茶多酚联合CO2激光治疗尖锐湿疣的效果及对患者IRAK1、IRAK4、TRAF6的影响

聂廷芬, 郑宝勇, 张彦秀

天津医科大学宝坻临床学院(天津市宝坻区人民医院)皮肤科(天津 301800)

尖锐湿疣主要临床表现为肛周、生殖器官表皮组织出现增生性损害，主要传播途径包括性传播以及母婴传播[1-2]。随着我国社会、经济、文化思想的不断发展，人们生活观念逐渐开放，特别是青年群体，性观念较为开放，致使我国尖锐湿疣症状发病率呈现逐年递增趋势[3-4]。有学者在研究中表示，尖锐湿疣症状的发生、发展威胁患者身心健康[5]。目前关于茶多酚联合CO2激光治疗尖锐湿疣的研究较少，本研究旨在探究两者联合对白细胞介素-1受体相关激酶-1(IRAK1)、白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK4)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)表达的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年2月至2019年2月我院收治的尖锐湿疣患者108例，随机数字表法分为CO2激光组、联合组各54例。CO2激光组男30例，女24例，年龄23～42岁，平均(32.5±6.3)岁，病程2～5个月，平均(3.6±1.2)个月；联合组男28例，女26例，年龄24～42岁，平均(32.9±6.5)岁，病程2～5个月，平均(3.5±1.3)个月。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

排除标准：(1)接受过相关治疗者；(2)茶多酚过敏者；(3)患有其他生殖系统疾病者；(4)心、肝、肾功能障碍者；(5)精神、语言障碍者。

所有患者家属对本研究均知情、同意。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 CO2激光组：于病灶组织位置涂抹4%醋酸溶液，10 min后进行消毒、麻醉处理，使用CO2激光治疗仪反复烧灼患者尖锐湿疣组织，烧灼范围包含全部疣体组织及疣体四周2 mm，每两次CO2激光治疗需间隔10 d。联合组：在CO2激光组的治疗基础上使用茶多酚片进行联合治疗：2片/次，3次/d，于三餐后使用温水进行吞服。CO2激光方法与CO2激光组保持一致。

1.2.2 创面恢复状况 统计、对比CO2激光组、联合组患者创面结痂、愈合情况。

1.2.3 指标检测 采集所有患者治疗前及治疗结束3 d后空腹静脉血5 mL，离心处理后-80℃环境中保存。酶联免疫吸附实验法检测血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素2(Ang-2)及白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-17(IL-17)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平：设置10个标准孔，设置1个空半空及若干待测样品,在10 μL待测样品中加入40 μL样本稀释液，封板膜封板，置于37℃水浴箱温育30 min，清洗反应板5次，每次间隔30 s，拍干，在除空白孔以外的各孔中加入酶标液50 μL，封膜温育30 min，清洗反应板5次，每次间隔30 s，拍干，在各孔中加入显色A液、B液各50 μL，轻轻震荡混匀，37℃避光环境下显色15 min，在反应孔内加入终止液50 μL/孔以终止反应，450 nm波长测量每孔吸光度，检测VEGF、Ang-2、IL-8、IL-17、hs-CRP水平。T淋巴细胞亚群水平检测：对待测标本做抗凝处理，分为两管，分别加入20 μL CD8+、CD4+、CD3+单克隆抗体，在室温环境下孵育30 min后在各管中加入融血剂，待其完全溶血后进行离心处理，10 000×g离心5 min，弃上清液，使用洗涤液对其进行洗涤后在各管中加入150 μL固定剂，使用0.5 mL PBS混合均匀制备为悬液，使用流式细胞仪检测CD8+、CD4+、CD3+水平。使用Western blot法对IRAK1、IRAK4、TRAF6相对表达量进行检测：提取50 μg蛋白，煮沸5min使蛋白变性后用SDS-PAGE凝胶电泳，然后依据蛋白分子大小把凝胶切开并转移至PVDF膜上,用Western封闭液把待测蛋白和内参蛋白封闭90 min在室内,按1∶1 000加到待测蛋白抗体，内参抗体以1∶2 000加入抗体,孵育过夜，使用Western洗涤液洗涤5次，每10 min 1次。按1∶5 000加入稀释山羊抗兔IgG,孵育60 min室温水平摇床,洗涤5次Western洗涤液,每10 min 1次。经过ECL显色和曝光后，进行BIO-RAD成像，使用Image J图像分析系统检测条带的灰度值,以内参条带灰度值与蛋白比值为结果统计分析。

1.2.4 治疗效果评价 按照显效、有效、无效的标准对两组患者临床治疗效果进行评价。显效：尖锐湿疣组织病灶彻底消退，病灶组织部位表皮恢复正常，未复发；有效：尖锐湿疣组织病灶明显消退，病灶组织部位表皮有效改善；无效：尖锐湿疣组织病灶未消退，或治疗后病情复发。总有效率=(显效数+有效数)/总例数×100%。

