国产新型冠状病毒抗体胶体金法检测试剂盒在低流行区应用的诊断效果评价

王 丹，于海立，张露方，覃 英，贺春燕，曲 芬（航空总医院检验科，北京 100012）

2019 新型冠状病毒(2019-nCoV)侵袭人体引起急性呼吸道传染病,命名为2019 冠状病毒肺炎(COVID-19)。新冠病毒传染性强，传播速度快[1-4]，对公共卫生安全构成了巨大的威胁,其早期诊断对控制疫情至关重要。在COVID-19 诊疗方案中，RTPCR 为确诊2019-nCoV 感染的重要依据。由于RTPCR 检测结果受标本类型、采集质量及采集时间的影响，阳性检出率仅38%～63.1%[5]，支气管肺泡灌洗液检出率最高，但操作难度大，被感染风险高，报告时间3～4 h[6]，所以我国《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》中，将新冠病毒抗体检测纳入其中。新冠病毒抗体检测操作方便，报告时间明显缩短，利于2019-nCoV 的快速筛查[7-8]。但抗体检测效果受检测试剂和地区样本的影响，其临床价值需要评估验证。为此，本研究对分别由珠海丽珠试剂股份有限公司和英诺特（唐山）生物技术有限公司生产的国产新型冠状病毒抗体胶体金法检测试剂盒在低流行区北京地区的诊断及应用效果进行了评价及探讨。

1 材料与方法

1.1 研究对象 标本选取北京地区两家医院2020年1月26日～7月8日的新冠确诊与筛查人群，抗体检测采用血清或EDTA 抗凝全血；包括根据患者的流行病学史、临床表现、影像学检查及核酸检测结果，综合确诊新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者标本29 例和2019-nCoV 筛查人群（无临床表现且核酸阴性）19 411 例，剔除重复病例。标本采集均由经过培训的专业护士采集，采集时间从发病后2～25 天。COVID-19 确诊及排除标准依据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（第七版）》[7]。

1.2 仪器与试剂 本研究分别采用两种国产新型冠状病毒抗体胶体金法检测试剂盒：珠海丽珠试剂股份有限公司（以下简称丽珠）的2019-nCoV 抗体配套检测试剂盒和英诺特（唐山）生物技术有限公司（以下简称英诺特）的2019-nCoV 抗体配套检测试剂盒，标本类型为EDTA 抗凝全血或血清样本，检测指标包括2019-nCoV IgM 和IgG。考虑到北京地区研究期间是低风险地区，抗体出现阳性或弱阳性结果时，使用另一种试剂盒复测，两种试剂同时阳性报给临床抗体阳性结果。

1.3 方法 标本操作及判读:取血清或EDTA 抗凝全血20μl 分别滴加至2019-nCoV IgM 及IgG 样本孔内，随后每孔滴加1～2 滴样本稀释液，静置15min 观察结果。质控线C 线及检测线T 线均出现紫红色条带为阳性结果，仅质控线C 线出现紫红色条带为阴性结果，仅检测线T 线出现紫红色条带结果无效，需要重新检测样本，2019-nCoV IgM 及IgG 检测均遵循以上操作及判读规则。

1.4 统计学分析 采用CHISS 统计软件对数据进行统计分析，计数资料采用卡方检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。评价指标：灵敏度(%)=100×[真阳性 /(真阳性 + 假阴性)]；特异度(%)=100×[真阴性 /(真阴性 + 假阳性)]；误诊率=100%-特异度；漏诊率=100%-灵敏度；阳性预测值(%)=100×[真阳性 /(真阳性 + 假阳性)]；阴性预测值(%)=100×[真阴性 /(真阴性 + 假阴性)]；正确率(%)=100×[（真阳性+ 真阴性）/检测总样本数]。

2 结果

2.1 新型冠状病毒特异性抗体检测结果 见表1及表2。2020年1月26日～7月8日共接收2019-nCoV 抗体检测样本19 440 例，其中使用丽珠试剂检测8 193 例，使用英诺特试剂检测11 413 例。其中核酸阳性确诊患者的29 例包括男性15 例，女性14 例；年龄2～81 岁，平均49.93±18.35 岁。

表1 两种2019-nCoV 抗体检测试剂盒临床标本检测结果

表2 两种2019-nCoV 抗体检测试剂盒对新冠诊断的效果评价(%)

经统计，两种检测试剂各项评价指标相当，英特诺检测试剂灵敏度稍高于丽珠检测试剂，两种试剂具有较高的比对一致性。

2.2 2019 -nCoV 抗体阳性与采样检出时间 见表3。29例确诊COVID-19 病例同时进行丽珠和英诺特2019-nCoV 抗体的平行检测，丽珠2019-nCoV IgM 及IgG 检测阳性分别为11 例和15 例；英诺特2019-nCoV IgM及IgG检测阳性分别为5例和16例；2 个品牌的IgM 同时阳性4 例，IgG 同时阳性15 例；所有抗体均阴性12 例。

表3 不同试剂及抗体的反应与采样时间

经统计学分析，全阴组的标本采样检出时间明显小于其他各组（P＜0.05），其他各组比较差异无统计学意义。

2.3 新冠抗体假阳性分析 见表4。根据流行病学史、临床特征、影像学检查及核酸检测结果综合判断排除2019-nCoV 感染，判断2019-nCoV 抗体检测阳性为假阳性。19 411 例非COVID-19 人群中，共检出2019-nCoV IgM 或IgG 阳性137 例（0.71%），按照实验室的报告原则，两个品牌抗体检测均阳性的结果共31 例，总体抗体阳性率0.16%，显著低于单一品牌阳性报告率（P=0.000 0）。抗体阳性的31 例中包括IgM 同时阳性27 例，IgG 同时阳性4 例，IgM和IgG均同时阳性仅1例。137例抗体阳性者中，有慢性基础疾病患者34 例（24.81%），包括慢性支气管炎并发感染5 例，恶性肿瘤3 例，脑梗死3 例，高血压病2 例，慢性肾衰竭透析1 例；辅助检查10例（7.30%）纤维蛋白原增高，4 例（2.92%）抗核抗体阳性，2 例（1.46%）铁蛋白增高。1 例（0.73%）游离前列腺特异抗原增高；经统计学分析，慢性基础疾病及抗核抗体阳性为新冠抗体假阳性的危险因素，见表5。

