增强聚凝胺法在Rh 系统抗体鉴定中的作用*

丁梦圆，严洁婷，陈 婧，张 辉，汤龙海，王明元

（苏州市中心血站，江苏215000）

在溶血性输血反应和新生儿溶血病相关抗体中，Rh 系统抗体占64.4%[1]，抗-E 为Rh 系统抗体中最常见的抗体(26.4%)，其次为抗-D(19.1%)，其余包括抗-C(4.75%)、抗-c(4.32%)、抗-e(1.90%)及其他RhCE 复合抗原抗体。通常抗-E 常伴随抗-c(或抗-cE 同时存在)，抗-C 常伴随抗-e(或抗-Ce 同时存在)，而联合抗体常存在一强一弱情形，在日常检测中易被漏检而导致溶血性输血反应的发生[2-3]。Rh系统抗体对聚凝胺法敏感，成本低廉，操作简便，是输血实验室常用方法[4-5]。本研究选择2020年5月1日—8月25 日在本实验室进行抗体鉴定或溶血三项检查的93 例标本，其中39 例存在Rh 系统抗体(3 例为新生儿溶血病)，探讨增强聚凝胺法在Rh系统抗体鉴定中的作用，以减少溶血性输血反应的发生。

1 资料与方法

1.1 一般资料 进行抗体鉴定或溶血三项检查的93 例标本中39 例存在Rh 系统抗体(3 例为新生儿溶血病)，男性12 例，女性27 例；年龄0～89 岁，中位年龄56 岁；ABO 血型:A型16 例(41.03%)，B型8例(20.51%)，O型8 例(20.51%)，AB型3 例(7.69%)，无血型结果4 例(10.26%)；Rh 分型:CCee型21 例(53.85%)，CcEe型1 例(2.56%)，ccEE型4 例(10.26%)，ccEe型1 例(2.56%)，mf型5 例(12.82%)(因近期输血导致的混合视野)，无分型结果7 例(17.95%)；有输血史或妊娠史32 例，其中有多次(≥2 次)输血史或妊娠史19 例，次数不详13 例，另7例临床资料不全。

1.2 仪器与试剂 KA-2200 血清学离心机(日本Kubota)，血型卡离心机(瑞士DiaMed)，微柱凝胶孵育器(瑞士DiaMed)，电热恒温水浴箱(上海医疗器械七厂)。抗人球蛋白试剂(批号20185002)、试剂红细胞组(批号20200423、20200611)、抗-D(IgM)(批号20191806)、抗-C(批号20203001)、抗-c(批号20193101)、抗-E(批号20203201)、抗-e(批号20193301)均为上海血液生物产品，ABO 血型定型红细胞试剂(江阴力博， 批号202004002、202006009、202007009)，低离子抗人球蛋白卡(瑞士Biorad，批号50531.48.11)，凝聚胺介质试剂(珠海贝索，批号A200301)。

1.3 操作方法 使用抗人球蛋白试剂检测患者直抗，在盐水和抗人球蛋白卡中进行抗体鉴定，对有Rh 系统抗体(包括疑似)的标本加做CcEe 抗原鉴定，对试剂红细胞组格局不明显或不能通过抗原检测排除联合抗体者，加做增强聚凝胺实验。

增强聚凝胺法具体操作:取小试管若干支，标记并分别加入待检血清2 滴，每支试管中分别加入试剂红细胞组(10个)各1 滴，另取2 支试管加入AB型血清(抗筛阴性)2 滴和试剂O 细胞1 滴(阴性对照)，混匀。加LIM 试剂0.65 mL，37 ℃放置1 分钟。加入2 滴Polybrene 试剂，立即以1000 g 离心1 分钟，弃上清后摇动试管，肉眼判断红细胞凝集情况。如果凝集≥3+则继续操作，否则该试验为无效需重做。37 ℃放置1 分钟，每5 支试剂红细胞组和1 支阴性对照一起观察结果，加入2 滴重悬液，轻摇试管，肉眼观察，试剂红细胞组与阴性对照的凝块同时散开则为阴性，慢于阴性对照散开则为阳性(±～4+)。

2 结果

2.1 Rh 系统抗体特异性 通过凝胶卡和(或)增强聚凝胺检出16 例标本存在一种以上Rh 系统特异性抗体，由于部分标本的临床资料不完全，实际比例可能更高。在抗体特异性中，同种抗-E(包括抗-cE、抗-E 和抗-E，抗-Jkb)占61.54%(24/39)，其中伴有抗-c 抗体者(抗-cE)占45.83%(11/24)。见表1。

