四氯四碘荧光素作显色剂测定盐酸依托必利

2021-05-14庞向东刘晓红谢雨娟孙彩瑕李小眉刘贵秀

分析科学学报 2021年2期

庞向东, 刘晓红, 谢雨娟, 孙彩瑕, 李小眉, 刘贵秀, 江虹

(长江师范学院化学化工学院，重庆 408100)

盐酸伊托必利是一种较新型胃肠促动力药物，临床上广泛用于治疗由慢性胃炎引起的上腹不适，餐后饱胀、食欲不振、恶心、呕吐等。该药若长期使用或过量使用，将使人体白细胞减少或血小板减少，从而引发严重的并发症。鉴于此，对成药中盐酸伊托必利含量进行研究，有效控制患者的用药质量显得非常重要和必要。目前，国内外对其检测方法研究较多的是高效液相色谱法[1 - 5]，也有一些荧光法[6,7]、电化学法[8,9]、液-质联用法[10,11]及分光光度法[12,13]等的报道。本工作以四氯四碘荧光素作为显色剂，采用吸收光谱法对盐酸伊托必利进行研究，实验发现该体系在可见光区域内有2个特征吸收峰，其吸光度与盐酸伊托必利的浓度服从朗伯-比尔定律，并有较高灵敏度和较宽的线性范围，可用于药物中盐酸伊托必利的测定。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

U-3010型紫外-可见分光光度计，日本日立公司生产。

盐酸伊托必利标准品(Itopride Hydrochloride，ITO)(99.9%，No：100939-200701，中国食品药品检定研究院)，四氯四碘荧光素(TCTF)(97%，南京康满林化工实业有限公司)，三羟甲基氨基甲烷(Tris)(分析纯，齐一生物科技有限公司)，HCl(分析纯，重庆华东化工有限公司)。超纯水(成都优普超纯水仪制)。

样品：市售2种批号的辽宁新高制药有限公司生产的盐酸伊托必利片(1#和2#)。

1.2 溶液的配制

ITO标准溶液：贮备液浓度为394.9 mg/L(准确称取适量经105 ℃干燥2 h的ITO标准物质，用水溶解并定容至容量瓶中)，操作液浓度为39.49 mg/L(取适量贮备液稀释10倍)，均保存于4 ℃冰箱中。TCTF溶液：1.00 mmol/L(准确称取适量TCTF，用水溶解、定容)。Tris溶液：200 mmol/L(称取适量Tris，用水溶解配成所需浓度)。HCl：100 mmol/L(取适量浓HCl，用水稀释配成所需浓度)。Tris-HCl溶液：pH=3.0～9.8(用pH计测定Tris和HCl的混合液)。

1.3 样液的制备

取1#和2#ITO片各5片(去包衣)，分别加水溶解，搅拌，超声15 min后过滤，滤液定容至2 000 mL容量瓶中。均置于4 ℃冰箱中。取该液稀释10倍，待测。

1.4 吸光度的测定方法

准确移取不大于1.80 mL的39.49 mg/L ITO标准溶液于10 mL比色管中，加1.50 mL 1.00 mmol/L TCTF及2.00 mL pH=8.88 Tris-HCl溶液，用水定容并摇匀，室温下放置15 min后，于紫外-可见分光光度计上扫描吸收光谱(以试剂空白作参比)，在486 nm和554 nm处测定溶液的吸光度A486、A554和A486+554。

2 结果与讨论

2.1 条件的选择

2.1.1 反应酸度及用量考察了Tris-HCl作反应介质时不同酸度对486 nm和554 nm波长处体系吸光度的影响。从图1可知，反应的最佳酸度为pH=8.88，其它pH条件下，灵敏度均有下降。从图2可知，2.00 mL是pH=8.88 Tris-HCl的最佳用量，其它用量下，体系灵敏度均有下降。故后续实验选择在最佳酸度及用量的条件下进行。从图可知，采用二波长叠加测定，有相对最大的灵敏度。

图1 Tris-HCl溶液pH对吸光度的影响Fig.1 Effect of Tris-HCl solution pH on absorbance

图2 Tris-HCl溶液用量对吸光度的影响Fig.2 Effect of Tris-HCl solution amount on absorbance

图3 四氯四碘荧光素溶液浓度对吸光度的影响Fig.3 Effect of tetrachlorotetraiodofluorescein concentration on absorbance

图4 吸收光谱Fig.4 Absorption spectra1:3.95 mg/L ITO,against water;2:0.0150 mmol/L TCTF,pH=8.88,against water;3-7:0.790,2.37,3.95,5.53,7.11 mg/L ITO-0.150 mmol/L TCTF,pH=8.88,against reagent blank.

2.1.2 TCTF浓度考察了0.0500～0.400 mmol/L范围内的TCTF对486 nm和554 nm处体系吸光度的影响。从图3可知，TCTF的最佳反应浓度是0.15 mmol/L，其余浓度下吸光度均有下降，故后续实验选用在TCTF的最佳浓度下进行，即取1.00 mmol/L TCTF溶液1.50 mL进行实验。相同条件下，用双波长叠加测定有相对最大的灵敏度。

2.1.3 物质加入顺序按吸光度测定方法，考察了ITO、TCTF及Tris-HCl在不同加入顺序时，486 nm和554 nm处体系吸光度的大小。结果表明，不同加入顺序对体系的吸光度基本不影响。

2.1.4 反应时间及稳定性固定上述最佳条件不变，考察ITO与TCTF反应时间在5～120 min内对新物质吸光度的影响。实验表明，反应在15 min内可以完全，稳定时间约1 h。后续实验选在15 min后进行。

2.2 吸收光谱

ITO与TCTF的特征吸收光谱见图4。可知，ITO本身几乎无吸收信号，TCTF溶液(pH=8.88)在526 nm处的吸收信号较强。从3～7的谱线可知，ITO与TCTF生成的新物质在可见光区内产生了2个具有特征吸收峰的新吸收光谱，特征峰分别位于486 nm(蓝移40 nm)和554 nm(红移28 nm)，波移现象表明，TCTF与ITO可以发生显色反应生成新物质。新物质的吸光度与0.08～7.10 mg/L范围内的ITO浓度服从朗伯-比尔定律，并有好的线性关系。故可选择486 nm和554 nm或它们的叠加作为测定波长，定量检测ITO。