荧光探针测定苦参素胶囊中丙酮残留

2021-05-14李亚波张爱菊张小林

分析科学学报 2021年2期

董娜，万启，李亚波，张爱菊，张小林

(甘肃医学院药学系，甘肃平凉 744000)

药品中有机溶剂残留是指药物制剂在生产过程中所使用过的，但又未能完全除去的挥发性有机化合物，行业协会将他们分为四类，丙酮归为第3 类属低毒溶剂，在2015年版《中国药典》中规定丙酮残留不得超过0.5%[1]。目前，丙酮测定多采用顶空气相色谱法[2 - 6]。苦参素具有环酮结构(图1)，性质相对稳定，苦参素胶囊在生产过程中涉及到包括丙酮、乙醇在内的多种有机溶剂，为了有效控制产品质量和保证用药安全,邹义栩[7]等采用顶空气相色谱法同时对该药物中丙酮、乙醇2种残留溶剂进行检测，丙酮的最低检测浓度达到6.38×10-7mol/L，可用于实际样品分析。但到目前为止，荧光法测定丙酮报道较少。

图1 苦参素结构式Fig.1 Structure formula of matrine

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

930N荧光分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)。

苦参素胶囊(正大天晴药业集团股份有限公司，批号：20010763，规格：0.1克/粒)。取苦参素胶囊10粒，准确称量，用水定容至10 mL，该溶液作为供试液。

1.2 实验方法

取2.0 mL碘液于25 mL容量瓶中，加1.0 mL 1 mol/L NaOH溶液，1.50 mL供试液，轻微振荡，静置反应3 min后，加入1.0 mL 1 mol/L HCl，2.0 mL 0.10 mmol/L RhB溶液，5.0 mL HAc-NaAc缓冲溶液，蒸馏水定容，静置5 min后，以365 nm为激发波长，测定发射波长580 nm处1.0×10-3mmol/L RhB荧光强度(F)，同时测定丙酮空白荧光强度(F0)，计算ΔF(ΔF=F-F0)。

2 结果与讨论

2.1 荧光光谱

图2 不同体系的荧光光谱Fig.2 Fluorescence spectra in different system

2.2 罗丹明B用量优化

在pH=4.5环境下考察不同体积0.10 mmol/L RhB溶液的荧光特性(图3)。结果表明，在0～4.0 mL范围内RhB荧光强度与RhB加入体积有线性关系，当RhB浓度大于等于8.0×10-6mol/L时(即体积大于等于2.0 mL)，自猝灭作用增强，线性关系变差。故0.10 mmol/L RhB取量为2.0 mL。

2.3 碘液用量

图3 罗丹明B浓度对荧光强度的影响Fig 3 Effect of the concentration of Rhodamine B on fluorescence intensity

图4 碘液浓度对荧光强度的影响Fig.4 Effect of the concentration of iodine on fluorescence intensity

2.4 NaOH用量

2.5 pH影响

2.6 反应时间的优化

图5 溶液pH对荧光强度的影响Fig.5 Effect of solution pH on fluorescence intensity

图6 动力学曲线(a.荧光恢复；b.荧光猝灭)Fig.6 Kinetic curve(a.fluorescence recovery；b.fluorescence quenching)

2.7 试剂加入顺序的优化

2.8 工作曲线

2.9 干扰试验

苦参素胶囊中丙酮和乙醇残留同时存在，二者均可发生碘仿反应，因此实验重点考察了丙酮和乙醇共存时乙醇的干扰情况。选择丙酮浓度为8 μmol/L，乙醇浓度为80 μmol/L(浓度设定比为1∶10)，按照实验方法测定两种物质与碘混合后不同反应时间段荧光强度(图8)。结果表明，丙酮碘仿反应较快，3 min后荧光强度趋于恒定；乙醇在5 min后荧光强度开始增大，显然在样品加入3 min时加HCl终止碘仿反应，10倍乙醇不干扰丙酮测定。乙醇反应分两步完成，先氧化生成乙醛，其后是乙醛碘仿反应，反应速率有差异。实验同时考察了Al3+、Cl-、Na+、Mg2+、K+和Zn2+等离子干扰情况，测量误差控制在±5%以内，100倍的上述离子均不干扰测定。

图7 丙酮工作曲线Fig.7 Working curve of acetone

图8 乙醇干扰性考察Fig.8 Study on the interference of ethanol

2.10 样品分析

取3批样品适量，按“1.2”方法完成供试品溶液制备及丙酮残留测定，并进行加标回收实验，结果见表1。结果显示，药样中均有丙酮检出，继而求得原药中的丙酮质量分数为0.0019%、0.0021%和0.0018%，但测定值均未超过0.5%的最高限量规定；加标回收率在96.5%～105.0%范围内，相对标准偏差(RSD)≤2.5%。说明方法准确度和精密度良好。