GATA-3和EGFR在乳腺癌中表达的相关性及其与分子亚型、临床病理资料的关系

李星枝，王舰梅，肖秀丽，苏亭，叶入裴，龙汉安

(西南医科大学附属医院病理科，四川 泸州 646000)

2018年全球癌症统计报告[1]显示，目前乳腺癌的发病率和死亡率均居女性癌症发病和死亡的首位，且其发病率呈上升趋势。GATA-3属于锌指结构转录因子GATA家族，参与人体多种组织的形态发生和分化，与膀胱癌、涎腺癌的发展相关[2]。在乳腺组织中，GATA-3不仅参与调节导管的发生和腺泡的分化，而且对乳腺腔上皮细胞的分化至关重要，有研究[3]表明，在正常乳腺腔上皮细胞及乳腺癌中GATA-3都表现出与雌激素受体(ER)高度相关。研究[4]表明，表皮生长因子受体(EGFR)在调节细胞功能的信号转导途径中起着重要作用，其中包括肿瘤细胞的增殖、分化及合成代谢的调节。EGFR靶向治疗已被应用在肺癌和大肠癌的治疗标准中，有许多研究长期致力于EGFR是否能作为乳腺癌的有效治疗靶标，但目前仍未达到理想结果。尽管有较多研究评价GATA3和EGFR在乳腺癌中的表达情况，但GATA3和EGFR在乳腺癌中的相关性尚不明确，同时两者与乳腺癌形态特征、分子亚型的研究仍较少。本研究主要通过免疫组化检测GATA-3和EGFR在乳腺癌中的表达情况，分析两者在乳腺癌中表达的相关性，并探讨其与分子亚型、临床病理资料之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集西南医科大学附属医院病理科2017年1月至2018年12月浸润性乳腺癌石蜡标本215例，所有标本均经两位高年资病理诊断医师盲法确诊。215例患者均为女性，年龄26～84岁，中位年龄为51岁。其中肿瘤直径≤2 cm者65例，>2 cm者150例；有淋巴结转移者112例，无淋巴结转移者103例；非特殊型浸润性癌202例，特殊型浸润性癌13例。所有患者术前均未行放、化疗、激素及中药等治疗。从病理科档案室提取蜡块对应的HE染色、GATA-3、EGFR、ER、PR及HER-2、Ki-67和P53免疫组化切片。根据2019年版中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范[5]分子亚型标准进行分型，215例标本中Luminal A型46例(21.4%)、Luminal B型103例(47.9%)、HER-2过表达型49例(22.8%)、三阴性17例(7.9%)。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化检测 所有标本均经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续4 μm切片，采用EnVision两步法对每例标本进行GATA-3、EGFR、ER、PR及HER-2、Ki-67和P53的免疫组化检测。用已知阳性的乳腺癌组织切片为阳性对照，磷酸盐缓冲液(PBS)代替第一抗为阴性对照。所用抗体GATA-3、EGFR、ER、PR、HER-2、Ki-67及P53均购自福州迈新公司。

1.2.2 结果判读 GATA-3阳性标准为任何数量的肿瘤细胞核着色，EGFR阳性标准为任何数量的肿瘤细胞胞膜着色[6](图1)。ER和PR阳性判读标准为阳性部位定位于核且着色细胞≥1%[7]。HER-2的免疫组化染色评价采用0～+++评分系统[8]，染色强度+++者为阳性，其中染色强度++者需进一步进行FISH检测明确是否有HER-2基因的扩增。Ki-67的判读以肿瘤中≥14%的肿瘤细胞核着色为高表达水平，P53阳性标准为任何数量的肿瘤细胞核着色[9]。

1.3 统计学分析

采用SPSS 17.0软件对数据进行分析与处理。GATA-3与EGFR在乳腺癌中表达的相关性采用Spearman相关分析法；计数资料以[n(%)]表示，GATA-3与EGFR在不同分子亚型及临床病理资料间的表达差异比较采用χ2检验、连续性校正χ2检验或Fisher精确检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 GATA-3与EGFR在乳腺癌中的表达相关性

在215例浸润性乳腺癌中，GATA-3与EGFR的表达呈负相关(r=-0.215，P=0.002)。见表1。

表1 GATA-3与EGFR在乳腺癌中表达的相关性分析[n(%)]

2.2 GATA-3、EGFR的表达与乳腺癌分子亚型之间的关系

在215例浸润性乳腺癌组织中GATA-3的阳性率为96.2%(207/215)，EGFR的阳性率为45.6%(98/215)。不同分子亚型中GATA-3、EGFR的表达差异有统计学意义(P<0.05)，且GATA-3在Luminal A型中的阳性率最高，在三阴性乳腺癌中阳性率最低(P<0.05)，EGFR在HER-2过表达型中阳性率最高，在Luminal A型中阳性率最低(P<0.05)。见表2、图1。

表2 GATA-3、EGFR在乳腺癌的表达及与分子亚型的关系[n(%)]

2.3 GATA-3、EGFR的表达与乳腺癌临床病理资料之间的关系

GATA-3的表达与ER、PR表达相关，ER、PR阳性者GATA-3阳性率高于ER、PR阴性者，差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR的表达与ER、PR、HER-2表达相关，ER、PR阳性者EGFR阳性率低于ER、PR阴性者，差异有统计学意义(P<0.05)；HER-2阳性者EGFR阳性率高于HER-2阴性者，且EGFR的表达与WHO分级、Ki-67表达高低相关，差异有统计学意义(P<0.05)。GATA-3、EGFR的表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、有无脉管或神经侵犯、病理类型和P53表达无明显相关性，GATA-3的表达与非特殊型浸润性癌WHO分级、HER-2、Ki-67表达无明显相关性(P>0.05)。见表3。

