血浆S-腺苷同型半胱氨酸水平检测与冠状动脉狭窄程度的关系研究

李毓龙，朱紫衣，付 霞，余剑波，钟原胜（简阳市人民医院实验医学科，四川简阳 641400）

随着社会的发展以及人们生活水平的提高，心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)已成为全球人口死亡和疾病负担的重要因素,其中以冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary atherosclerotic heart disease,CHD）（简称冠心病）最为突出。CHD 是指由于冠状动脉发生粥样硬化（atherosclerosis,AS）致使管腔狭窄或闭塞导致心肌缺血、缺氧或坏死而引发的心脏病[1]，发病率及死亡率高，且有低龄化发展趋势[2]。一项报道指出[3]CHD 患者死亡的终生风险占亚洲人群卒中死亡的一半。仅2016年，我国人口因CHD 死亡173.6 万例[4]，CHD 已然成为威胁人类生命的重大疾病。既往研究表明年龄、血脂异常、高血压、糖尿病、家族史等均是冠心病发生的重要危险因素[5-8]，血清血脂、LP(a)，Hcy 及血浆SAH 与冠状动脉病变及其程度密切相关[9-12]。因此，研究新的CHD 预测因子对于CHD 的预防、诊疗显得至关重要。近年来，SAH 作为Hcy 的唯一代谢前体，在SAH 水解酶催化的反应中可逆性生成Hcy 引起了广泛关注。先前进行的多项横截面研究和病例对照研究表明[13]，血浆SAH 可能比Hcy更早期、更好地诊断冠心病的生物学标志物。然而，血浆SAH与冠状动脉病变之间的关系并未有证实，血浆SAH 是否可以作为新的标志物早期识别CHD高危患者也有待验证。因此，本研究探讨冠心病患者血浆SAH 与冠状动脉狭窄程度的关系，以期为CHD 的预防和诊断提供临床依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.1.1 一般资料：从医院HIS 和LIS 收集患者资料，选取2018年1月～2019年12月于简阳市人民医院检查就诊的疑似CHD 患者663 例，其中男性374 例，女性289 例，年龄38～83 岁。根据冠状动脉造影检查结果，将经冠状动脉造影确诊为CHD 的患者作为CHD 组，共计386 例；将经冠状动脉造影排除为CHD 的患者作为对照组，共计277 例。收集所有入选患者资料，包括年龄、性别、血压（收缩压+舒张压）、体重指数(BMI)、吸烟史、饮酒史、是否有糖尿病、CHD 家族史、两周以前用药史等。BMI=体重（kg）/身高（m）2。两组患者年龄、性别、BMI，舒张压、饮酒史、CHD 家族史及用药史比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；CHD 组患者收缩压高于对照组且CHD组患者中糖尿病、吸烟的比例高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表1。本研究经我院伦理研究委员会（REB）批准。

表1 两组患者一般资料比较

1.1.2 纳入及排除标准：纳入标准：①年龄＞18岁，因胸闷或胸痛症状就诊并接受冠状动脉造影检查的患者；②各项检查完善且基本资料完整并签署知情同意书。排除标准：①先天性心脏病、心脏瓣膜病、心肌病等心脏器质性病变患者；②家族性高脂血症、重度肥胖及代谢综合征患者；③严重心、肝、肾功能衰竭者和（或）恶性肿瘤等重度消耗性疾病患者；④脑血管意外患者和（或）精神意识障碍；⑤既往冠脉搭桥术史或置入支架史；⑥处于特殊时期，如妊娠期或哺乳期；⑦入组近两周内正在接受口服降血脂药物治疗者或服用影响血清Hcy(维生素B12，叶酸)的药物者。

1.1.3 诊断标准[14]：冠状动脉粥样硬化性心脏病：经冠状动脉造影证实至少1 条主要冠状动脉血管内形成斑块并导致管腔狭窄≥50%者即可诊断。包括左主冠状动脉或左前降支冠状动脉，右冠状动脉或回旋支冠状动脉。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 主要仪器：西门子Siemens 全自动生化分析仪（北京泰林东方商贸有限公司，型号ADVIA 2400，国食药监械字2008 第2400620 号）；高效液相色谱仪（上海硅仪生化科技有限公司，型号Vanquish Flex，国食药监械字2014 第2401651 号）。

