组织中EphA2、GSK-3β水平在非小细胞肺癌患者中的表达分析

郜静（许昌市中心医院病理科，河南 许昌461000）

非小细胞肺癌（NSCLC）是一类起源于支气管腺体、支气管黏膜及肺泡上皮的恶性肿瘤，多数患者确诊时已发展至中晚期，肿瘤已发生转移，导致预后较差［1］。Eph受体酪氨酸激酶A2（EphA2）是一种广泛表达于上皮源性正常细胞和肿瘤细胞的跨膜蛋白，在多种细胞株中均可呈高活性和高表达，可参与肿瘤血管生成［2］。糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）是一种丝氨酸激酶，可作用于众多信号蛋白结构蛋白和转录因子，调节细胞的分化、增殖、凋亡等过程，与胶质瘤、卵巢癌等多种肿瘤增殖分化有一定关联［3］。相关研究还发现，EphA2、GSK-3β的表达与多种肿瘤干细胞的形成、发展密切相关，可能有助于临床评估NSCLC进展［4，5］。鉴于此，本研究探讨组织中EphA2、GSK-3β在NSCLC患者中的表达及临床意义。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2018年4月～2020年6月于我院接受治疗的94例NSCLC患者，其中男50例，女44例；年龄48～72（60.28±4.61）岁；有吸烟史52例，无吸烟史42例。所有患者及其家属均已签署知情同意书。本研究经医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：（1）经手术病理检查确诊为NSCLC；（2）无肝肾疾病；（3）无肺结核等传染性疾病。排除标准：（1）术前接受放疗、化疗；（2）合并其他恶性肿瘤。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 采用免疫组化SP法：使用10%多聚甲醛固定标本组织，常规脱水、透明、包埋处理后，以厚4μm连续切片石蜡包埋组织，常规脱蜡，将切片浸于50mmol/L（PH8.0）的乙二胺四乙酸溶液中，采用微波抗原修复10min后冷却至室温，进行充分水洗后，使用磷酸盐缓冲液（PBS）浸洗，随后滴入正常山羊血清封闭液，放置在室温下20min，加入EphA2单克隆抗体及GSK-3β抗体，于4℃冰箱中过夜，PBS浸洗，加二抗试剂，放置在37℃环境中40min，使用PBS显色30s，苏木素复染，乙醇脱水、透明、中性树胶封固，镜下观测切片情况。

1.2.2 结果判定 检测结果由我院两名经验丰富的检验科医师独立判断，再经综合判断得出一致结果。EphA2阳性表达：细胞膜或细胞质中出现棕色或棕黄色颗粒；GSK-3β阳性表达：细胞质中出现黄色颗粒。

1.2.3 临床资料统计 统计患者临床资料，包括性别、年龄（＞60岁、≤60岁）、吸烟史（有、无）、淋巴结转移（有、无）、分化程度（中低分化、高分化）、TNM分期（Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ/Ⅳ期）。

1.3 统计学处理 数据采用SPSS 24.0统计学软件进行处理。计量资料采用±s表示，行t检验；计数资料采用例（百分率）表示，行χ2检验。P＜0.05示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EphA2、GSK-3β阳性率分析94例NSCLC患者中，EphA2阳性率为73.40%，GSK-3β阳性率为46.81%。

2.2 EphA2、GSK-3β表达与患者基线资料的关系分析 经单因素分析显示，EphA2、GSK-3β表达与患者年龄、性别、吸烟史无相关性（P＞0.05）。见表1。

2.3 EphA2、GSK-3β表达与病理特征的关系分析经单因素分析显示，EphA2阳性表达可能与NSCLC淋巴结转移、中低分化、Ⅲ/Ⅳ期有关，GSK-3β阳性表达可能与NSCLC未发生淋巴结转移、高分化、Ⅰ/Ⅱ期有相关性（P＜0.05）。见表2。

表1 EphA2、GSK-3β表达与患者基线资料的关系分析［n(%)］

3 讨论

表2 EphA2、GSK-3β表达与病理特征的关系分析［n(%)］

NSCLC发病率及致死率均较高，近年来，肺癌的治疗靶点、早期诊断标志物、预后标志物等逐渐引起临床重视，相关研究指出，肿瘤血管生成、肿瘤干细胞等在肿瘤形成和发展中具有重要作用，而EphA2、GSK-3β表达与肿瘤干细胞形成、发展具有密切关联，但目前关于二者在NSCLC中的表达情况报告较少［6，7］。

本研究结果显示，94例NSCLC患者中，EphA2阳性率为73.40%，GSK-3β阳性率为46.81%，提示NSCLC病理组织中EphA2阳性率较高，GSK-3β阳性率相对较低；经单因素分析显示，EphA2阳性表达可能与NSCLC淋巴结转移、中低分化、Ⅲ/Ⅳ期有相关性（P＜0.05），GSK-3β阳性表达可能与NSCLC未发生淋巴结转移、高分化、Ⅰ/Ⅱ期有相关性（P＜0.05），提示EphA2和GSK-3β阳性表达与NSCLC的发生和发展可能有关。分析原因在于，EphA2表达与微血管密度（MVD）呈正相关，而MVD是血管生成的重要指标，EphA2可促进肿瘤血管内皮细胞迁移，通过影响细胞骨架、细胞黏附促进肿瘤毛细血管样结构形成，而血管生成既是肿瘤生长和转移的形态学基础，也是肿瘤发展、转移的重要过程［8］。同时，EphA2是一种广泛表达于上皮源性正常细胞和肿瘤细胞的跨膜蛋白，在多种细胞株中均可呈高活性和高表达，可通过细胞信号传导诱发肿瘤，促使肿瘤侵袭转移，呈恶性表型发展。GSK-3β在机体细胞增殖、细胞周期的连续性等多种生理过程中均可发挥重要作用，被认为是肿瘤潜在负调控因子，尤其在Wnt/β-catenin信号通路中调控作用显著，而被异常激活的Wnt信号靶基因和细胞增殖活化异常、肿瘤形成等具有密切关联，细胞核中β-catenin被GSK-3β磷酸化后可抑制这一过程［9,10］。

综上所述，NSCLC患者组织中EphA2阳性率较高，GSK-3β阳性率相对较低，EphA2阳性表达升高可能促使NSCLC发生淋巴结转移、呈中低分化、进展至Ⅲ/Ⅳ期，有助于临床判断NSCLC高侵袭性，检测EphA2、GSK-3β表达有助于临床预测疾病预后。