凋亡刺激蛋白抑制因子、逮捕缺陷蛋白表达与鼻咽鳞状细胞癌病理分期及组织分型关系

许金中，王海玲，王真，张有利，李颖

鼻咽鳞状细胞癌是最常见的鼻咽部恶性肿瘤之一，发病率可达275～583/10万人左右，特别是在合并有病毒感染的人群中，鼻咽鳞状细胞癌的发生风险更高。凋亡刺激蛋白抑制因子（iASPP）作为细胞凋亡相关调控因子，能够抑制癌细胞的凋亡，降低癌细胞程序性坏死的风险；逮捕缺陷（ARD1）蛋白是重要的肿瘤相关蛋白，ARD1表达浓度的上升能够显著影响癌细胞的生物学特征，导致癌细胞的增殖或者浸润能力的提高。ARD1及iASPP在肿瘤的侵袭及转移等恶性生物学行为中具有重要的作用，ARD1或者iASPP的过表达能够促恶性肿瘤的临床进展，目前在鼻炎鳞状细胞癌中，iASPP或者ARD1的表达及其对鼻咽临床细胞的进展的影响目前上缺乏研究。为了深入探讨iASPP或者ARD1的表达与鼻咽鳞状细胞癌的关系，本次研究探讨了iASPP或者ARD1的表达及与鼻咽鳞状细胞癌病人临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取济源市第二人民医院2015年1月至2019年1月收集的鼻咽鳞状细胞癌组织标本80例（鼻咽鳞状细胞癌组）、并选取40例正常鼻咽部组织（对照组），正常组织样本对应的性别、年龄和鼻咽鳞状细胞癌组织标本大体相近。纳入标准：（1）鼻咽鳞状细胞癌的诊断标准参考2014年版NCCN临床实践指南《头颈部肿瘤》中的标准，经病理学检查结果证实；（2）鼻咽鳞状细胞癌病人获取癌组织标本前无放化疗、免疫治疗史；（3）研究对象的基础资料完整；（4）签署了知情同意书；排除标准：（1）病理学资料缺失；（2）合并头颈部或其他器官、系统肿瘤；（3）类风湿性关节炎、自身免疫系统疾病等；（4）应用免疫抑制剂。

鼻咽鳞状细胞癌组，男62例、女18例，年龄（57.5±11.0）岁，年龄范围为43～76岁；病理分型：Ⅰ型6例、Ⅱ型8例、Ⅲ型66例；T分期：T1分期11例、T2分期15例、T3分期38例、T4分期16例；N分期：N0分期10例、N1分期14例、N2分期34例、N3分期22例；临床分期：Ⅰ期5例、Ⅱ期8例、Ⅲ期42例、Ⅳ期25例。对照组，男30例、女10例，年龄（55.2±13.2）岁，年龄范围为38～75岁。两组标本获取对象的性别构成及年龄构成均衡且具有可比性（P＞0.05）。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 免疫组化检测方法 病理组织石蜡包埋切片，梯度乙醇脱蜡至水化，3%过氧化氢室温条件下孵育20 min封闭过氧化氢酶，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，微波修复抗原，磷酸盐缓冲液稀释后的山羊血清封闭抗体5 min，倒去血清后不清洗，加入一抗（购自赛默飞世尔中国，浓度：1∶1 000）5 mL，37℃孵育2 h，或者放置4℃冰箱过夜孵育，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，加入生物素荧光标记的二抗（购自赛默飞世尔中国，浓度1∶2 000）3 mL，37℃孵育20～30 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP辣根酶标记链霉卵白素，37℃孵育20～30 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，增强型HRP-DAB底物显色试剂盒（PA110）显色，自来水冲洗，复染，封片。

1.3 免疫组化判断标准 免疫组化染色后结果评分方法：ARD1蛋白阳性着色定位于细胞质、iASPP蛋白阳性着色定位于细胞质及细胞核，阳性着色呈黄色、棕黄色、褐色表达，（1）根据着色强度：0分为无色、1分为淡黄色、2分为棕黄色、3分为褐色、黑色；（2）根据阳性细胞比例：阳性细胞数目所占比例≤10%（1分）、占比范围11%～50%（2分）、占比范围51%～75%（3分）、占比范围＞75%（4分），强度积分与阳性细胞占比积分之乘积＜3分为阴性、≥3分为阳性。

2 结果

2.1 两组ARD1、iASPP蛋白表达情况 鼻咽鳞状细胞癌组织中ARD1蛋白、iASPP蛋白阳性表达分别为56.25%、78.75%，对照组分别为10.00%、17.50%，前者均高于后者（P＜0.05）。见表1。

