建设新型冠状病毒PCR检测实验室的探讨

肖 涛，吴春锋，陈 晶，陈珊珊，阮丹燕

上海市金山区亭林医院检验科，上海 201505

目前，聚合酶链反应(PCR)被广泛应用于疾病诊断[1]，它可对疾病相关的DNA序列进行体外引物定向酶促扩增[2]，从而具有极高的敏感性和特异性，是基因扩增技术的一次重大革新[3]。新型冠状病毒肺炎(COVID-19)被纳入《中华人民共和国传染病防治法》[4]规定的乙类传染病，采用甲类传染病的预防和控制措施，要求二级以上的综合性医院建立新型冠状病毒PCR检测实验室。上海市金山区亭林医院检验科按照国家相关要求，对PCR实验室进行了必要的升级改造，结合新型冠状病毒检测中发现的问题，制订了相应的新型冠状病毒PCR检测操作管理流程，现将新型冠状病毒PCR实验室的建设经验总结如下。

1 实验区域的划分

为了确保核酸在检测过程中不受到污染，需要加强实验防污染的建设，首先根据现有的实际情况，因地制宜合理挑选出合适检测核酸的地方进行规划、设计PCR实验室；按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》1.1条[5]，将核酸实验室大体分为3个独立的实验区，即试剂准备区、标本制备区、扩增及产物分析区；每个实验区都是独立的房间，不同的区与区之间有传递窗，共有一条长走廊，每个实验区有缓冲区并前后各有一道自动可关闭门，缓冲区在两扇门之间呈“Z”字样。各实验区门上须有一个可视窗，各实验区进入实验室进行操作的走向呈单一方向，并必须遵守：PCR实验室大门→走廊→外门→缓冲区→内门→实验区内；4个实验区之间的走向应遵循单向的原则[6]：试剂准备区→标本制备区→扩增及产物分析区，不可逆向行走，避免出现交叉污染。实验室安装门禁(人脸识别)，并设有权限，只允许PCR实验工作的人员才有资格进入，其他人员一律免入内。实验室的走廊上挂有试剂准备区制度、标本制备区制度、扩增及产物分析区制度等3块制度牌。见图1。

1.1实验室标签的制作 为了便于区分每个实验室的不同，不同的工作区域使用不同颜色的标签贴在各实验区所用仪器设备上、穿不同颜色工作服[6]。分别用白、蓝、绿、红等4种颜色制成标本接收区、试剂准备区、标本制备区、扩增及产物分析区标签，每个实验区都统一按规定的唯一颜色制作规格大小相同的标签贴于本实验区的所有器材上。门上应贴有“生物危害标识”，生物安全标识内容主要包括生物安全标示、二级生物安全实验室、实验室名称、实验室负责人、联系电话、外来人员未经许可严禁入内等。

2 设备的配置

2.1试剂准备区的功能及作用 试剂准备区主要是进行是实验试剂的储存及试验时的试剂配制等。试剂准备区仪器、设备有医用冷藏冷冻箱(2～8 ℃)、放入医用冰箱的温度计(-40～40 ℃)、医用离心机、振荡仪、移动紫外线消毒车、移液器(10、20、100、200、1 000 μL)、电子天平、烧杯、量筒、玻璃棒、温湿度表等。

2.2标本制备区的功能及作用 标本制备区主要是进行标本的分装、加样离心、核酸提取、样本的保存等。标本制备区的主要仪器设备有医用冷藏冷冻箱(2～8 ℃)、存放标本的冰箱、放入医用冰箱的温度计(-40～40 ℃)、全自动核酸提取仪、干式恒温器、医用离心机、振荡仪、紫外线消毒车、生物安全柜、微型计算机、移液枪、温湿度表等。

2.3扩增及产物分析区的功能及作用 扩增及产物分析区主要是进行核酸扩增实验，以及对扩增产物的分析检测等。扩增及产物分析区主要仪器设备有核酸分析仪(荧光PCR分析仪)、移动紫外线消毒车、微型计算机、医用冷藏冷冻箱、移液枪、温湿度表、温度计等。见图1。

