经阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a，miR-425-5p水平检测对宫颈癌的诊断效能分析

赵白信，于慧娟，焦方杰，邢丽丽，黄 蕾，姚辉梅

（郑州市第七人民医院功能科，郑州 450000）

宫颈癌是威胁女性生命健康的生殖系统恶性肿瘤[1]。流行病学显示[2]，我国宫颈癌的发病率居于女性恶性肿瘤的第2 位，每年约有13 万宫颈癌的新发病例，且发病年龄有年轻化趋势。做好宫颈癌的筛查诊断，及早采取有效地干预对于降低宫颈癌病死率有重要意义[3]。目前影像学检查是恶性肿瘤诊断的常用辅助手段，彩色多普勒超声在传统二维超声结构图像的基础上，能提供浅表器官的血流动力学信息，是妇科疾病诊断中应用最广泛的影像学检查方式，但该方式受医生专业经验、体位等因素影响，常有漏诊或误诊的情况发生[4-5]。近年来分子生物学标志物检测开始在疾病的诊断中应用，为恶性肿瘤的诊断提供了新途径。微小核糖核酸（micro ribonucleic acid，miRNA）是一类新发现的非编码小RNA，参与细胞的增殖、分化等生理过程，与多种恶性肿瘤的发生发展有关。研究表明[6]，miR-130a，miR-425-5p 在宫颈癌患者中有异常表达，且与宫颈癌的病理参数密切相关，可作为宫颈癌的参考诊断标志物。目前关于彩色多普勒超声及血清分子生物学标志物在宫颈癌中的诊断研究较多，但关于二者联合应用的效能仍未明确。故此，本研究特探讨经阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a，miR-425-5p表达水平检测对宫颈癌的诊断效能，以期为宫颈癌的早期诊断方式提供补充与参考。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2017年1月～2019年1月郑州市第七人民医院收治的宫颈癌患者58 例为癌症组，同期于门诊（体检）诊断为宫颈炎及宫颈上皮瘤变者77 例为疾病组。癌症组及疾病组均经活检或手术病理检查确诊。癌症组年龄30～66 岁，平均年龄45.32±6.35 岁；已婚48 例，未婚10 例；经产妇45 例；症状表现：接触性阴道出血6 例，高危型乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染10 例，绝经后阴道出血15 例，宫颈刮片细胞学检查阳性或疑似阳性15 例，碘试验或醋酸试验阳性12 例。疾病组年龄28～65 岁，平均年龄45.02±6.50岁；已婚64例，未婚13例；经产妇63例；症状表现：接触性阴道出血24 例，HPV 感染28 例，绝经后阴道出血13 例，宫颈刮片细胞学检查阳性或疑似阳性7 例，碘试验或醋酸试验阳性5 例。另选取同期来院体检的健康女性60 例为对照组，年龄26～65 岁，平均年龄43.50±6.50 岁；已婚48 例，未婚12 例；经产妇43 例。三组受检者的年龄、婚育史比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究开展前已获得医院伦理委员会批准，纳入研究者均签署知情同意书。

1.2 试剂与仪器 Voluson E8（美国GE 公司）多普勒超声诊断系统；miRNeasy Mini Kit 试剂盒（德国Qiagen 公司）；Prime ScriPtTM反转录试剂盒（美国TaqMan）；荧光定量PCR 试剂盒检测（美国ABI 公司）。

1.3 方法

1.3.1 宫颈癌诊断方法：参照《宫颈癌诊断与治疗指南(第四版)》[7]：宫颈活检或实施宫颈高频电波刀（loop electrosurgical excisionprocedure，LEEP）宫颈锥切术病理检查确诊，以上诊断结果作为金标准。

1.3.2 阴道彩色多普勒超声检查：检查开始前叮嘱受检者排空膀胱，仰卧于检查床，取膀胱截石位，少量耦合剂涂抹于超声探头顶端后套上避孕套，将探头缓慢插入受检者阴道中段，进行横、纵、斜多切面检查，后观察宫颈内、外口，查看宫颈管回声及宫颈的整齐性。后使用彩色多普勒血流显象（color Doppler flow imaging，CDFI）查看宫颈血流分布，记录收缩期血流速度（peak systolic velocity，PSV）和阻力指数（resistive index，RI）。最后对宫体、卵巢及宫旁各组织情况进行仔细观察。超声检查均为具有5年以上临床经验的同一超声科医师进行操作。以Adler 血流分级进行性质判断，其中0～Ⅰ级为良性，Ⅱ～Ⅲ级为恶性。

