MDSC、Th2、FoxP3+Treg及炎症因子与HR-HPV感染宫颈病变的关系研究

梁秀兰，谢梦珍，邱红兵，李 明

1.邢台市人民医院妇科，河北邢台 054000；2.河北省内丘县人民医院妇产科，河北邢台 100191

宫颈癌是临床较为常见的女性生殖道肿瘤疾病之一，流行病学调查显示，我国的宫颈癌发病率为98.0/10万，死亡率高达30.5/10万[1-2]。研究认为，宫颈癌的发病与人乳头瘤病毒(HPV)显著相关，在病毒对机体的不断侵染阶段，HPV病毒的感染可能会造成机体免疫微环境及炎性反应的改变，间接促进肿瘤细胞的增殖、进展[3]。在病毒对机体侵染的早期，机体可通过与病毒的免疫抑制性作用消除病毒，少数患者由于病毒的持续性增殖，可能会造成宫颈上皮细胞的癌变[4]。叉头状转录因子-3(Foxp3)主要在机体的调节性T细胞(Treg)中进行增殖，对机体的免疫状态至关重要[5]。辅助性T细胞2(Th2)在肿瘤细胞与机体免疫水平的分析中发挥重要作用[6]。髓系来源抑制性细胞(MDSC)对肿瘤细胞的逃逸具有重要意义[7]。炎症因子水平的变化在疾病的进展中也发挥重要作用。目前，对于Th2、MDSC、FoxP3+Treg细胞和炎症因子在宫颈病变中的作用尚不明确，尤其是上述指标在宫颈癌前病变到宫颈癌发病阶段的变化亟待研究。本研究通过对MDSC、Th2和FoxP3+Treg细胞及炎症因子与高危性HPV(HR-HPV)感染患者宫颈病变的关系分析，以期为临床治疗提供科学依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择邢台市人民医院2017年1月至2019年12月收治的180例宫颈病变患者作为研究对象，平均年龄(42.15±2.03)岁，平均病程为(3.26±1.36)年，平均体质量指数(24.56±2.33)kg/m2，平均孕次(2.59±1.12)次，平均产次(1.27±0.60)次。其中宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ组)患者39例，宫颈上皮内瘤变Ⅱ级(CINⅡ组)患者31例，宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CINⅢ组)患者35例，宫颈癌(UCC组)患者37例，宫颈炎(CC组)患者38例，5组患者的年龄、体质量指数及病程之间差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。所有患者均签署知情同意书，并经医院伦理委员会论证通过。患者纳入标准：(1)所有患者均符合宫颈病变诊断标准[8]；(2)所有患者均为HP-HPV感染患者。排除标准：(1)妊娠者；(2)严重感染患者；(3)内分泌异常患者；(4)肝肾功能异常患者；(5)结缔组织疾病患者。

1.2研究方法 所有患者入组后及时采肘静脉血4 mL，采用流式细胞仪(FACS CANTO Ⅱ)对患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg细胞水平进行检测。将患者的血样100 μL使用RPMI-1640培养液100 μL进行稀释，随后将其加入96孔平板中，使用丙二醇甲醚醋酸酯工作液、离子霉素工作液、莫能霉素工作液进行混合，轻轻混合后，在含有5%的二氧化碳培养箱中培养5 h，弃去上清液，再次向上述液体中加入CD4-FITC 单克隆抗体10 μL。在避光状态下保存15 min，使用磷酸盐缓冲液(PBS)进行清洗，使用破膜剂，避光状态下保存15 min，再使用PBS进行清洗。使用流式细胞仪检测MDSC、Th2和FoxP3+Treg细胞水平。

表1 5组患者的基线资料比较

1.3观察指标 (1)分别对CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、UCC组、CC组患者的Th2、MDSC、FoxP3+Treg细胞水平进行比较。(2)分别对患者的白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(INF-γ)水平进行比较。炎症因子水平检测主要采取酶联免疫吸附试验法，实验试剂来自罗氏诊断产品(上海)有限公司，实验操作流程严格按照说明书进行。

2 结 果

2.15组患者MDSC、Th2和FoxP3+Treg细胞水平比较 5组患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg细胞水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。进一步两两比较结果显示，患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg细胞水平从高到低依次为UCC组、CINⅢ组、CINⅡ组、CINⅠ组、CC组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.25组患者的炎症因子水平比较 5组患者的IL-2、IL-10、IL-17A、TNF-α水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)，IL-4、IL-6、INF-γ水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。进一步两两比较结果显示，IL-10、IL-17A、TNF-α水平从高到低依次为UCC组、CINⅢ组、CINⅡ组、CINⅠ组、CC组，差异有统计学意义(P<0.05)；IL-2从高到低依次为CINⅠ组、CC组、CINⅡ组、UCC组、CINⅢ组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表2 5组患者的MDSC、Th2和FoxP3+Treg细胞水平比较