1.2.2 主要试剂：TC 检测试剂盒、TG 检测试剂盒、LDL-C 检测试剂盒、HDL-C 检测试剂盒，规格：200ml（R1:2×65ml ＋R2:1×70ml），生产厂家：美康生物科技股份有限公司。LP(a)检测试剂盒、Hcy 检测试剂盒，规格：47ml（R1：2×20ml，R2：1×7ml），生产厂家：北京九强生物技术有限公司。

1.3 方法

1.3.1 血清学指标：所有入选对象均于肘正中静脉采集空腹血（8～12h）5ml/管，静止30min后，3 000r/min 离心10min，留取上层血清或血浆待测。采用酶法测定血清TC，TG，LDL-C，HDL-C，LP(a)、Hcy 水平；采用高效液相色谱法（HPLC）测量血浆SAH，色谱柱:Venusil MPC18(4.6mm×250mm,5μm)；流 动 相:50mmol/L NaH2PO4缓冲液(pH 4.38)+10mmol/L 庚烷磺酸钠+甲醇；流速：1.0ml/min；进样量30μl；柱温30℃；紫外检测波长254 nm。

1.3.2 Gensini 评分方法[15]：CHD 的严重程度表示为每支病变的Gensini 分数之和，每支病变的Gensini 分数=冠状动脉管腔直径减少得分×其占冠状动脉病变位置的因素得分。其中冠状动脉管腔直径减少1%～25%，26%～50%，51%～75%，76%～90%，91%～99%和100%的得分分别为1，2，4，8，16 和32；冠状动脉病变位置的因素得分：左主冠状动脉为5 分，近端左前降支动脉或近端左旋支动脉为2.5 分，左前降支的中部区域为1.5 分，远端左前降支动脉、左回旋支动脉的中远端区域或右冠状动脉为1.0 分，其他部分则为0.5 分。

1.4 统计学分析 数据分析采用SPSS19.0 软件分析，采用Shapiro-Wilk 检验数据是否为正态分布，近似正态分布的资料采用均值±标准差(x±s)表示，计数资料采用n(%)表示；两样本均数比较采用t检验，率的比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman 相关分析，以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 CHD 组和对照组患者各项血液指标比较 见表2。两组患者TC 和TG 水平相比，差异无统计学意义（均P＞0.05）；与对照组相比，CHD 组患者LDL-C，LP(a)，Hcy 和SAH 水平均高于对照组，差异具有统计学意义（均P＜0.05），而HDL-C水平低于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表2 两组患者血液指标比较(x±s)

2.2 冠状动脉狭窄程度与血液各项指标的相关性分析 见表3。CHD 组患者冠状动脉狭窄程度Genisini 积分与患者LDL-C，LP(a)，Hcy 和SAH呈正相关，与HDL-C 呈负相关（均P＜0.05），与TC，TG 无相关性（P＜0.05）。

