趋化因子12对足月妊娠急性胎儿窘迫的预测价值

霍春霞，谢 玲，赵得雄

（青海红十字医院产科，西宁810000）

胎儿窘迫（fetal distress，FD）是指多种原因造成的胎儿在子宫内急性或慢性缺氧的综合症状。研究显示，FD可影响患儿智力发育，严重者将威胁胎儿的生命安全[1-2]。因此，对FD作出早期诊断并采取及时有效的干预措施是管理FD最有效的手段。趋化因子12（chemokine 12，CXCL12）是趋化因子家族中的一员。据报道[3-5]，缺氧是CXCL12表达上调的驱动因素，其表达水平在FD新生儿脑损伤中具有诊断价值。然而，CXCL12在母体和胎盘中的表达与FD的发生是否存在潜在联系以及母体外周中CXCL12的表达水平对FD的发生是否具有预测价值仍是未知的。本研究将通过测定胎盘组织、脐血、母血中CXCL12的表达以及脐血各项血气参数，探讨其与急性FD的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2017年5月至2019年5月在青海红十字医院收治的孕妇共148例。其中临产后诊断为FD的产妇共74例，归类为FD组。选取同期74例正常足月产妇作为对照组。急性FD诊断标准包括胎心基线改变至＞160次/min或＜110次/min持续10 min以上；胎心监护提示胎心变异小，重度变异减速或频发晚期减速；胎动减少或消失；胎儿生物物理评分≤4分[6]。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：产妇年龄在24岁至28岁；孕周37周至42周；单胎妊娠且胎位为头位置；产程发动后进入该院分娩中心待产，即产程进入潜伏期。排除标准：产妇诊断为妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病、HIV及其他病毒或细菌感染、胎儿畸形、先天性心脏病。研究通过医学伦理委员会批准，并获取孕妇或其近亲属知情同意。

1.3 样本采集

分娩前抽取孕妇外周静脉血4 mL（顺产产妇在产程发动后立即取血，剖宫产产妇在术前6～12 h内取血），离心（40℃，3500 r·min-1，10 min），取上清液-80℃低温冰箱保存；胎儿娩出后1～3 min使用止血钳夹毕脐带，抽取脐动脉血2 mL，离心后冻存待检测。脐动脉血血气分析：在胎儿娩出后尚未建立呼吸前，延迟结扎脐带，用肝素化的1 mL注射器抽脐动脉血0.5~1 mL，使用自动血气分析系统进行血气分析，包括血样的pH值、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）、动脉血氧分压（PaO2）、剩余碱等参数。胎盘组织置于福尔马林中固定，脱水、石蜡包埋后制作切片备用。

1.4 主要试剂盒、仪器

酶联免疫吸附检测试剂盒组（武汉华美生物科技，catalog number：CSB-E04 722 h）；anti-CXCL12（Proteintech，catalog number：17402-1-AP）。自动血气分析系统（GEM Premier 3500）；常规低速离心机（Eppendorf）；Synergy2多功能酶标仪（Biotek）等。

1.5 方法

1）Apgar评分：新生儿出生后1 min，根据新生儿的皮肤颜色、心搏脉率、呼吸、肌张力及运动、反射五项体征进行Apgar评分，满分10分；2）免疫组化染色：胎盘组织石蜡切片经脱蜡后行EDTA抗原修复；加入3% H2O2室温静置15 min；BSA封闭30 min；倾去封闭液后加入CXCL12抗体（1∶200），4℃孵育过夜；加入对应二抗室温孵育20 min；显微镜下观察DAB显色情况；苏木精复染；经分化、脱水、透明后封片；3）免疫荧光染色：胎膜组织切片脱蜡后进行抗原修复；BSA封闭后加入CXCL12抗体（1∶100），4℃孵育过夜；孵育Alexa Fluor 488 goat荧光二抗，室温孵育2 h；DAPI标记细胞核；封片后使用荧光显微镜（Olympus）观察各组胎盘组织中CXCL12的表达和分布情况；4）酶联免疫吸附试验：ELISA试剂盒检测血清中CXCL12的表达水平，操作步骤严格按照说明书进行。

1.6 统计学方法

数据采用SPSS 16.0软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用两独立样本t检验。CXCL12水平与胎儿脐动脉血pH值等指标的关系采用Pearson相关分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料

两组新生儿在体质量及性别方面差异均无统计学意义（P均＞0.05），而FD组剖宫产所占比例较对照组高（P＜0.05）。见表1。

表1 FD组与对照组一般资料比较

2.2 CXCL12在FD母血、脐带血及胎盘组织中表达升高

免疫组化及免疫荧光染色结果显示，FD组胎膜组织中CXCL12蛋白的表达量高于对照组胎盘组织（图1）。与对照组相比，母血和脐带血中CXCL12的表达量均升高（P均＜0.05）。见表2。