表4 两种2019-nCoV 抗体检测试剂的假阳性分析

表5 新冠抗体假阳性的危险因素分析[n(%)]

经统计学分析，2019-nCoV IgG 假阳性率英诺特高于丽珠；同一品牌的2019-nCoV IgM 假阳性率显著高于IgG（英诺特χ2=14.756 09，P=0.000 0；丽珠χ2=27.492 62，P=0.000 0 ）。

3 讨论

2019 -nCoV 是一种新型病毒，报道IgM 与IgG的产生时间各不相同[9-13]，以胶体金方法检测IgM和IgG 抗体操作方便，简单快速，不需要特殊设备与负压实验室等[14]，作为COVID-19 筛查方法被广泛应用；抗体检测与核酸检测结合不但可以明显提高阳性检出率[15]，而且早期抗体反应与疾病严重程度降低有关，因此，检测抗体有助于监测、预测疾病转归和流行病学调查[16]。但是由于新冠抗体检测试剂盒的应急上市，其性能验证的全面评估数据有限，不同品牌检测出现的假阴性与假阳性曾引起临床对方法及结果的诸多疑问[17-18]。美国也因此制定了血清学诊断COVID-19 的应用指南，用于2019-nCoV 抗体诊断、公共卫生监测、疫苗开发及恢复性血浆供体的选择等[18]。

迄今为止2019-nCoV 感染出现的体液免疫反应仍存在很多不确定性，抗体的特性及产生的各种证据、随时间变化的动态及检测方法的影响因素，都将影响这一新病原体的临床诊治策略[19]。与武汉等的疫情状况不同，北京地区为2019-nCoV 的低流行区，新冠疫情的特点是筛查病例多而阳性病例少，故采取双品牌抗体阳性报告临床的策略。本研究结果显示了通过丽珠及英诺特两种试剂盒的检测具有较高的特异度、正确率和阴性预测值，均在99%以上，提示两种试剂盒检测的误诊率较低；两种试剂盒的灵敏度分别为55.17%和58.62%，与文献报道的13.1%～68.6%相当，意味着虽然已感染2019-nCoV，但体内还没有产生足够的抗体，因抗体会随着病程时间的延长而阳性率逐渐提高，到3 周最高可达100%[5]。

研究显示两种试剂盒IgM 和IgG 阳性病例的标本采集检出时间无显著差别，但其抗体阴性的标本采集检出时间明显短于抗体阳性各组。目前新型冠状病毒感染的准确时间难以精确计算，特别是在低流行地区，不同研究的抗体阳性时间变化较大[18]。另有研究对于RT-PCR 核酸阳性的确诊患者，IgM，IgG 抗体在发病第一周的阳性检出率均处于较低状态，检出率仅40%左右[18-20]，因此WHO 推荐新冠抗体检测血清标本采集应在发病后1 周，第二次采集应在发病后3～4 周[21]，提示临床解读和应用抗体检测结果需结合病程，也应考虑患者病情轻重和机体的免疫状态。

本研究的19 411 例2019-nCoV 阴性患者若IgM，IgG 抗体检测出现阳性，均按阳性标本需双品牌复查再报告的原则，进一步对阳性标本用另一品牌试剂盒复测，两种品牌抗体检测均阳性的临床报告率仅为0.16%，显著低于单一品牌阳性报告率，也明显低于美国的综合假阳性数据[18]。经统计分析，无论英诺特还是丽珠的2019-nCoV IgM 假阳性率均高于IgG；两个品牌比较，英诺特的2019-nCoV IgG 假阳性率高于丽珠。诸多新冠抗体假阳性的报道，也在困扰临床诊治[22]。通常抗体假阳性是由于体内的非特异性抗体的干扰，如系统性红斑狼疮、慢性疾病长期多种治疗可能产生的干扰物质[23]、补体、溶菌酶、嗜异性抗体、类风湿因子、抗核抗体等；也与标本的状态有关，如标本存在溶血、标本凝固不全残留有纤维蛋白原等影响；不同种属的冠状病毒N 蛋白和S 蛋白存在交叉反应，也可导致假阳性的产生[24-30]。本研究结果显示慢性疾病及抗核抗体阳性是新冠抗体假阳性的危险因素。

抗体检测与新冠病毒核酸联合检测可明显提高新冠诊断正确率[31-32]，特别是对集中医学观察人员，国家卫健委疾病预防控制局明确任意一次核酸检测阳性或血清特异性IgM 抗体阳性者，按照无症状感染者管理。但无论2019-nCoV 诊断的RT-PCR 核酸检测技术还是简单快速的胶体金抗体检测受多种因素影响均存在假阴性与假阳性，临床应用时应综合病程将抗体检测与RT-PCR 核酸检测相结合。对不同抗体检测试剂盒的效用、抗体阳性的临床意义及影响因素应该结合流行病学史、临床表现等综合评价。新冠抗体的变化规律、与临床病情严重程度的相关性、年龄、性别、种族等的影响，需要在临床实践中不断积累、正确评估，有效指导新冠肺炎诊断及防控，对科学合理地解释新冠抗体检测结果具有指导意义。