表1 两组标本中凋亡刺激蛋白抑制因子（iASPP）、逮捕缺陷（ARD1）蛋白表达比较/例（%）

2.2 ARD1蛋白、iASPP蛋白表达与鼻咽鳞状细胞癌的病理学特征的关系 T3和T4分期、N2和N3分期、Ⅲ期和Ⅳ期的鼻咽鳞状细胞癌组织中的ARD1蛋白、iASPP蛋白阳性率均分别的高于T1和T2分期、N1和N2分期、Ⅰ期和Ⅱ期病人，差异有统计学意义（P＜0.05）；本研究中，在不同病理学分型的鼻咽鳞状细胞癌组织中的ARD1蛋白、iASPP蛋白阳性率均差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2，表3。

3 讨论

鼻咽癌的发生是多因素作用的结果，上皮细胞的癌基因错配的发生、长期吸烟导致的黏膜损伤修复的异常、亚硝酸盐的摄入等，均能够促进鼻咽癌的发生。临床病理特征的评估，对鼻咽癌的病情的评估及治疗方案的设计具有极其重要的作用。现阶段临床上多数临床工作者采用影像学检查评估鼻咽癌的病情进展情况，但影像学检查的费用较高、检查耗时较长、检查的灵敏度较低。肿瘤蛋白或者肿瘤调控相关因子的改变，能够在恶性肿瘤的发生过程中发挥作用，因此对肿瘤相关的调控因子进行检测，可能对肿瘤的临床及以后评估发挥具有重要的意义。

表2 逮捕缺陷（ARD1）蛋白表达与鼻咽鳞状细胞癌的病理学特征的关系/例（%）

ARD1能够提高癌细胞内P53信号通路的激活，增加下游转录调控因子的激活，提高了癌细胞非对称性分裂的风险；iASPP蛋白对于癌细胞内的肿瘤凋亡启动基因的抑制作用，能够显著降低病理性或者生理性的上皮细胞的凋亡过程，提高癌细胞的G1/S期的比例，促进癌细胞快速跨越G0期。部分研究者揭示了iASPP蛋白的表达病人病情的关系，认为iASPP的表达阳性率的上升与鼻咽鳞状细胞癌的发生或者放疗结局密切相关，但对于ARD1蛋白的分析研究较少。

在本次研究中，免疫组化的分析结果提示，在鼻咽鳞状细胞癌病灶组织中iASPP或者ARD1的表达阳性率均明显的上升，高于正常鼻粘膜组织，差异较为明显，提示了iASPP或者ARD1均可能影响了鼻咽鳞状细胞癌病情进展过程。而其中的原理可能与下列方面的病理生理机制有关：（1）iASPP的表达阳性率的上升不仅能够导致上皮细胞凋亡过程的障碍，同时还能够诱导早期癌细胞的免疫逃逸过程，促进癌细胞的持续性增殖；（2）ARD1的表达阳性率的上升能够促进癌细胞内的肿瘤信号通路的激活，提高AKT或者MAPK/P53等通路的激活程度，促进了鼻粘膜上皮细胞的转录活性的提升。焦红叶等研究者也认为，在鼻咽鳞状细胞癌病灶组织中，iASPP的表达上调能够显著加剧癌细胞的异常分化，导致肿瘤细胞的浸润和远期复发转移。在淋巴结发生转移或者Ⅲ期和Ⅳ期的鼻咽鳞状细胞癌病人中，iASPP或者ARD1的表达阳性率均可显著的上升，这主要考虑与iASPP的表达影响到了鼻粘膜上皮细胞的细胞周期的调控、细胞凋亡比例等，提高了癌细胞对于锁骨下或者头颈部淋巴结的粘附能力等有关；而ARD1的上升能够影响癌细胞的浸润过程，导致癌细胞的形态异常、癌细胞的排列极性的紊乱，进而导致鼻咽鳞状细胞癌临床分期的恶化。

本次研究的创新性在于探讨了ARD1的表达与鼻咽鳞状细胞癌病人临床病理特征的关系。综上所述，在鼻咽鳞状细胞癌病人中iASPP或者ARD1的表达明显上升，而iASPP或者ARD1的表达能够显著促进鼻咽鳞状细胞癌临床病理特征的进展。

表3 凋亡刺激蛋白抑制因子（iASPP）蛋白表达与鼻咽鳞状细胞癌的病理学特征的关系/例（%）