3 讨论

2015年St．Gallen国际乳腺癌会议明确提出，根据分子亚型的不同对患者进行分类治疗是目前乳腺癌的基本治疗原则，根据个体化对患者行辅助化疗和或内分泌治疗能够降低肿瘤复发率、提高总生存率[5，10]。而乳腺癌是一种异质性肿瘤，不同分子亚型之间患者的临床表现、治疗反应和预后都存在着显著差异[5，10-11]。

锌指结构GATA家族一共包括GATA-1至GATA-6六个转录因子，在人体多种组织中均有表达，其中GATA-3参与调节T细胞、交感神经系统、肾脏、乳腺等器官的发育，更有研究[12-13]表明，GATA-3的无效突变对胚胎具有致死性，因此其被认为是胚胎发育过程中的重要影响因素。目前研究[14]表明，GATA-3的突变与乳腺癌的发生有关，具有肿瘤抑制作用。大多数原发性和转移性乳腺癌均阳性表达GATA-3(80～90%)，但在三阴性乳腺癌中其表达率较低(67%)[15]。本研究GATA-3在乳腺癌中的阳性率为96.2%，接近Miettinenet等[16]的报道。另外，GATA-3可能是促进ER对激素反应的独立转录因子，它与ER的表达高度相关，但并不属于ER信号通路的一部分[2-3]。本研究结果显示，GATA-3在乳腺癌中的表达与EGFR呈负相关性(r=-0.215，P=0.002)，这与Cakir等[17]报道结果一致。本研究结果还显示，GATA-3的表达与ER、PR表达均相关，且ER、PR阳性者GATA-3阳性率(100%、99.2%)高于ER、PR阴性者(89.6%、90.5%)，与Fang等[3]的报道结果接近，提示GATA-3与ER之间的高度相关性使其有很大可能性成为临床对激素治疗反应的预测指标。

研究[18]表明，在很多乳腺癌亚型中发现有EGFR的过表达，其中三阴性乳腺癌和炎症性乳腺癌中约半数病例都过表达EGFR。在本研究中，EGFR在乳腺癌组织中的阳性率为45.6%，且与ER、PR、HER-2表达相关，ER、PR阳性者EGFR阳性率(27.5%、31.2%)低于ER、PR阴性者(77.9%、72.9%)，HER-2阳性者EGFR阳性率(65.6%)高于HER-2阴性者(37.7%)。有基因表达谱分析和免疫组化研究[18-19]表明，在三阴性乳腺癌中EGFR的表达率为50%～70%，而且其低表达水平与转移率低相关。近70%的浸润性乳腺癌发生了骨转移，而转移的病例中大多数是ER阳性的肿瘤，这也提示EGFR和ER可能在乳腺癌骨转移中发挥了作用。在三阴性乳腺癌和炎性乳腺癌中EGFR通过与凋亡信号之间的连接能够增强肿瘤细胞对化学药物的敏感性，因而EGFR有很大可能性成为化学药物的增敏剂应用于乳腺癌中，同时对防止肿瘤的转移可能有价值。

此外，本实验结果发现GATA-3和EGFR在乳腺癌四种分子亚型中的表达均有差异(P<0.001)。GATA-3在Luminal A和Luminal B型中均高表达，在三阴性乳腺癌中表达率最低；EGFR在HER-2过表达型中阳性率最高，在Luminal A型中阳性率最低。在Tang等[14]的研究中，GATA-3的表达与Luminal型乳腺癌相关，本研究结果一致。同时，GATA-3的表达与ER、PR高度相关，这也可能是GATA-3在Luminal型乳腺癌中高表达的原因。在四种分子亚型中，Luminal A型预后较其他亚型更好[20]，因此GATA-3也有望成为乳腺癌的预后指标之一。在Cakir等[17]的研究中，GATA3阳性者约85.6%都为非特殊型浸润性乳腺癌，其中GATA3阳性的乳腺癌通常分化较良好，较小可能性发生远处转移。在本研究中，EGFR的表达与WHO分级、Ki-67表达高低相关(P<0.05)，但并未发现GATA-3、EGFR的表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、有无脉管或神经侵犯、病理类型和P53的表达具有明显相关性(P>0.05)，这可能与本实验中的样本数量较少以及地域之间的差异相关，因此仍需继续增加样本量、综合多项因素分析以进一步探讨其差异。

综上，GATA-3和EGFR在乳腺癌中存在负相关性，且两者在乳腺癌不同分子亚型之间的表达存在明显差异，但具体机制还有待进一步研究。GATA-3的表达与ER、PR表达相关，EGFR的表达与ER、PR、HER-2、WHO分级、Ki-67表达高低相关，因此在乳腺癌的病理诊断中，除了必要的ER、PR及HER-2的检测，联合免疫组化检测GATA-3、EGFR也非常有意义，对于乳腺癌的分子分型和预测个体激素治疗反应有一定参考价值，亦有希望为乳腺癌患者的个体化治疗和预后评估提供更多的依据，以及寻求更多的治疗思路和方法。