精子DNA损伤对IVF-ET中胚胎质量及临床结局影响

朱 赛 逄树婷 辛 妮

青岛市市立医院(266000)

不孕不育中近1/2与男方因素有关，精子的生成、成熟、混合成精液、进入女性生殖道乃至与卵子结合的过程中任何一个环节出现问题都可能导致生殖障碍[1-2]。体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术的应用为解决这部分患者的生育问题提供了可靠途径，但如精子的DNA发生损伤，则可能影响亲子两代的健康。已经有研究报道，精子DNA损伤可能会影响精卵结合、受精卵的卵裂和胚胎发育等过程[3-4]。但精子DNA损伤对IVF-ET胚胎质量和临床结局的影响临床研究尚少，因此本文进行了研究，为临床工作提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选择2015年1月—2018年7月在本院行IVF-ET治疗夫妇。纳入标准：①女方年龄≤35岁；②采用长方案促排卵；③IVF第一周期。排除标准：①女方患多囊卵巢综合征、子宫内膜异位症、输卵管积水；②男方伴有心、肝和肾功能严重障碍；③男女任何一方3个月内有服用激素类药物；④男方存在明显生殖器外伤史，或有明显睾丸、副睾及输精管异常等。根据Egenson及Lason等推荐标准[5]，采用流式细胞仪联合精子染色质结构分析DNA受损精子所占百分比(DFI)分组。本研究经本院伦理委员会审批，患者均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1精液常规以及精子DNA检查收集前2～7d禁性行为，手淫法取精液，采用IVOS型伟力彩色精子质量检测系统(美国汉密尔顿公司)检测精液常规。采用精子染色质扩散法检测精子DNA碎片，精子DNA碎片判定标准：精子头部仅产生较小的光晕或无光晕，单侧光晕的厚度不超过精子头部 最小直径的 1/3。精子DNA 碎片率(%)=存在 DNA 碎片精子数/被观察精子总数×100%。

1.2.2女方控制性促排卵所有患者均采用黄体中期长方案，B超监测排卵后5～7天给于醋酸曲普瑞林(达必佳，Dacapeptyl，德国辉凌)每日0.05～0.1mg皮下注射进行垂体降调节，共14～18天；当达到降调标准后，根据患者卵巢储备功能、窦卵泡计数(AFC)等决定GN启动剂量(112.5～225IU/d)。当1个卵泡直径≥20mm或2个卵泡直径≥18mm时，给予rHCG(艾泽，德国默克雪兰诺)250μg扳机，扳机后37h取卵。

1.2.3授精及胚胎移植常规IVF授精，受精后16～18h观察原核情况，第3天观察胚胎卵裂情况。根据患者情况，取卵后第3天行胚胎移植或第5天行囊胚移植，移植后给于黄体支持，移植后14d血β绒毛膜促性腺激素(β-HCG)≥50IU/L者为生化妊娠，移植后28d B超下见到孕囊者为临床妊娠。

1.3 分析指标

①基本数据，包括男方年龄、女方年龄、不孕年限、男方体质量指数、女方基础卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、 Gn时间、Gn量、获卵总数和成熟卵子率。②精液常规 精液常规，包括精子密度、精子活率和精子正常形态百分数。③胚胎质量结局，成熟卵率、受精率、正常受精率、卵裂率、正常卵裂率、优胚率和囊胚形成率。④临床结局，临床妊娠率、种植率以及流产率等。

1.4 数据处理

2 结果

2.1 基本情况

共治疗2013对夫妇，其中5对男方未进行精子染色质结构分析试验(SCSA)，最终纳入研究2008对夫妇。DFI <15%组90例、DFI 15%～30%组1831例，DFI≥30%组87例。3组基本情况无差异。见表1。

表1 各组夫妇基本情况比较

2.2 各组精液常规比较

DFI<30%组精子密度、精子活率、精子正常形态率均高于DFI≥30%组 (P<0.05)。见表2。

表2 各组精液常规比较

2.3 各组胚胎质量及培养结局比较

3组的平均获卵数、成熟卵率、受精率、正常受精率、卵裂率、优胚率和囊胚形成率等均无差异(P>0.05)。见表3。

表3 各组胚胎质量及培养结局比较[%(例)]

2.4 各组临床结局比较

DFI<15%组90例中55例、DFI<30% 1831例中1154例和DFI≥30%组87例中54例分别进行了新鲜胚胎移植，3组平均移植胚胎数、移植卵裂期胚胎率、移植囊胚率、临床妊娠率、种植率以及流产率等均无差异(P>0.05)。见表4。

表4 各组临床结局比较[%(例)]

2.5 男性DFI与体质指数、年龄关系

使用Pearson对男性DFI与体质量指数、年龄相关性进行分析，男性DFI与体质量指数(r=0.314,P=0.722)及年龄(r=0.159,P=0.873)均无相关性。

3 讨论

流行病学统计显示，不孕中男方原因和女方原因所致不孕不育约各占1/2[6]。精子质量有诸多影响因素，如内分泌系统紊乱导致无法正常调节精子生成、成熟、形成精液和受精的一系列过程等[7]。目前关于男性精子质量检测以精液常规为主要标准，但精子指标会受到主观影响而波动，有时无法反映患者常规的精液水平，对治疗方案的制定造成影响[8-9]。IVF-ET发展，使不孕患者生育几率明显增加，而基因检测也被越来越多应用于临床检测[10]。精子DNA是生命遗传的核心，精子DNA的损伤对胚胎质量的影响以及妊娠临床结局的影响是临床研究重点课题[11-12]。

本研究3组女性患者资料来看，男女方年龄、男方体质指数、男方精子状况、不育时间、女方基础FSH、基础LH、用药Gn总量和用药Gn总天数未见差异，且女方身体状况较好，说明本次研究受到女方影响较小。胚胎质量和临床结局显示，IVF-ET治疗过程中，DFI≥30%组和DFI<30%组的成熟卵率、受精率、正常受精率、卵裂率、正常卵裂率、优胚率、囊胚形成率均未见差异，说明精子DNA损伤对IVF-ET胚胎质量可能没有明显影响。有研究认为精子DNA损伤是导致男性不育和辅助生殖技术(ART)失败的重要原因[13-16]，但二者间相关性并没有明确结论，本次研究受精和卵裂过程与精子DNA损伤无关；从临床结局上看，DFI≥30%组和DFI<30%组患者临床妊娠率、种植率和流产率也未见差异，这与舒金辉[17]等研究结果一致。可能原因：一是因受精主要受到精子的运动能力、顶体酶活性、表面活性物质等因素影响，与精子内部DNA物质相关性不大，所以对受精没有产生明显影响；对卵裂影响不明显，是因为IVF-ET接近自然选择过程，DNA不完整的精子无法与卵子结合，由于正常结合的精子均需DNA完整继而正常发育成胚胎[18-19]；此外，考虑成熟的卵母细胞对损伤精子的DNA具有修复作用[20]。对男性DFI与体质指数和年龄进行分析均无相关性，说明男性年龄和体质指数可能不是影响精子DNA损伤的主要因素，与有关文献报道类似[21]。

本文的不足：造成胚胎质量不好或自然流产的原因较多，本文主要探讨了DFI对胚胎质量和流产的影响，但所有组别的男女性不育因素难以全面排查，一定程度影响了本文的结果与结论。因此有必要增加研究中心、增加样本量，控制纳入标准再进行深入分析。

综上所述，精子DNA损伤会影响精子质量，从而对生育造成影响，但精子DNA损伤对IVF-ET胚胎培养质量和临床结局可能无明显影响。