1.3.3 血清miR-130a，miR-425-5p 检测：抽取受检者空腹外周静脉血4 ml，3 500 r/min 离心10 min，离心半径12.5 cm，分离上层血清，保存于-80℃待检。提取总RNA，扩增反转录产物cDNA，取0.5 μl cDNA 模板，以荧光定量PCR 试剂盒检测血清中miR-130a，miR-425-5p 水平，目的基因的相对表达量以2-△△Ct表示。实验步骤均严格按照试剂盒操作说明进行。

1.4 统计学分析 采用SPSS19.0 统计学软件分析数据，正态分布资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，两两样本比较采用LSD-t检验；超声，miR-130a，miR-425-5p 诊断效能评价采用灵敏度、特异度、准确度表示，并以Med Calc 绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）分析单独检测和联合检测的诊断价值，以Hanley-McNeil 方法比较ROC 曲线下面积（area under curve，AUC）。以α=0.05 为校验水准。

2 结果

2.1 经阴道彩色多普勒超声诊断参数比较 见表1。三组PSV，RI 水平比较差异有统计学意义（P＜0.001）；癌症组、疾病组、对照组的PSV依次降低，两两比较差异均有统计学意义（均P＜0.001） ；癌症组、疾病组和对照组的RI 依次升高，两两比较差异均有统计学意义（P＜0.001）。

表1 三组的PSV，RI 水平比较（±s）

项目癌症组（n=58）疾病组（n=77）对照组（n=60）FP PSV（cm/s）12.01±2.85 9.53±1.98 8.52±1.23 43.178 ＜0.001 RI0.42±0.10 0.58±0.12 0.66±0.14 60.098 ＜0.001

2.2 血清miR-130a，miR-425-5p 表达情况比较 见表2。三组的血清miR-130a，miR-425-5p表达水平比较差异有统计学意义（均P＜0.001），癌症组的血清miR-130a，miR-425-5p表达水平均高于疾病组和对照组，疾病组均高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.001）。

表2 三组的血清miR-130a，miR-425-5p 表达情况比较（±s）

表2 三组的血清miR-130a，miR-425-5p 表达情况比较（±s）

项目癌症组（n=58）疾病组（n=77）对照组（n=60）FP miR-130a0.092±0.0300.045±0.0120.030±0.008181.070＜0.001 miR-425-5p0.733±0.2030.365±0.0980.205±0.048259.304＜0.001

2.3 经阴道彩色多普勒超声与血清miR-130a，miR-425-5p 单独及联合诊断宫颈癌的效能分析 见表3。以病理结果为标准，分析经阴道彩色多普勒超声与血清miR-130a，miR-425-5p 单独及联合诊断宫颈癌的灵敏度、准确度、特异度。阴道彩色多普勒超声与血清miR-130a，miR-425-5p 联合检测的敏感度比单独检测低，但特异度和准确度比单独检测高。

表3 经阴道彩色多普勒超声与血清miR-130a，miR-425-5p 单独及联合诊断宫颈癌的效能（%）

2.4 经阴道彩色多普勒超声与血清miR-130a，miR-425-5p 联合诊断宫颈癌的ROC 曲线分析 见图1。经阴道彩色多普勒超声、血清miR-130a，miR-425-5p及联合诊断宫颈癌的AUC分别为0.889，0.820，0.785，0.932，三者联合检测的AUC 大于单独检测（P＜0.05）。

