艾滋病实验室诊断的研究进展

文/秦燕飞

艾滋病称之为获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS），其病原体为人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV），又称之为艾滋病病毒。艾滋病作为一类传染性疾病，威胁我国群众健康安全[1]。至2005年我国制定第一版艾滋病诊断指南，随后2011年和2015年、2018年分别进行更新，对其内容进行完善。目前艾滋病病毒1型（HIV-1）为目前艾滋病感染常见病原型，占据总发病人群95%以上[2]。当人体感染艾滋病病毒后，其潜伏时限为8～9年，患者感染后临床症状表现不显著，其外表与常人相比较无差异，但HIV感染后会对人体免疫系统攻击，侵犯并进入机体细胞后，清除率偏低，造成T4淋巴组织细胞受损，人体因免疫系统偏低并感染各类疾病，成为艾滋病患者死亡重要因素。而对感染者及其潜伏者诊断常见措施为体液病毒抗原及抗体检测，优势为操作简便，应用普遍，以抗体检测多见[3-4]。但HIV P24抗原及病毒基因测定在HIV感染检测地位和重要性受到重视。文章就艾滋病实验室诊断情况如下分析，现报道如下。

1 抗体检测

1.1 酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验为一类方便筛查方式，目前应用方便且范围广泛，而间接酶联免疫吸附试验中血清样本中HIV抗原被固相载体包裹并相互反应，酶标记抗人免疫球蛋白抗体，与底物显色反应，可作为样本是否存在HIV抗体方式。目前酶联免疫吸附试验中，其试剂发展至第4代[5]。完全病毒裂解产物归为第1代试剂抗原，实施间接酶联免疫吸附试验后，可判断是否存在抗体，因内部检测中杂质较多存在敏感性、特异性限制，结果呈现假阳性。第2代则作为重组、合成多肽抗原，依旧选择间接酶联免疫吸附试验进行抗体检测，并对HIV-1、HIV-2水平检测，提升敏感性、特异性[6]。由于第2代试剂基于基因工程抗原，以重组抗原载体组成部分问题，检测期间假阳性偏高。第3代试剂抗原人工合成中，HIV抗原决定簇多肽，基于双抗原夹心法检测，分析优势上能检测HIV抗原相关抗体亚型，检测敏感性显著提升，但仍然存在漏检情况[7]。第4代则基于HIV抗原以及抗体联合试剂，检测P24抗原、HIV-1及HIV-2抗体，敏感度高，缩短HIV感染后检测窗口期。目前常见为第3代试剂，第4代试剂被作为国家血源筛查。

1.2 胶体金快速检测实验

基于HIV特性，对检测手段要求上不仅仅具有高度特异性及灵敏度，需要具备方便快捷。HIV检测中应用胶体金快速检测实验可短时间内获得结果，被广泛用于急诊检测。基于包被HIV抗原颗粒凝集检测抗体存在，依据凝集反应判断结果[8]。对该类方法结果判读上，检测区与质控区同时显示出一条红线，则HIV抗体阳性，仅质控区出现一条红线，则为HIV抗体阴性。此时检测区与质控区未出现红色条带表明本次试验开展无效。选择胶体金快速检测试验干预，优势为操作简便及结果易判定，可适用于单份标本检测。

2 HIV抗原检测

HIV-1核心蛋白为P24抗原，当HIV侵入机体后，此时机体内P24水平会随着病毒复制发展，患者早期样本中，HIV-1P24抗原可被检测，对样本检测期间，其时间早于HIV抗体，为此，临床早期感染可应用P24抗原判断，缩短窗口期[9]。当感染2～3周后可检测出P24，抗体中和则减少游离抗原，造成抗原检测结果影响，且机体并进入无症状感染期。疾病后期时，病毒复制能力增强，P24水平随之上升，为此，对HIV早期诊断可选择P24抗原检测，其浓度变化可反应患者病情进展。目前常见诊断方法包括放射免疫分析、酶联免疫吸附试验等有效手段[10]。但仍然存在假阳性可能，仍需进一步开展确证试验。研究指出[11]，第四代酶联免疫吸附试验中联合P24抗原检测系统，结果显示，其准确性显著高于单独第四代酶联免疫吸附试验、P24抗原。随着医学技术不断发展，随着抗原检测新方法不断更新、应用，如免疫复合物裂解检测法、超敏感酶免疫测定法等。

3 HIV核酸检测

HIV病毒研究、血液筛查中常见且广泛定量核酸方式之一为反转录PCR（RT-PCR）。对其原理分析：基于血浆中HIVRNA，基于病毒基因组几个保守长末端重复序列、gag、int 和 pol区域设计HIV特异性引物，将亚型范围扩大且覆盖，经PCR扩增后，并得到cDNA，基于序列特异性荧光探针，对每个扩增周期新生DNA均开展实时定量检测。而目前最为广泛两种检测方法为雅培Real time HIV-1 PCR 和罗氏 Cobas Taq-Man[12]。核酸序列扩增试验为目标核酸扩增法，为一类等温扩增系统，对其原理分析上，系统内混合酶系统体外模拟反转录病毒，可在细胞内复制过程，如Bio Mérieux Nucli Sens Easy Q HIV-1 v2.0和Hologic Aptima HIV-1。对其检测范围为40～107拷贝/ml[13]。上述方式应用上对A～G各亚型均起到较好反应，对各种生物样品测定，且各类抗凝剂均适用，对样本提取、测定反应上，仍需大量手工操作。

4 淋巴细胞亚群检测

T淋巴细胞分类中，CD4＋代表辅助T细胞，CD8＋代表抑制细胞、杀伤T细胞。当HIV感染后，人体共计靶细胞以CD4＋淋巴细胞为主，此时细胞减少，CD8＋水平上升，造成CD4＋/ CD8＋细胞比值倒置，以细胞免疫功能受损为表现[14]。当HIV感染后，CD4＋T淋巴细胞计数反应人体免疫状态及其病程进展，并明确疾病分期及治疗效果判断、HIV感染者临床并发症。目前常用流式细胞数获取CD4＋T淋巴细胞数绝对值[15]。因此，CD4＋/ CD8＋比值能评估患者病情严重程度、治疗时机及预后情况，当比值越低，则表明细胞免疫缺陷越严重。

5 小结

HIV实验室技术被用于HIV感染诊断、流行病学调查及血液筛查等多个方面，对HIV感染预防控制、艾滋病临床治疗起着重要辅助作用。随着现代医疗科学技术不断发展，HIV实验室诊断逐渐向早期、快速、敏感及准确方向发展，后续不断发展一些新的技术可逐步应用于上述领域，此时HIV诊断及治疗技术上一个新的台阶。