IL-35、IFN-γ及ADA联合检测在结核性胸腔积液和恶性胸腔积液鉴别诊断中的应用

邱粵勇 周 敏 杨小洁

广东省惠东县人民医院感染科，广东惠东 516300

胸腔积液是临床上常见的疾病，肺、胸膜以及其他多种疾病的临床表现为胸腔积液[1]，临床上常见的胸腔积液类型是结核性胸腔积液和恶性胸腔积液[2-3]。结核性胸腔积液（tuberculous pleural effusion，TPE）是一种迟发性变态反应，发生率较高，约占胸腔积液的30%～80%，主要诱因是结核分枝杆菌及其代谢产物进入胸膜腔，造成积液。目前临床上对结核性胸腔积液的鉴别诊断难度较大，目前单一指标检测对诊断TPE局限性较大，结果可靠性较低[4]，近年来，随着检测技术的提高，多项指标联合检测成为研究热点，在一定程度上可以提高诊断结果可靠性。白介素-35（interleukin-35，IL-35）是一种参与抗炎和免疫调节的细胞因子，与人类多种疾病密切相关[5]。干扰素γ（interferon-γ，IFN-γ）具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调控的作用，能够调控多个基因的表达水平[6]。腺苷脱氨酶（adenosine deaminase，ADA）与机体的免疫活性关系密切[7]。本文研究IL-35、IFN-γ及ADA联合检测对结核性胸腔积液和恶性胸腔积液鉴别诊断的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取2017年10月至2019年12月我院收治的胸腔积液患者80例作为研究对象。根据患者临床表现及影像学检查等检查结果，分为结核性胸腔积液组（结核组）和恶性胸腔积液组（恶性组）。其中结核组40例，男25例，女15例。年龄24～74岁，平均（35.8±22.9）岁。恶性组40例，男20例，女20例。年龄25～70岁，平均（36.6±28.2）岁。纳入标准[8]：（1）结核组。①有发热、盗汗、乏力等结核中毒症状；②胸片显示有积液；③积液中ADA高于40 U/L，伴随PPD试验阳性。（2）恶性组。①胸片显示有积液；②胸腔积液和（或）胸膜活检查到癌细胞或组织。排除标准[9]：①患者在本研究3个月前接受过有创性胸膜腔检查或治疗；②患者曾接受抗结核或者抗癌治疗；③有病毒细菌等胸膜感染或合并免疫性疾病患者；④不配合医生指示或者要求的患者。两组患者均知情同意，该研究已经通过本院医学伦理委员会批准，两组患者的性别、年龄、身高等资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

两组均在入院24 h内通过胸腔穿刺收集胸腔积液，使用高速冷冻离心机（购自上海精密仪器仪表有限公司，型号GL-25MS）离心2500 r/min，5 min，取上清。将处理得到检测样本冷冻于-40℃的冰箱中待测。IL-35的检测使用IL-35检测试剂盒（酶联免疫法ELISA，购自天津百赛斯生物技术有限公司）；IFN-γ的检测使用IFN-γ检测试剂盒（酶联免疫法ELISA，购自天津百赛斯生物技术有限公司）；ADA的检测使用腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂盒（比色法，购自上海挚诚生物有限公司）。所有的操作均严格按照说明书进行，所有标本均检测 3 次取平均值。

1.3 观察指标及评价标准

分析记录结核组和恶性组胸腔积液中IL-35、IFN-γ及ADA的含量，并分析灵敏性、特异度和准确率。IL-35的正常值参考范围：8～15 pg/ml；ADA的正常值参考范围：4～18 U/L；IFN-γ的正常值参考范围：1.21～5.51μg/L；灵敏性=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%；特异度=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%。

利用灵敏度为纵坐标，特异度为横坐标，绘制ROC曲线，确定曲线下面积（AUC），值越大越好，AUC值在0.5～0.7之间时表示准确性较低，在0.7～0.9之间时表示准确性较好，当AUC＞0.9时，表示诊断准确性良好。