图1 CXCL12在对照组及FD组胎盘中的表达

表2 母血、脐血CXCL12水平及新生儿血气分析值在FD组与对照组中的比较（±s）

表2 母血、脐血CXCL12水平及新生儿血气分析值在FD组与对照组中的比较（±s）

指标 对照组（n=74） FD组（n=74） t值 P值母血CXCL12/（ng·mL-1） 33.38±10.03 69.81±12.63 5.486 ＜0.001脐血CXCL12/（ng·mL-1） 3.78±1.08 17.97±2.10 13.580 ＜0.001 pH值 7.28±0.05 7.19±0.04 10.66 ＜0.001 PaCO2/mmHg 51.83±1.93 62.19±2.74 7.425 ＜0.001 PaO2/mmHg 17.18±0.72 15.46±0.57 6.715 ＜0.001碱剩余/（mmol·L-1） -4.04±0.32 -6.50±0.24 13.891 ＜0.001 Apgar评分 9.12±0.91 8.46±0.83 4.793 0.0090

2.3 两组新生儿脐动脉血气分析值及Apgar评分的比较

与对照组新生儿脐动脉血的各项血气参数相比，FD组脐动脉血的pH值和PaO2均较低（P均＜0.05）；碱剩余负值及PCO2均较高（P均＜0.05）。FD组Apgar评分7分以下者（6例）多于对照组（0例），且FD组Apgar评分均值低于对照组（P＜0.05）。见表2。

2.4 急性FD母血及脐血CXCL12水平与新生儿血气参数的相关性

经Pearson相关性检验，急性FD脐血中CXCL12与pH值、PaO2、碱剩余均呈负相关（P均＜0.05），与PaCO2呈正相关（P＜0.05）；急性FD母血CXCL12与pH值、碱剩余均呈负相关（P均＜0.05），与PaCO2呈正相关（P＜0.05），与PaO2无相关性（P＞0.05）。见表3。

表3 急性FD组母血、脐血CXCL12水平与新生儿血气分析相关性

3 讨论

FD是产科的常见疾病，我国每年约有30万例新生儿因窒息而致残[7]。及时地诊断FD是临床上有效应对和管理FD的关键。

脐血血气分析已被国际围生医学界推荐为评价胎儿宫内氧合情况及酸碱平衡状况最客观可靠的指标[8]。杨喜惠[9]的研究结果显示联合脐血血气分析与胎心监护技术对FD的诊断具有重要意义，有利于提高诊断准确率并进一步减轻胎儿神经系统后遗症、降低围产儿致残率及病死率等。通过脐血血气分析结果结合产前胎心监护、羊水胎粪污染程度、新生儿Apgar评分等方法，目前临床已不难实现对FD的准确诊断。然而，包括脐血血气分析在内的检查结果大都在胎儿分娩后才能获取，不具备反映分娩前胎儿缺氧情况和指导娩出前FD的预防和管理策略的能力。因此，探索具有高度敏感性和特异性的，能够精准地预测FD发生的新型实验室检查方法是当前妇产科亟待解决的问题。

近年来，大量研究者致力于寻找用于预测急性FD的生物标志物并取得一定的进展。张婷婷等[10]发现激活素A在FD的母血和脐带血中的表达显著升高，对FD早期的诊断具有指导意义。除此之外，研究还显示血清β-人绒毛膜促性腺激素（β-human chorionic gonadotropin，β-HCG）、CRP、氧自由基及缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor，HIF-1α）等在母血或脐带血中的表达水平与FD均存在密切的联系[11-13]。CXCL12是一类由细胞分泌的小细胞因子或信号蛋白，其表达水平与胎盘的形成和胎盘-胎儿血管交通的建立密切相关。本研究中，CXCL12在FD组胎盘组织中表达显著升高。同时，FD组母血及脐带血中CXCL12的表达量也显著高于健康的对照组。该结果提示CXCL12与FD的发生存在密切联系，母血中CXCL12的表达是潜在的急性FD的诊断标记物。此外，本文还发现CXCL12与脐带血的血气参数存在相关性，脐血中CXCL12的表达与PaCO2呈正相关。有研究显示，CXCL12具有依赖受体的糖代谢调节活性，并且缺氧是激活CXCL12转录翻译的重要因素[14]。而FD时，胎儿-胎盘血流灌注不足将导致胎儿各组织器官严重缺氧。因此，本文推测缺氧环境下糖酵解增强等代谢改变是CXCL12在胎盘、母血和脐带血中表达上调的可能机制。

综上所述，CXCL12在FD母体胎盘、外周血及脐带血中的表达被显著上调。母体外周血中CXCL12的表达水平具备预测急性FD诊断潜力和应用前景。