不同产地苍耳子绿原酸含量测定
2021-06-10张耿武陈俊平黄洁靖
张耿武，陈俊平，黄洁靖
（1广东省中医院大学城医院药剂科 广东 广州 510006）
（2广州市医药职业学校 广东 广州 510430）
苍耳子（Fructus Xanthii）为菊科植物苍耳（Xanthium sibiricum Patr.Et Widd.）的干燥成熟带种皮的果实[1]，化学成分主要有脂肪酸、倍半萜内酯、水溶性二萜苷、噻嗪双酮以及酚酸等，临床上常用的中药，具有抗炎、抗菌等作用，经药理学证明其含有的绿原酸、咖啡酸等酚类化合物为其主要的活性成分，绿原酸发挥抗炎作用[2]。苍耳子在全国各地均有生长，本文对4个不同地区的苍耳子绿原酸含量进行研究，旨在为控制苍耳子质量，合理应用苍耳子提供实验依据。
1.仪器与试药
仪器：Agilent 1260高效液相色谱仪；sartornus 电子天平(十万分之一)；DHG-9005电热鼓风干燥箱（上海一恒股份有限公司）；DS10260超声波清洗器(天津市东康科技有限公司)；试剂：迈瑞达甲醇（色谱纯）；分析纯磷酸（北京化工）；屈臣氏水；对照品：绿原酸（中国药品生物制品检验所）；样品：山东苍耳子（山东枣庄）、河北苍耳子（河北保定）、吉林苍耳子（吉林长春）、四川苍耳子（四川成都）均于各地采用。
2.实验方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水[3]，梯度洗脱（0～30 min，甲醇15%→45%），流速1.0 ml/min，柱温30 ℃，检测波长254 nm，进样体积20 ul。
2.2 溶液的配制
2.2.1对照品贮备溶液
将购买的绿原酸对照品在60 ℃的干燥箱中干燥2 h后备用。精密称取绿原酸20.12 mg置20 mL量瓶中，用75%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。
2.2.2对照品溶液
精密称取对照品贮备液1.0 mL置20 mL量瓶中，用75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
2.2.3供试品溶液
将四个产地的苍耳子自然晾干后分别粉碎过4号筛备用。取粉末约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入75%的甲醇超声[4]提取1 h，滤取滤液，并定容置50 mL量瓶中，用75%甲醇稀释至刻度，摇匀即得供试品溶液。
2.3 专属性考察
取75%甲醇、对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”条色谱条件进样分析，记录色谱图。结果表明75%甲醇对样品检测无干扰，供试品溶液绿原酸出峰位置无其他杂质干扰。表明该色谱条件专属性好。见图1、图2。
图1 绿原酸对照品色谱图
图2 苍耳子样品色谱图
2.4 线性关系考察
精密量取对照品贮备溶液1.0 mL、2.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、1.0 mL、1.0 mL分别置10 mL、25 mL、20 mL、50 mL、50 mL、100 mL量瓶中，用75%乙醇稀释至刻度，混匀，得到对照品系列溶液Ⅰ～VI。按上述“2.1”条色谱条件进样分析。以峰面积（A）为纵坐标，质量浓度（C）为横坐标，进行线性回归，结果表明绿原酸在浓度10.06 ～100.60 ug/mL范围内线性关系良好。
2.5 进样精密度试验
精密量取对照品贮备液溶液1.0 mL置20 mL量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2.1”条色谱条件进样分析，连续进样6次，结果绿原酸峰面积的RSD=0.45%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.6 定量限和检测限
将“2.2.2”项下对照品溶液用75%逐级稀释进样，当信噪比S/N=10时，为检测限浓度，当信噪比S/N=3时为检测限浓度，结果检测限S/N=12.2，灵敏度为0.010%，定量限S/N=3.5，灵敏度为0.003%，表明该法灵敏度高，供试品浓度满足本品中绿原酸检测。
2.7 重复性
取河北保定同一批样品按照“2.2.3”项下供试品溶液配制方法配制样品，平行6份，并平行配制2份100%浓度得标准溶液，各精密量取20 ul进进样，按外标法测定样品中绿原酸含量，并对6次测定结果进行比较，来评价方法的重复性。结果样品中绿原酸含量平均值为0.02%，RSD=1.32%，表明河北保定同一批样品6次结果测定值基本一致，方法重复性好。
2.8 加样回收率
精密称取河北保定9份同一批样品0.5g，分别加入一定量的对照品，按照“2.2.3”项下供试品溶液配制方法配制样品。按“2.1”条色谱条件进样分析结果见表1。
表1 绿原酸加样回收实验结果（n=9）
结论：由结果可知，绿原酸的平均回收率均在90%～110%之间，RSD%小于5，说明本方法准确度高。
2.9 样品测定
取河北保定、山东枣庄、吉林长春和四川成都采用的苍耳子药材分别按“2.2”项下溶液配制方法，按“2.1”条色谱条件进样分析，按外标法计算4个不同城市苍耳子绿原酸含量，结果见表2。
表2 样品测定结果（%）
3.讨论
对不同产地的苍耳子绿原酸检测，结果表明山东枣庄绿原酸含量较高，从变化趋势上看绿原酸检出量山东枣庄＞吉林长春＞四川成都＞河北保定，整体比较差异不大。色谱条件确定后对方法的耐用性进行了考察，在流速、柱温、流动相比例微小变动后，样品检测结果不受影响，表明该方法适用性好。本文样品处理采用的是75%甲醇超声提取1 h，对供试品制备方法筛查中曾采用30%甲醇、50%甲醇、75%甲醇和水作为溶剂，用加热回流提取法[5-6]、超声提取法和索氏提取法，筛查结果以75%甲醇超声提取更方便和有效提取率高。不同产地苍耳子其他成分在质量上的区别有待于进一步研究。