Youden指数=（灵敏性+特异度）-100%，范围介于0～1之间，数值越大表示真实性越高。总准确率（%）=（真阳性例数+真阴性例数）/总例数×100%。

1.4 统计学分析

采用统计学软件SPSS 19.0进行分析，计量资料以（）表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结核组和恶性组胸腔积液中IL-35、IFN-γ及ADA的水平比较

结核组和恶性组胸腔积液中IL-35、IFN-γ及ADA的含量明显不同，结核组中IL-35、IFN-γ及ADA的浓度明显高于恶性组（P＜0.05），差异有统计学意义，见表1。

表1 两组患者IL-35、IFN-γ及ADA的水平比较（±s）

表1 两组患者IL-35、IFN-γ及ADA的水平比较（±s）

组别 n IL-35（pg/ml） IFN-γ（μg/L） ADA（U/L）结核组 40 23.6±5.7 107.6±41.5 51.5±9.8恶性组 40 17.8±2.1 25.4±7.3 19.4±4.6 t值 22.385 12.338 18.753 P值 0.000 0.000 0.000

2.2 两组胸腔积液中IL-35、IFN-γ及ADA检测诊断效能比较

根据ROC曲线，IL-35、IFN-γ及ADA单项检测的AUC明显低于三项联检，且三项联检AUC面积均＞0.9，说明诊断准确性较高，此外三项联检的灵敏性、特异度、准确率和AUC值均高于单项检测，见表2。

表2 两组胸腔积液中IL-35、IFN-γ及ADA检测诊断效能比较

3 讨论

胸腔积液在临床上较常见，但是病变性的胸腔积液却是涉及到机体的多种免疫反应，不同类型的胸腔积液的治疗方法和预后截然不同，因此正确鉴别患者的疾病类型尤其重要[10-11]。IL-35具有免疫调节和抑制炎症的作用，多种研究表明各种炎症性疾病、免疫性疾病及肿瘤等均与IL-35的过表达密切关系[12-13]。IFN-γ是一种重要的细胞因子，在结核性胸腔积液中，IFN-γ通过增强吞噬细胞的活性发挥抗结核免疫作用，而在恶性胸腔积液中，T淋巴细胞功能受到抑制，IFN-γ的分泌受到影响[14-15]。ADA是临床上常用的胸水生化指标，与T细胞的分化和增殖密切相关。研究表明，结核分枝杆菌刺激T细胞之后会导致ADA浓度升高，而在恶性胸腔积液的免疫应答中，T细胞增殖受到抑制，ADA的浓度会偏低[16]。唐添祥等[14]研究发现联合检测IFN-γ和ADA能进一步提高结核性胸腔积液的诊断效率，且IFN-γ指标可以判断胸腔积液的性质，而ADA诊断的灵敏度和特异性均较高。

本研究发现，结核组和恶性组胸腔积液中IL-35、IFN-γ及ADA的含量明显不同。结核组中IL-35、IFN-γ及ADA的浓度明显高于恶性组（P＜0.05）。机体感染结核菌后，T细胞大量增殖分化，IL-35、IFN-γ和ADA活性增强，但是恶性组，T细胞受到肿瘤细胞攻击，导致ADA活性减弱，引起IFN-γ和IL-35水平降低，这说明三种指标的分泌与胸腔积液内部免疫应激反应密切相关。同时本研究分析三种指标检测诊断效能，结果发现，单一检测三种指标诊断胸腔积液类型的灵敏性、特异性和准确度相较于三项联检偏低，AUC值低，提示单项检测在一定程度上诊断结果准确度受限。但是三项指标联检，无论是结核组还是恶性组，AUC值均较高，分别为0.951和0.948，同时灵敏度、特异性和准确率均较高，提示三项联检可以为结核胸腔积液的诊断提供较为可靠的依据。

综上所述，IL-35、IFN-γ及ADA在结核性胸腔积液中表达水平高于恶性胸腔积液，三项联检的检测效能高，结果较为可靠。证明了IL-35、IFN-γ及ADA的浓度检测对结核性胸腔积液的临床诊断具有重要的理论指导意义和显著的临床应用价值。