图1 PCR实验室的平面图

3 人员的配备

人员是实验室关键的一环。根据实验的需要，配备一定数量的人员(至少两名检验专业中级职称的人员并持有PCR上岗证)，在经验丰富、中级或以上职称的人员中挑选业务水平较好的，并具有PCR资格证的人担任此实验室的负责人，或由该实验组组长负责实验室和PCR工作人员的管理[7]。PCR实验室工作人员须参加国家卫生健康委员会或上海市临床检验中心举办的医疗机构临床基因扩增检验技术实验人员上岗培训，经理论培训学习，通过理论考试及实践考核合格后，取得PCR上岗证[8]；新取得PCR上岗证人员需在老员工的指导下进行实验，或派去已建好PCR实验室并开展工作且技术成熟的单位进行学习。在实验操作时，实验操作按标准操作规程进行。

4 环境的控制

为确保外界空气不受污染，根据传染病的管理办法，核酸实验室标本制备区、扩增及产物分析区设定为负压，这样就可以防止室内空气外流。实验室要保证里面工作人员的舒适性，需安装空调，但空调不能采用中央空调，不同实验区之间是独立的排风通道，独立的排风系统，用监控系统控制室内环境，系统显示器安装在长走廊上，可以不进入实验区就可观看实验区内的温度、湿度、负压等。进出实验工作区应做到人、物分离，避免交叉感染，不同实验区之间有专用的用品，如手套、鞋套、防护服、帽子、口罩、消毒用品、垃圾桶、拖把等，摆放有序，并贴有本区专用颜色的标签，以便于区分不同实验区间的用品。

5 质量体系文件的建立与管理

根据本科室相关程序文件，核酸实验室也相继建立体系文件，包括预防措施管理程序、安全手册、质量手册、信息系统程序手册、人员培训和考核管理程序、环境设施管理程序(温湿度记录、冰箱温度记录、台面消毒记录、空气消毒记录)、设备管理程序(仪器、设备的使用记录、维护记录、保养记录)、标本管理程序、报告审核程序、废弃物管理程序、消防安全管理程序、事故报告程序、隐私保护手册、标本管理手册(主要是标本的接收、运送、检测、保存、处理)、保密程序(主要对患者的资料信息、原始数据及检测结果等保密，新型冠状病毒PCR工作人员均有保密的责任)。

6 实验室生物安全管理

新型冠状病毒具有传染性，主要是通过呼吸道飞沫传播和接触性传播[9]，检测操作会与标本直接性接触，进入PCR实验的前后都须严格按照规范做好防护[10]，对仪器和物体表面、地面、标本转运箱、空气、防护服、手套等进行消毒处理，废弃物统一放在高压蒸汽灭菌锅里进行有效的消毒灭菌，从而有效避免二次污染。

7 新型冠状病毒PCR检测的质量控制

7.1仪器、设备 对仪器、设备定期进行校准，保证仪器、设备正常运行，登记每天仪器、设备的运行情况和保养、维修记录等。

7.2试剂 检测试剂是检测中必备的一环。为确保检测结果的准确性，更换新试剂时，应对新批号试剂进行验证，并保存原始记录及登记。

7.3环境因素 检测时，环境也会对结果有一定的影响，如湿度、温度、污染等。每天都须对湿度、温度进行登记。

7.4人员操作 工作人员要严格按操作流程进行规范操作，加强学习、培训[11]。

7.5室内质控 应每天进行室内质控评估。室内质控是保证实验结果可靠、准确的一项工作[12]，是对该实验室检测前、中、后过程的评估。

7.6室间质控 须定期参加室间质控，使本实验室检测的结果与其他实验室的结果有可比性，符合上海市临床检验中心的要求。

8 结 语

本院新型冠状病毒PCR实验室在区域划分、设备配置、人员配备、环境控制、质量管理等方面都得到了合理配置或严格管理，可以更好地为患者服务，同时为其他新型冠状病毒PCR实验室的建设提供参考。