图1 系列联合检测ROC 曲线图

3 讨论

宫颈癌在病变早期多无明显的症状体征，容易被忽视、漏诊，患者就诊时已进入中晚期，病死率较高，因此做好宫颈癌的早期筛查，诊断是降低病死率的有效手段[8]。目前宫颈癌的筛查方式较多，如何需求一种安全、客观、有效、可重复性强的筛查方法是临床医师的关注重点。HPV 感染是导致宫颈癌病变的首要因素，因此HPV 是宫颈癌的主要筛查方式之一，但该方式的敏感度和特异度不高，临床应用具有一定的局限性[9]。脱落细胞学、病理检查是指南推荐的宫颈癌诊断方式，虽有较高的特异度，但对检查技术的要求较高，且费用昂贵[10]。以彩色多普勒超声为主的影像学检查和分子生物学检测以安全、无创、可重复性好的特点成为临床首选。

本研究结果中，癌症组的PSV 大于疾病组和对照组，RI 小于疾病组和对照组，血清miR-130a，miR-425-5p表达水平高于疾病组和对照组（P＜0.001），提示经阴道彩色多普勒超声对宫颈癌诊断有特异性，且血清miR-130a，miR-425-5p表达水平与宫颈癌的发生有关。经阴道彩色多普勒超声是产科超声的新突破，血流信息是彩色多普勒超声判断病灶性质的关键，新生血管是恶性肿瘤生成和发展的基础。宫颈的恶性肿瘤因细胞生长活跃，代谢和组织生长快速，出现大量的异常新生血管结构，并形成动静脉短路，此类血管平滑肌相较于正常组织的血管弹性差，经彩色多普勒超声检查可探及丰富的血流信号，频谱多普勒内为低阻动脉血流，PSV 数值明显增加，RI 较小[11-12]。慢性宫颈炎或宫颈上皮瘤变者患者多存在宫颈囊肿和肥大，可发现少量宫颈血流信号，而正常宫颈组织无明显的血流信号，因此其PSV 值小，而RI 值大[13]。何玉春等[14]研究结果中显示癌症组的PSV，RI 与其他疾病患者有显著差异，与本研究结果相似，证实经阴道彩色多普勒超声对宫颈癌的诊断鉴别有一定的价值。

miRNA 作为非编码的RNA 分子，主要参与真核生物转录后基因的表达与调控，与细胞的增殖、分化与凋亡等生理过程密切相关，在多种癌组织的病理中均有异常表达[15]。马向薇等研究显示[16]，miR-130a 可促进恶性肿瘤细胞的增殖与转移，其机制与激活NF-κB 等信号通络有关。朱军等[17]研究显示，miR-425-5p 能抑制程序性细胞死亡因子10（programmed cell death 10，PDCD10）的表达，促进肿瘤的增殖、迁移和侵袭。以上分析与结果说明血清miR-130a，miR-425-5p参与卵巢癌的发生发展，可作为潜在分子生物学标志物。

经阴道彩色多普勒超声在宫颈癌的诊断鉴别中虽可清晰的显示病灶声像特征及血流信息，但早期的宫颈癌及癌前应变者宫颈阴道外观多正常，且未出现浸润和远处转移，超声声像图表现不典型，无明显的血流信号，有误诊及漏诊的可能[18]。miRNA 在外周血中含量较为丰富且稳定，在胃癌、结直肠癌、卵巢癌等恶性肿瘤中均有异常表达，作为潜在的肿瘤分子生物学标志物，对于诊断宫颈癌的特异度不高[19-20]。本研究中ROC 曲线分析显示，经阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a，miR-425-5p 诊断宫颈癌的敏感度、特异度、准确度、AUC 分别为74.14%，90.91%，83.70%和0.932，阴道多普勒超声分别为77.59%，87.01%，82.96%和0.889，血清miR-130a 分别为79.31%，80.52%，80.00%和0.820，miR-425-5p 分别为74.07%，65.19%，76.30%和0.785，提示经阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a，miR-425-5p 诊断宫颈癌有更高的特异度、准确度和AUC，具有良好的诊断效能。

综上所述，在宫颈癌的诊断中，应用经阴道彩色多普勒超声、血清miR-130a，miR-425-5p 联合诊断较单独应用具有更高的效能，且具有安全、无创、可重复强的优势，可作为宫颈癌筛查、诊断的首选方式。宫颈癌的发生涉及因素较多且机制复杂，是否有其更加特异性生化指标有待进一步探讨，且是下一步研究方向。