2 结果

2.1 创面恢复状况 相比CO2激光组，联合组创面结痂、愈合时间较短，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 创面恢复状况

2.2 VEGF、Ang-2水平变化 治疗前两组VEGF、Ang-2水平差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，相比CO2激光组，联合组VEGF、Ang-2水平较低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 VEGF、Ang-2水平比较

2.3 炎症反应比较 治疗前两组炎症因子比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，相比CO2激光组，联合组IL-8、IL-17、hs-CRP水平较低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 血清IL-8、IL-17、hs-CRP水平比较

2.4 免疫功能对比 治疗前两组免疫功能比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，相比CO2激光组，联合组CD8+水平较低，CD4+、CD3+水平较高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 T淋巴细胞亚群水平比较

2.5 IRAK1、IRAK4、TRAF6相对表达量比较 治疗前两组IRAK1、IRAK4、TRAF6表达比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后两组IRAK1、IRAK4、TRAF6表达均下降，且联合组IRAK1、IRAK4、TRAF6表达均低于CO2激光组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表5 IRAK1、IRAK4、TRAF6相对表达量比较

2.6 治疗有效率对比 联合组患者治疗有效率显著高于CO2激光组，差异有统计学意义(2=4.285，P=0.038)。见表6。

表6 治疗有效率对比 例(%)

3 讨论

临床常使用药物治疗、激光治疗、光动力疗法、电灼治疗等手段对尖锐湿疣患者进行治疗[6-7]。CO2激光通过气体激光气化尖锐湿疣组织[8-9]。顾丽群等[10]在研究中使用CO2激光对尖锐湿疣患者进行治疗，取得了较为理想的临床治疗效果。茶多酚是茶叶中主要活性成分，具有抗衰老、抗氧化、调节免疫、降血脂等药理作用。刘广悦等[11]在研究中表示，茶多酚具有调节免疫、提升机体抵抗力的作用，使用茶多酚联合光动力疗法对尖锐湿疣患者进行治疗，效果显著。本研究中使用茶多酚联合CO2激光对尖锐湿疣患者进行治疗，患者病灶创面结痂、愈合时间相对较短，说明该治疗方案能够促进患者创面愈合。

尖锐湿疣发生与病灶组织新生血管的发展密切相关[12]。VEGF、Ang-2均与机体组织新生血管的生成密切相关。有研究显示，VEGF、Ang-2在尖锐湿疣组织中均呈现异常表达，从而参与尖锐湿疣症状的发生、发展[13-14]。本研究结果显示，使用茶多酚联合CO2激光对尖锐湿疣患者进行治疗，患者VEGF、Ang-2水平出现明显下降，说明两者联合能够抑制VEGF、Ang-2水平，从而达到治疗效果，出现这一研究结果的原因可能是茶多酚具有诱导组织细胞凋亡、抑制新生血管生成的作用。

有研究显示，尖锐湿疣的发生伴随着炎症反应[15]。检测IL-8、IL-17、hs-CRP水平能够较为准确地对尖锐湿疣患者炎症反应进行评价。沈跃莉等[16]在研究中表示，尖锐湿疣患者IL-8水平较高，对尖锐湿疣患者进行有效的治疗，能够下调IL-8水平，减轻患者炎症反应。孔雷等[17]在研究中表示，IL-17在尖锐湿疣组织中水平较高，检测IL-17水平对评价尖锐湿疣症状严重程度以及临床治疗效果具有重要意义。吴英桂等[18]在研究中表示，有效的临床治疗能够下调血清hs-CRP水平，减轻患者炎症反应。本研究结果显示，使用茶多酚联合CO2激光治疗尖锐湿疣，能调控IL-8、IL-17、hs-CRP水平，抑制机体炎症反应，治疗效果显著。

尖锐湿疣症状的发生、发展通常伴随着机体免疫功能异常。李亚伟[19]在研究中表示，T淋巴细胞亚群在尖锐湿疣中水平呈现明显异常。本研究显示，使用茶多酚联合CO2激光治疗尖锐湿疣，能够通过调控T淋巴细胞亚群水平提升患者免疫功能。

IRAK1、IRAK4、TRAF6作为MyD88信号通路下游因子，三者水平变化与机体免疫功能变化以及炎症反应密切相关。史毓杰等[20]在研究中显示，IRAK1、IRAK4、TRAF6在尖锐湿疣组织中表达异常。本研究显示，使用茶多酚联合CO2激光对尖锐湿疣患者进行治疗，患者IRAK1、IRAK4、TRAF6表达出现明显下调，说明两者联合能够调控IRAK1、IRAK4、TRAF6的表达，起到调节免疫、抑制炎症反应的作用，从而发挥治疗效果。

综上所述，使用茶多酚联合CO2激光对尖锐湿疣患者进行治疗，能够有效促进患者病情恢复，控制患者病灶组织发展，抑制炎症反应，调控T淋巴细胞亚群水平及IRAK1、IRAK4、TRAF6表达，治疗效果显著，具有一定的临床应用价值。