宫颈癌中肿瘤免疫细胞浸润模式与预后价值分析

余志辉

（佛山市第五人民医院，广东 佛山 528211）

0 引言

本文研究中，采用CIBERSORT法对宫颈癌肿瘤样本中免疫细胞类型比例进行分析，观察探讨宫颈癌中肿瘤免疫细胞浸润模式与预后价值，现在总结如下。

1 资料及方法

1.1 采集数据。通过TCGA官网，即https：//protal.gdc.cancer.gov，下载TCGA-CESC基因表达数据与临床数据，共纳入238例宫颈癌肿瘤样本，临床数据涉及有年龄、分期、生存时间、病理学类型与存活状态等。

1.2 肿瘤浸润免疫细胞组成。采用CIBERSORT法，检测22种肿瘤浸润免疫细胞类型在每一个肿瘤组织中的相对分数，对于CIBERSORT算法，需在1000个排列中，通过LM22标记矩阵中进行计算。借助R软件，运行CIBERSORT，经由CIBERSORT网站（https：//cibersort.stanford.edu）下载源代码。其中，22种免疫细胞的类型如表1所示。

1.3 统计学处理。总生存率以诊断日期至死亡日期的时间间隔为准，采用Kaplan-Meier法生成生存曲线，通过Log-rank test法分析差异。Cox回归分析法，评估免疫细胞的类型、基因表达水平和OS之间的关系。多因素Cox回归分析，采用向后LR法予以观察。通过Spearman的相关性与统计学意义评估基因表达以及与免疫细胞的相关性。采用SPSS 22.0以及GraphPad Prism 5法进行统计学分析，P＜0.05提示差异显著，有统计学意义。

2 结果

2.1 临床资料。238例宫颈癌患者，年龄24～87岁，平均（46.92±5.93）岁，121例年龄≤46岁，117例年龄＞46岁。分析组织学类型、临床分期，如表2所示。

2.2 宫颈癌肿瘤浸润免疫细胞。经分析发现，宫颈癌肿瘤浸润免疫细胞中，巨噬细胞所占比例最高，其次是rδT细胞，嗜酸性粒细胞最低。如表3所示。

2.3 宫颈癌中免疫细胞类型和预后之间的关系。活化的CD4+记忆性T细胞高水平，和较长OS存在相关性（P=0.002）；未活化的CD4+记忆性T细胞高水平，和较短OS存在相关性（P=0.007）。活化的肥大细胞高水平，和较短OS存在相关性（P=0.004）；未活化的肥大细胞高水平，与较长OS存在相关性（P=0.018）。CD8+T细胞高水平，和较长OS存在相关性（P=0.006）。多因素Cox回归分析，结果发现，对于免疫细胞，活化的CD4+记忆性T细胞以及活化的肥大细胞是宫颈癌预后的独立因素（P=0.002；P=0.004），如表4所示。

表1 22种免疫细胞类型分析

表2 238例宫颈癌组织学类型以及临床分期[n（%）]

表3 宫颈癌肿瘤浸润免疫细胞的构成分析

表4 宫颈癌免疫细胞的多因素Cox回归分析结果

2.4 免疫检查点分子表达和免疫细胞浸润水平关系及预后分析。数据分析发现，免疫检查点分子表达和CD4+记忆性T细胞浸润水平呈现出正相关关系（P＜0.001）；除了CD274，其余免疫检查点分子表达和活化肥大细胞浸润水平呈现出负相关关系（P＜0.001）。Cox regression单因素分析发现，PDCD1、ICOS以及CTLA4和宫颈癌的生存存在一定关系（P＜0.05）。多因素分析发现，ICOS是宫颈癌预后的独立因素（P＜0.05），如表5所示。

表5 免疫检查点分子多因素分析

3 讨论

宫颈癌中95%是由于持续感染致癌人乳头瘤病毒所致，控制病毒感染中，免疫系统的作用至关重要，故而为宫颈癌免疫治疗提供可能性[1]。免疫检查点疗法，借助共抑制或者共刺激等信号，调节T细胞活性，提高抗肿瘤免疫反应，但这一疗法总体反应率仅仅是17%～27%，治疗成本高，存在潜在免疫相关毒性[2]。故此，寻找预测免疫治疗疗效的生物学标志，成为学者专家们探讨的新课题之一。肿瘤浸润免疫细胞，是肿瘤微环境的构成要素，和肿瘤细胞增殖、治疗反应、预后存在关联[3]。临床上，关于肿瘤浸润免疫细胞在宫颈癌中预后价值的研究并不多。其中，CIBERSORT，是借助标准化基因表达数据，评估免疫细胞组成的一种生物信息学方法[4]。CIBERSORT，通过反褶积算法，根据基因表达谱，对不同免疫细胞亚群相对比例进行评估，在一定程度上，可克服免疫组化法存在的缺陷与不足，适用于乳腺癌、肾癌、肺癌以及肝癌与结直肠癌等[5]。记忆性T细胞浸润和多种肿瘤存在较好的预后关系，是新生物学标志。宫颈癌研究显示，记忆性T细胞对白介素2、干扰素r以及肿瘤坏死因子，抑制肿瘤细胞增殖与迁移[6]。本研究表明，高水平活化CD4+记忆性T细胞和高生存率有关。肥大细胞，属于先天免疫细胞，可调节宿主对癌症所产生的反应，影响预后。肥大细胞和肿瘤预后之间的关系结果存在差异，不同肿瘤中表现不一。本研究显示，活化的肥大细胞和较差预后有关，可能是因为被激活的肥大细胞分泌出系列因子，与免疫细胞、肿瘤细胞产生相互作用，形成免疫抑制环境，增强肿瘤细胞活性，预后欠佳。ICOS属于T细胞特异性共刺激分子，其扮演着促癌与抑癌的双重角色[7]。本研究中，ICOS高表达和宫颈癌预后良好有关，提示ICOS在宫颈癌中扮演抑癌角色。总之，宫颈癌中肿瘤免疫细胞浸润与预后有关，需引起重视。