宫颈鳞癌组织中Ki-67和MMP9蛋白的表达及其与临床病理特征的关系

薛丽，王刚，王常利

(1.空军986医院检验病理科；2.解放军987医院检验科，陕西 西安 710000)

鳞状细胞癌是宫颈癌最常见的组织学类型[1]。近年宫颈癌及癌前病变的早期诊断和治疗已得到显著提高，但浸润、转移和分化不良仍是宫颈癌患者术后复发和死亡的重要原因[2-3]。Ki-67是一种与细胞增殖相关的蛋白质，能反映肿瘤细胞的增殖能力[4]。MMP9是MMP家族的重要成员之一，与多种肿瘤转移密切相关[5]。本研究拟对宫颈鳞癌组织中Ki-67和MMP9蛋白的表达进行分析，并探讨其与患者临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2015年1月至2020年6月在空军986医院病理科存档并经两名病理专家确诊的100份宫颈鳞癌组织标本和60份经病理检查证实为正常宫颈组织的癌旁标本。所有病例均有完整的临床病理资料。根据FIGO分期标准，Ib-IIa期33例，IIb期46例，III期21例，低分化39例，中高分化61例，淋巴结转移66例。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学法检测Ki-67和MMP9蛋白表达 所有组织标本均采用多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片厚度2 μm，。染色步骤如下：组织切片用梯度二甲苯和乙醇脱蜡脱水，放入100 ℃柠檬酸盐缓冲液加热20 min，待抗原冷却至室温后用3%过氧化氢封闭8 min，然后按照SP组织化学试剂盒(北京中山金桥生物科技有限公司)说明书进行操作，5%正常血清室温孵育15 min，弃去血清，勿洗，加一抗4℃孵育过夜(Ki-67稀释比例1∶100，MMP9稀释比例1∶50，抗体购自美国Cell Signaling Technology公司)，次日使用磷酸盐缓冲溶液冲洗3次，加入生物素标记的二抗，37℃孵育60 min，再经磷酸盐缓冲溶液冲洗3次，分别用二氨基联苯胺和苏木精染色，最后，经梯度二甲苯和乙醇水合透明后用树脂封闭切片，于显微镜下观察染色结果。

1.2.2 免疫组织化学结果评价标准 Ki-67蛋白阳性表达为肿瘤细胞核内有黄色和棕黄色颗粒，MMP9蛋白阳性表达为肿瘤胞浆内有黄色和棕黄色颗粒。随机选取每个节段的3个高倍视野(×400)，每个视野再选取100个CSCC细胞。首先根据染色强度评分，即无色、淡黄色、棕黄色和黑褐色分别用0分、1分、2分、3分表示，再根据阳性细胞百分率评分，即0分、1分、2分、3分、4分分别代表阴性，阳性细胞百分率≤10%，11%～40%，41%～75%，≥76%。两项得分之积为最终得分，即0～1分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～7分为阳性(++)，≥8分为强阳性(+++)[6]。

1.3 统计学分析

采用SPSS 20.00处理数据。计数资料以[n(%)]表示，组间比较使用χ2检验或Fisher精确检验，Ki-67、MMP9表达与临床病理特征的关系采用χ2检验分析，Ki-67和MMP9相关性采用非参数Spearman秩相关分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ki-67和MMP9在宫颈鳞癌组织及癌旁组织中的表达

Ki-67定位于细胞核内，主要表现为黄色或棕褐色颗粒，在癌组织中呈弱阳性至强阳性表达，阳性率达100.0%，在癌旁组织中不表达；MMP9定位于胞浆内，主要表现为棕褐色或褐色颗粒，在癌组织中呈弱阳性至强阳性表达，阳性率达100.0%，在癌旁组织中不表达。见图1。

2.2 宫颈鳞癌组织中Ki-67和MMP9的表达与患者临床病理特征的关系

不同FIGO分期、浸润深度及有无淋巴结转移的宫颈鳞癌患者组织中Ki-67、MMP9表达情况存在明显差异(P<0.05)，但不同年龄、组织分级的患者组织中Ki-67、MMP9表达情况无明显差异(P>0.05)。见表1和表2。

表1 宫颈鳞癌组织中Ki-67的表达与患者临床病理特征的关系[n(%)]

表2 宫颈鳞癌组织中MMP9的表达与患者临床病理特征的关系[n(%)]

2.3 宫颈鳞癌组织中Ki-67和MMP9的关系

宫颈鳞癌组织中Ki-67与MMP9表达水平呈正相关(r=0.610，P=0.036)。见表3。

表3 宫颈鳞癌组织中Ki-67和MMP9的关系(例)

3 讨论

宫颈鳞癌约占宫颈癌患者总数的80%[7]。早期宫颈癌患者的生存率高达90%，但浸润、转移和分化不良仍是宫颈癌患者术后复发和死亡的重要原因[8-9]，故早期预防和治疗可有效降低宫颈癌的发生率和死亡率。

Ki-67是一种与细胞增殖有关的核蛋白，其由两条多肽链组成，具有非组蛋白特性，其能准确反映细胞增殖的阶段[10-11]。Ki-67被认为是反映细胞增殖活性最可靠的标志物之一[12]。大量研究[13-15]表明，Ki-67在多种妇科恶性肿瘤中高表达，与肿瘤的发生、发展密切相关。本研究结果显示Ki-67在宫颈鳞癌组织中呈弱阳性至强阳性表达，阳性率达100.0%。同时发现不同FIGO分期、浸润深度及有无淋巴结转移的宫颈鳞癌患者组织中Ki-67表达情况存在明显差异(P<0.05)，提示Ki-67的表达增加与宫颈鳞癌的侵袭转移及恶性程度密切相关。周成美等[16]研究发现， Ki-67水平可影响乳腺癌细胞增殖及迁移水平，而宫颈癌患者体内 Ki-6水平较高可能也与此相关。MMP9在肿瘤细胞局部浸润与转移中起到重要作用，其可以通过降解细胞外基质中的胶原蛋白，帮助肿瘤细胞穿越基底膜，进而发生浸润和转移[17-18]。最近有研究[19]报道，MMP9还可通过促进血管形成及调控细胞黏附而参与肿瘤细胞的浸润和转移。本研究结果显示，MMP9定位于胞浆内，在宫颈鳞癌组织中呈弱阳性至强阳性表达，阳性率达100.0%，而在癌旁组织中不表达，且不同FIGO分期、组织分级、浸润深度及有无淋巴结转移的宫颈鳞癌患者组织中MMP9表达情况存在明显差异(P<0.05)，提示宫颈鳞癌组织中MMP9蛋白表达水平增加与宫颈鳞癌的侵袭转移及恶性程度有关。李勇军等[20]研究发现，MMP9与宫颈癌的发展有关，其可促进淋巴结转移，这与本研究结论相一致。

本研究进一步分析了宫颈鳞癌组织中Ki-67与MMP9的关系，结果发现Ki-67与MMP9表达水平呈正相关，推测宫颈鳞癌组织中Ki-67与MMP9表达水平越高，患者的预后可能也越差。

综上所述，宫颈鳞癌组织中Ki-67和MMP9蛋白表达水平增加，并与宫颈鳞癌的侵袭转移及恶性程度有关。