表1 Rh 系统抗体特异性 例（%）

2.2 直抗强度以及抗体在凝胶卡和增强聚凝胺法中的凝集强度 在产生Rh 系统同种抗体的39 例患者中，直抗阴性23 例(58.97%)，±2 例(5.13%)，1+4 例(10.26%)，2+3 例(7.69%)，3+6 例(15.38%)，未检测1 例(2.56%)，直抗多为阴性或弱阳性(≤2+)，强阳性(3+)6 例中2 例为Rh 系统抗体导致的新生儿溶血病，3 例为类抗体。抗体在凝胶卡法和聚凝胺法中的凝集强度以试剂红细胞组的平均强度表示，两种方法凝集强度比较，差异无统计学意义(χ2=4.132，P=0.446)。见表2。

表2 直抗以及抗体在凝胶卡和增强聚凝胺法中的凝集强度 例（%）

2.3 增强聚凝胺与凝胶卡比较 在存在一种以上特异性抗体的16 例标本(包括类抗体)中，仅通过凝胶卡检出6 例(37.50%)，通过增强聚凝胺检出其他抗体10 例(62.50%)。凝胶卡直接检出(抗-Ce/抗-cE/抗-D/类抗体)11 例(28.21%)；凝胶卡检出抗-C，根据抗原排除抗-e 1 例(2.56%)；凝胶卡检出抗-e/抗-E，增强聚凝胺另检出抗-C/抗-c/抗-Jkb 10 例(25.64%)；凝胶卡格局不明显，增强聚凝胺检出抗-E/抗-D 4 例(10.26%)；凝胶卡检出抗-E，增强聚凝胺排除抗-c 10 例(25.64%)。

3 讨论

在我国Rh 系统抗体为仅次于ABO 系统抗体的最具临床意义的抗体[6]，由于抗-c 和抗-E、抗-C 和抗-e 常以一强一弱的形式伴随出现，在输血前极易漏检而导致不良输血反应[7]。聚凝胺法在输血实验室广泛用于交叉配血、抗体筛查和鉴定，但不同实验室对意外抗体的检出效率差别较大[4，8-9]。经典聚凝胺法对Kidd、Lewis 血型系统的抗体敏感度较低[10]，该方法对操作者要求较高，必须正确振摇细胞扣，尽快观察结果[11]以及未设置对照等可能是结果出现较大误差的原因。为了检出伴随的弱抗体，本研究在经典聚凝胺法基础上，在加入多聚阳离子聚合物和重悬液之前，分别在37 ℃孵育1 min，为IgG 抗体提供最适反应温度，提高了抗原抗体的结合效率，即为增强聚凝胺法，使弱阳性结果更易被肉眼观察到，同时使用抗筛阴性的AB型血清和试剂O 细胞作为阴性对照，降低了弱阳性结果漏检的风险。刘曦等[10]在聚凝胺实验中增加弱阳性对照，在提高结果可靠性的同时使聚凝胺结果能够与抗人球蛋白法、微柱凝胶法等进行比对。但大部分血清学实验室难以常规使用弱阳性对照，因此以AB型血清作为阴性对照不失为一个好的替代方法。

有研究对多次输血患者进行抗体筛查，发现其阳性率显著高于对照组[12]。本研究数据也显示，产生Rh 系统抗体患者中有多次输血史或妊娠史者超过一半，由于部分病例的临床资料不全，实际比例可能更高。在抗体特异性中，同种抗-E 占61.54%，其中同时伴有抗-c 抗体者占45.83%。我国E 和c 抗原频率分别为50.93%和57.94%[13]，在C、c、E 和e 抗原非同型输注的条件下，E 和(或)c 阴性患者极易接受到阳性红细胞，从而产生同种免疫[14]。

本研究结果显示，产生Rh 系统同种抗体患者直抗多为阴性或弱阳性，间接抗人球蛋白实验也多为弱阳性，因此在交叉配血实验中，如仅使用聚凝胺法且操作手法不当，极易漏检同种抗体，导致溶血性输血反应的发生。王文婷等[15]发现单一采用卡式微柱凝胶配血方法可造成具有临床意义抗体的漏检，本结果也显示仅用凝胶卡法检测复合抗体，有62.50%标本存在漏检。此外，凝胶卡法无法确定格局的抗体，增强聚凝胺法或可检出。

综上所述，对有输血史或妊娠史(尤其是多次免疫史)患者，可在常规凝胶卡抗体筛查或交叉配血的基础上加用增强聚凝胺法检测Rh 系统抗体，以减少弱抗体的漏检，加入阴性或弱阳性对照可提高结果的可靠性。