所有菌株均具有多重耐药性。

表2 养殖场4种主要病原菌的多重耐药性

2.3 不同环境中病原菌的耐药性

将不同来源菌株进行耐药性比较，结果显示，空气、水和土壤中的主要病原菌对抗菌药物的平均耐药率为30.31%、57.50%、17.91%，水样本中的分离菌株耐药性最强（见表3）。

表3 养殖场不同环境来源菌株的耐药性

3 讨论与结论

在养殖过程中，抗菌药物的大量使用或使用不合理，容易导致细菌产生耐药性，往往是从对药物敏感逐渐变为耐药，由耐一种药物到耐多种药物［1］。随着耐药菌株增多及耐药谱越来越广，一些在兽医临床上未使用的新型抗菌药物也表现出很强的耐药性［2］。本课题研究发现，养殖实训场的空气、水体及土壤中存在大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、不动杆菌、变形杆菌、蜡样芽胞杆菌、产气荚膜梭菌、破伤风杆菌和李氏杆菌等多种致病菌或条件致病菌，其中以大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、不动杆菌为主。

大肠杆菌和沙门氏菌是养殖实训场动物肠道常见的主要病原菌，采用抗菌药物联合用药进行治疗，一般能得到很好的控制。但如用药不规范或者存在耐药菌株，会导致治疗效果差及治疗成本增加，给养殖实训场造成经济损失。同时长期使用或滥用抗菌药物会造成细菌的耐药进而发生耐药基因的转移，给人类健康造成威胁［4］。研究试验结果表明，不同的样本、不同来源的大肠杆菌和沙门氏菌菌株对药物敏感存在较大差异，且以沙门氏菌耐药性最高，平均耐药率为45%，这可能与养殖实训场平常预防和治疗使用抗菌药物的种类、次数及作为促生长的饲料添加剂长期使用有关。调查发现，该养殖实训场除了承担教学实习功能外，也是学生养殖实践基地。学生为了预防疾病和促进养殖动物的生长，平时常用一些抗菌药物作为饲料添加剂。大肠杆菌和沙门氏菌对头孢噻肟、吡哌酸、恩诺沙星、左氟沙星、环丙沙星、先锋霉素和丁胺卡那霉素敏感。

葡萄球菌广泛分布于自然界中，是养殖实训场中继发感染及外科感染的主要病原菌，常引发皮肤感染渗出性皮炎、蜂窝组织炎、乳房炎、关节肿大和脓肿及全身感染如败血症、脓毒症等。据原卫生部2004～2005 年《细菌耐药性监测网》报告指出，我国的葡萄球菌特别是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性葡萄球菌耐药性都在60%以上［5］，本课题研究发现，葡萄球菌广泛分布于养殖实训场的空气、水体及土壤中，分离率在41%（12/29）以上，在动物群高密度饲养、气候闷热及转群和运输等应激下，容易发生葡萄球菌病。研究试验结果表明，12 株葡萄球菌对红霉素、链霉素、卡那霉素、青霉素严重耐药，但对头孢噻吩、吡哌酸、恩诺沙星、环丙沙星、左氟沙星和氨卞西林敏感，因此在发生此类疾病时可考虑使用这些敏感药物进行治疗。

不动杆菌是一类不发酵糖类、氧化酶阴性、无鞭毛、无动力的革兰氏阴性杆菌，在自然界分布广泛，是重要的病原菌，能导致动物发生奶牛子宫内膜炎、仔猪肺部感染及马流产等疾病［6］。本试验结果表明所分离的不动杆菌对链霉素和卡那霉素耐药，对头孢噻吩、恩诺沙星、吡哌酸、阿奇霉素、丁胺卡那霉素、左氟沙星和新霉素敏感。

研究发现，饲料添加剂中滥用抗菌药物、发生细菌性肠道疾病的动物的排泄物没经过无害化处理直接进入环境水体中，已经成为耐药菌株产生的重要源头，因此养殖实训场应严格做好粪污无害化处理，同时要做好栏舍清洁卫生、定期全面消毒、不定期开展细菌耐药性监测等，指导首选敏感抗菌药物进行疾病治疗，防止过度用药，同时做好免疫接种工作等，只有这样才能有效预防耐药菌的产生。

综上所述，通过对本校养殖实训场分离菌株进行耐药性监测结果显示，本校养殖实训场分离菌株耐药性比较严重，该监测结果可为养殖实训场的用药提供依据，同时指导制定防护策略。另外，本研究只选择了空气、水和土壤中的主要病原菌进行耐药性分析，但对养殖实训场环境中存在的变形杆菌、蜡样芽胞杆菌、产气荚膜梭菌、破伤风杆菌和李氏杆菌等多种致病菌或条件致病菌还未进行耐药性检测，因此有必要开展进一步检测工作，以便更全面指导临床用药，为保护公共卫生安全提出更为合理的防护建议。