表3 Genisini 积分与各项目指标的相关性

3 讨论

CHD是导致全世界人口死亡的一个重要原因，是一个可由多种病因导致、不同诱因引发的常见疾病。其病理机制尚未完全清楚，但流行病学研究表示年龄[8]、吸烟[5]、高血压[6]、糖尿病[7]、CHD家族遗传史[16]等都是CHD 发生的危险因素。本研究也发现CHD 组患者收缩压明显高于对照组，并且CHD 组患者中糖尿病、吸烟的比例明显高于对照组，提示血压升高、吸烟史、糖尿病史等可能是CHD 发生的主要影响因素。而相比白莎等[16]报道，本研究CHD 患者与对照组家族史无显著性差异，可能与选择的实验对象有关。积极地控制血脂目前仍然是全球预防CHD 早发的一项重要措施，其中，LDL 是降脂预防的首要目标[17]。LDL-C 是动脉粥样硬化发生、发展并最终导致CHD 的主要脂质危险因素，多项研究表明[18]LDL-C 水平增高与CHD 风险增加相关。HDL-C 具有逆向转运外源性胆固醇的作用，已被证实具有抗动脉粥样硬化的作用，是CHD 发病的保护因素。本研究显示与对照组相比，CHD 组患者LDL-C 水平显著高于对照组而HDL-C 水平显著低于对照组，并发现CHD 组患者冠状动脉狭窄程度Genisini 积分与HDL-C 呈负相关，与LDL-C 呈正相关，与相关报道[18-19]一致。马煜盛等[10]研究显示LP(a)是CHD 的独立危险因素,LP(a)升高与冠心病临床稳定性及冠状动脉狭窄程度相关。刘亚东等[11]报道冠心病患者Hcy水平与冠状动脉病变程度呈正相关。本研究也显示CHD 组患者LP(a)，Hcy 水平显著高于对照组并与冠状动脉狭窄程度呈正相关。SAH 通过SAH 水解酶可逆地水解成腺苷和Hcy，SAH 浓度大约是Hcy浓度的1/500，因此Hcy 浓度的微小变化可能会导致SAH浓度相对较大的变动。在患者和普通人群中，SAH 水平的重叠比Hcy 重叠少得多。因此，SAH比Hcy 可能是更好的心血管疾病指标。BAYS 等[18]指出Hcy 水平的慢性升高导致血浆SAH 水平平行增加，其是比Hcy 更敏感的心血管疾病的生物学标志物，并且表明SAH 是Hcy 相关病症中的关键病理因素。李莉等[20]发现冠心病患者外周血淋巴细胞基因组甲基化水平显著降低,与SAH 呈负相关。本研究也显示CHD 患者血浆SAH 水平显著高于对照组，并与冠状动脉狭窄程度Genisini 积分呈正相关，相关度r为0.635。与其它六项指标相比，SAH的相关度最高。HUANG 等[12]研究发现CHD 患者冠状动脉病变与SAH 相关(β=11.8,95%CI：5.88-17.7，P＜0.05)，国内学者邹优兰等[13]分析结果显示,血浆SAH 水平升高是CHD 患病的独立危险因素（OR 值1.1，P＜0.05），SAH 单独预测冠心病时的ROC 曲线下面积为0.768,同时指出Hcy 和SAH两者联合预测CHD 的ROC 曲线下面积并未显示出比SAH 单独诊断CHD 更优。这些与本研究结果一致，都提示血浆SAH 是很好的诊断CHD 的预测指标，并与冠状动脉病变有很高的相关性。有研究显示SAH浓度的增加伴随着DNA甲基化状态的改变，从而影响基因的表达、DNA 完整性和稳定性以及染色体修饰[20]。其可能导致血管细胞的表型调节，并促进CHD 的发生和发展[21]。虽然SAH 水平升高导致CHD 的病理机制有待确认，但本实验证实了与传统血清学指标相比，血浆SAH 浓度水平与冠状动脉病变程度的相关性最高。现有的医学条件下，尽管有很多技术如血管内超声和磁共振成像、CT 冠状动脉成像、冠状动脉造影可用于CHD 的诊断，但这些诊断方法大多数是在病人出现症状时才能诊断,并且不容易形成连续资料对冠状动脉病变程度进行评估。早期识别CHD 患者并对其冠脉病变程度评估显得尤为重要。先前的研究结果与本研究结果相结合，表明血浆SAH 是很好的冠状动脉病变生物学标志物，血浆SAH 似乎是CHD 患者与对照组之间差异性更敏感的指标，血浆SAH 可能是一种新的生物学标志物用于CHD 的临床诊断，在临床诊疗过程中可将血浆SAH 用于评估冠脉病变情况，对于CHD 的预防和诊疗具有重要意义。

当然本研究也有一些局限性。首先，我们的结果受到研究的横断面性质的限制，我们只能证明关联性，其中的因果关系需要通过大数据、多中心的前瞻性随机临床试验来确定。其次，我们的研究对象并未招募代表健康人群的“正常人”，而是疑似CHD 的患者，存在一定偏倚。