气相色谱法测定乳康颗粒中乙酸辛酯的含量

刘 勇，闫高颖,张必荣,张 琼，吕慧锋*，杜梦岚

(1.陕西省药品和疫苗检查中心，陕西 西安 710065；2.陕西天谷药业有限公司，陕西 汉中 723100；3.西安千禾药业股份有限公司，陕西 西安 710075)

乳康颗粒是西安千禾药业股份有限公司生产的独家剂型，由牡蛎、瓜蒌、海藻、黄芪、天冬、夏枯草、三棱、玄参、白术、莪术、丹参、乳香、没药、浙贝母、鸡内金(炒)15味中药组方而成，具有疏肝解郁，理气止痛，活血破瘀，消积化痰，软坚散结，补气健脾的作用[1]，中医临床上主要用于治疗女性乳腺增生[2-3]。现行《国家药品标准YBZ0926 2006-2011Z-2013》中收载了天冬、丹参、乳香、没药和黄芪的薄层色谱法(TLC)鉴别以及丹参素钠的高效液相色谱(HPLC)测定含量方法。李冬梅[4]等研究了乳康颗粒中浙贝母的TLC鉴别方法，并对乳香的鉴别方法进行了改进，同时增加了对丹参中有效成分丹酚酸B的含量测定的研究。由于乳康颗粒中还含有莪术、乳香、没药等挥发性成分，对产品的质量有很大的影响，为了进一步提升乳康颗粒的质量控制标准，全面控制其成品的质量，作者参照相关文献[5-11]，增加了对乳香中有效成分乙酸辛酯含量测定的研究。

1 实验部分

1.1 原料、试剂与仪器

乳香：陕西兴盛德药业有限责任公司，经陕西中医药大学宋艺君副教授鉴定为橄榄科植物乳香树(BoswelliaCarteriiBirdw)的树脂，为埃塞俄比亚原乳香；乙酸辛酯对照品:批号111671-201704，中国食品药品检定研究院；乳康颗粒：批号2020101，2020102，2020103，2020301，2020401，2020402，西安千禾药业股份有限公司。

其他试剂均为分析纯，市售。

气相色谱仪：GC-2010Pro，日本岛津公司；十万分之一电子天平：AT201，Mettler Toledo公司；数控超声波清洗仪：KQ-500DE，昆山市超声仪器有限公司。

1.2 对照品溶液的制备

精密称取乙酸辛酯对照品适量，配制乙酸辛酯对照品溶液(质量浓度为146.21 μg/mL)，将其依次稀释制成质量浓度分别为29.24、36.55、58.49、73.11 μg/mL的溶液，待用。

1.3 供试品溶液的制备

1.3.1 正己烷超声法

称取乳康颗粒细粉8.33 g(相当于含乳香药材0.25 g)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷25 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用正己烷补足减失的质量，摇匀，滤过，待用。

1.3.2 乙酸乙酯超声法

称取乳康颗粒细粉8.33 g(相当于含乳香药材0.25 g)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯25 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用乙酸乙酯补足减失的质量，摇匀，滤过，待用。

1.3.3 无水乙醇超声法

称取乳康颗粒细粉8.33 g，(相当于含乳香药材0.25 g)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇25 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用无水乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，待用。

1.3.4 正己烷索氏提取法

称取乳康颗粒细粉8.33 g(相当于含乳香药材0.25 g)，精密称定，置索氏提取器中加入正己烷适量，提取约3 h(至无色)，提取液挥干溶剂，残渣加正己烷溶解并定容置25 mL容量瓶中，摇匀，滤过，待用。

1.3.5 乙酸乙酯索氏提取法

称取乳康颗粒细粉8.33 g(相当于含乳香药材0.25 g)，精密称定，置索氏提取器中加入乙酸乙酯适量，提取约3 h(至无色)，提取液挥干溶剂，残渣加乙酸乙酯溶解并定容置25 mL容量瓶中，摇匀，滤过，待用。

1.3.6 无水乙醇索氏提取法

称取乳康颗粒细粉8.33 g(相当于含乳香药材0.25 g)，精密称定，置索氏提取器中加入无水乙醇适量，提取约3 h(至无色)，提取液挥干溶剂，残渣加无水乙醇溶解并定容置25 mL容量瓶中，摇匀，滤过，待用。

1.4 阴性样品溶液制备

取除乳香外的各味药材，按照处方比例和制法以及供试品溶液的制备方法，自行制备不含乳香的阴性样品溶液。

1.5 色谱条件

色谱柱：安捷伦DB-WAX(30 mm×0.32 mm×0.50 μm)；气体流量：氮气，30.0 mL/min；氢气，50.0 mL/min；空气，500.0 mL/min；进样体积：1 μL，分流进样，分流比为10∶1；检测器：FID(氢火焰离子化检测器)，气化室温度：290 ℃；色谱柱温度：初始温度为50 ℃，维持1 min，以10 ℃/min的速率升至200 ℃，保持8 min；检测器温度：300 ℃。