表3 5组患者的炎症因子水平比较

2.3MDSC、Th2和FoxP3+Treg细胞及炎症因子对宫颈病变程度的影响因素分析 以病变程度为因变量，上述有统计学意义的免疫细胞水平和炎症因子为自变量，Logistic回归分析结果显示，Th2细胞、MDSC细胞、FoxP3+Treg细胞、IL-10、IL-17A、TNF-α、IL-2是影响宫颈恶性病变程度的危险因素(P<0.05)，见表4。

表4 Th2、MDSC、FoxP3+Treg细胞水平及炎症因子对病程的影响分析

3 讨 论

随着经济社会的不断发展，人们生活习惯及饮食习惯不断发生变化[9]，宫颈癌的发生率呈逐年上升的趋势。流行病学调查显示，宫颈癌有年轻化的趋势[10]。有研究报道显示，HPV感染在已婚妇女中较为常见，同时HR-HPV感染已经成为宫颈癌患者发病的重要诱因。在对机体的感染过程中，90%的HPV病毒可被正常的免疫系统清除，但是该病毒也存在一定的免疫逃避机制[11]。

在病毒感染机体的早期，FoxP3+Treg细胞在机体的免疫调节及免疫逃避机制中发挥重要作用。研究显示，FoxP3+Treg细胞所产生的FoxP3蛋白广泛存在于生物中，在FoxP3+Treg细胞的新陈代谢过程中发挥重要作用，也是调节性T细胞的重要标志物[12]。以往的研究显示,在乳腺癌、膀胱癌、肝癌、肺癌患者的研究中，FoxP3蛋白水平呈明显上升趋势，机体FoxP3+Treg细胞可作为患者重要的预后监测指标之一，FoxP3+Treg细胞明显升高，提示病毒对于机体免疫系统的逃逸风险显著升高，对肿瘤的进展具有积极意义。本研究对不同病变程度的宫颈病变患者的研究结果显示，随着患者宫颈恶性程度的不断升高，其FoxP3+Treg细胞水平呈显著上升趋势。吴帆等[13]对FoxP3+Treg细胞水平与宫颈病变的相关性分析结果指出，FoxP3+Treg细胞水平与患者的病变程度呈正相关，与本研究结果一致。

在HPV对机体持续感染过程中，机体局部病灶部位出现显著的炎性反应，而在炎性反应过程中，人体的免疫系统对于肿瘤的发生、发展具有重要意义。已有研究报道显示，Th细胞在机体的免疫功能中具有重要的调节作用，Th2细胞主要通过对IL-4、IL-10炎症因子的调控作用促进细胞的癌变[14]。同时，随着Th2细胞水平的明显升高，势必会造成Th1细胞水平的显著性下降，Th1/Th2失衡，Th1细胞对于抗肿瘤效应介导作用显著下降，进一步促进患者的肿瘤进展。在本研究中，随着患者的病灶部位恶性程度的不断升高，Th2细胞呈明显上升的趋势。齐涵沁等[15]通过对宫颈癌病变程度与Th2细胞水平的分析显示，随着Th2细胞的上升，患者的宫颈恶变程度呈明显上升趋势。

MDSC是具有抑制性免疫作用的免疫细胞，在免疫逃逸、炎症、感染中发挥重要作用。在恶变程度较高的肿瘤患者中，其细胞水平呈明显上升趋势，通过多种炎症因子的相互作用，促进机体免疫系统对肿瘤细胞的逃逸作用。余花艳等[16]通过对不同病变患者MDSC细胞水平的分析显示，患者的MDSC细胞与肿瘤病变程度明显相关。

以往的研究显示，IL-2主要通过对机体局部炎性反应水平的升高，进而影响病灶部位的肿瘤进展[17]，与本文结果不一致，分析原因为本研究样本量较小，故与以往研究差异较大。

综上所述，MDSC、Th2和FoxP3+Treg细胞均为HR-HPV感染患者宫颈病变的重要影响因素，通过MDSC、Th2和FoxP3+Treg细胞、炎症因子的分析，可能实现对早期宫颈恶性病变的预测。