1.6 乙酸辛酯的含量测定[5-11]

取1.3制备的供试品溶液，按照1.5色谱条件进行测定，计算乙酸辛酯含量。

2 结果与讨论

2.1 提取效果比较

将1.3提取方法所制样品分别按照1.5色谱条件进行测定，正己烷超声样品中乙酸辛酯的含量为0.191 mg/g，正己烷索氏提取样品中乙酸辛酯的含量为0.193 mg/g，两者无明显差异；其余乙酸乙酯超声、无水乙醇超声、乙酯索氏提取、无水乙醇索氏提取样品中乙酸辛酯的含量，分别为0.122、0.105、0.146、0.128 mg/g。

2.2 超声提取时间和溶剂用量的确定

按正己烷超声方法制备样品，分别加入正己烷25、50 mL，超声处理30、45、60 min。结果显示超声时间和溶剂用量对乙酸辛酯含量的影响不显著，随着时间和溶剂用量的增加，乙酸辛酯含量无明显增加，故选定25 mL超声处理30 min。

2.3 专属性实验

取对照品、供试品和阴性样品溶液，按照1.5色谱条件进行测定，色谱图见图1。

t/min图1 样品色谱图

由图1可知，供试品溶液在与对照品溶液在保留时间一致的位置有相同的色谱峰且分离度良好，阴性样品无干扰，表明该法的专属性良好。

2.4 线性关系考察

色谱条件同1.5，对照品溶液的制备同1.2。将1.2制备的不同质量浓度的溶液分别进样，记录色谱图，测定峰面积。以质量浓度为横坐标，对照峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，见图2。

ρ(乙酸辛酯)/(μg·mL-1)图2 乙酸辛酯线性曲线图

由图2可知，ρ(乙酸辛酯)=29.24～146.21 μg/mL线性关系良好。

2.5 加样回收率实验

取已知含量的乳康颗粒样品4.3 g，共9份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入乙酸辛酯对照品溶液5、10、15 mL各3份，加正己烷稀释成25 mL，称定质量按照1.3方法制成加样回收供试液，依照1.5色谱条件测定，并按照公式(1)计算加样回收率，结果见表1。

(1)

表1 加样回收率实验结果

回收率要求为90%～110%，重复性要求RSD<3%。由表1可知，3个水平9个样品的回收率及平均值均在要求范围内，平均回收率为104.4%；RSD为2.8%，符合规定要求。因此，该方法的准确度和重复性良好。

2.6 精密度实验

色谱条件同1.5，精密量取ρ(对照品)=73.11 μg/mL溶液，连续进样6次，记录峰面积，见表2。

表2 测定方法的精密度

由表2可知，乙酸辛酯的峰面积RSD为0.4%，表明色谱系统连续进样时精密度良好。

2.7 重复性实验

按照1.3方法处理制备6份供试品溶液，依照1.5色谱条件测定，并计算w(乙酸辛酯)，见表3。

表3 测定方法的重复性

由表3可知，w(乙酸辛酯)平均值为0.191 mg/g，RSD为2.9%。因此，该方法的重复性良好。

2.8 稳定性实验

取供试品，按照1.3方法处理，在仪器连续运行的情况下分别在0、1、2、6、10、18、24 h依次测定，见表4。

表4 测定方法的稳定性

由表4可知，w(乙酸辛酯)的RSD为2.4%，表明该成份在24 h内稳定。

2.9 样品的含量测定

将收集到的6批乳康颗粒样品(规格：3.0 g/袋)，按1.5色谱条件测定,见表5。

表5 样品中w(乙酸辛酯)的测定

由表5可知，6批样品的w(乙酸辛酯)=0.191 3～0.265 3 mg/g，故可将乳康颗粒中乙酸辛酯限度定为每袋不少于0.50 mg。

2.10 检测限和定量限

将1.2方法制备的对照品溶液进行稀释，依照1.5色谱条件进行测定，以基线噪音的3倍计算，乙酸辛酯的检测限为0.146 22 μg/mL；以基线噪音的10倍计算，乙酸辛酯的定量限为0.438 66 μg/mL。

3 结 论

乳香具有很强的活血、行气、止痛之功效[7]，其作为乳康颗粒组方中的主要成分既入血分，又入气分，能行血中气滞，化瘀止痛，还能宣通脏腑气血，通达经络[2-3]，对乳康颗粒的功效起着至关重要的作用；现行生产工艺中乳香需和没药、鸡内金、浙贝母混合粉碎成细粉，混合细粉再和浓缩滤液混匀后进行减压干燥，因乳香、没药中含有大量的挥发油，若干燥温度及干燥时间控制不严格极易造成有效成分的损失，因此，选择乳香中乙酸辛酯作为乳康颗粒的定量指标进行控制，能很好地反映出产品质量的控制过程。

经过方法学考察，结果表明，乳康颗粒中乙酸辛酯的含量测定方法稳定可靠，简便可行，重复性好，专属性强，可用于乳康颗粒的质量控制。