急性心肌梗死后心力衰竭患者血清循环微小RNA-150的改变△

赵 婕，陶蜀杭，王路长，胡琼英

（1.成都市第二人民医院检验科，成都 610017；2.成都中医药大学附属医院检验科，成都 610072）

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是冠状动脉疾病（coronary artery disease，CAD）中最严重的疾病，是心血管疾病发病率和病死率的主要原因之一［1］。随着医疗卫生的发展，检测技术的更新，AMI的诊疗已快速发展，大大降低了其发病率。另一方面，虽然大部分AMI患者可成功脱离急性期，但随后逐渐发展成慢性缺血性心脏病，后者全球的患病人数逐年攀升，预后不佳，给家庭和社会带来巨大的负担［2］。因此，寻找一种与AMI后心力衰竭（heart failure，HF）发生、发展有关的生物标志物，成为AMI患者及时干预的迫切需要。

血清循环微小RNA（microRNA，miR）是各类细胞在血清中释放的稳定产物，被广泛应用于生命科学各个领域［3］。最近的研究发现血清循环miRs与人类疾病息息相关，成为各种疾病诊断和预后的生物标志［4］。血清循环miRs也被证实为心血管疾病潜在的生物标志物［5］，Xue等［6］分析了经皮冠状动脉介入治疗前后的AMI患者血浆循环miRs的变化，发现miR-26a-1，miR-146a和miR-199a-1在AMI患者血浆中显著增高，可成为AMI诊断的标志物。Yin等［7］分析了老年AMI患者、不稳定型心绞痛（unstable angina，UA）和健康老年人miR表达水平，其中miR-214在老年AMI患者血清中高表达，并可通过抑制miR-214靶基因（包括PU⁃MA、PTEN、Bax和caspase 7）的表达抑制心肌细胞凋亡。Zhang等［8］研究了AMI患者中miR-486和miR-150的表达情况，并评估了两者作为AMI的潜在生物标志物的诊断价值，受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析表明，两者对AMI（与健康对照相比）具有重要的诊断价值，ROC曲线下面积（area under the curve，AUC）为0.771，尤其是非ST段抬高型心肌梗死（non-ST-segment elevation myocardial infarction，NSTE⁃MI），AUC为0.845。

以上结果显示，已有少量研究miR-150与AMI诊断相关，但与AMI预后关系的研究少之又少，基于不同的种族和遗传背景，本研究旨在探索在本地区miR-150与AMI预后的相关性，并评价其预测价值，为AMI的早期干预提供一种新的生物标志物。

1 资料和方法

1.1 研究对象

回顾性收集和分析80例2017年1月至2018年12月来成都市第二人民医院就诊的新诊断的AMI患者的临床资料，AMI的确诊依据为AMI的第四个通用定义［9］。患者的临床资料包括：年龄、性别等基本信息；实验室检查和图像。本研究通过了本院伦理委员会批准，以书面通知征得所有参与者的同意。

1.2 筛选血清循环微小RNAs

检索文献，挖掘筛选出5个候选miR（miR-133a、miR-499、miR-150、miR-192和miR-34a）作为AMI后HF的潜在预测因子。小样本临床研究表明这些循环miRs的改变与AMI患者预后不良有关，如短期主要不良心血管事件（major adverse cardiovascular events，MACE）、左侧心室重构、左心室射血分数（left ventricular ejection fraction，LVEF）等，见图1。

图1 AMI后HF的潜在预测因子循环miR的筛选

1.3 血清循环微小RNAs检测

收集入院时（AMI后第1天）患者外周血，按照试剂盒标准操作从血清中提取总RNA（德国，Qiagen）。按cDNA试剂盒说明书（德国，Qiagen）获得cDNA。应用SYBR Green master mix（Biosystems）系统进行实时定量聚合酶链反应检测，小核RNA U6为内参。每个样本重复检测3次。

1.4 统计学分析

将检测的miRs相对表达标准化为U6，计算公式为△Ct=Ct miR平均值—CtRNU6平均值，之后的统计分析用△△Ct法（倍数变化）。连续变量用（）表示；分类变量用绝对数和百分比数表示。根据分布情况用t检验或Mann-WhitneyU检验组间的显着性差异。卡方检验或Fisher精确检验用于分类变量检验。绘制ROC曲线分析miR-150预测AMI后HF的诊断价值并确定诊断截断值。使用SPSS 19.0进行统计分析，以P＜0.05具有统计学差异。

2 结果

2.1 急性心肌梗死患者人口学特征

共80例AMI患者入选本研究，包括40例AMI后HF患者和40例AMI后非HF患者。AMI后HF组和AMI后非HF组患者临床基线资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），详见表1。

表1 两组患者临床基线资料比较 ［n=40，n（%），］

表1 两组患者临床基线资料比较 ［n=40，n（%），］

注：TnT——肌钙蛋白T；BNP——脑钠肽；*P＜0.05

2.2 两组来者血清循环微小RNAs水平比较

实时定量聚合酶链反应检测发现：与对照组相比，5个候选miRs中有4个在AMI患者中明显增高（miR-133a、miR-499、miR-34a和miR-192），但在AMI后HF和AMI后非HF组患者间比较差异无统计学意义（P＞0.05）；miR-150的血清水平是AMI患者中唯一下降的miR，且AMI后HF组明显低于AMI后非HF组，差异有统计学意义（P＜0.001），见表2。

表2 AMI后HF水平和AMI后非HF组患者血清循环miRs水平比较 ［n=40，］

表2 AMI后HF水平和AMI后非HF组患者血清循环miRs水平比较 ［n=40，］

注：数据表示为倍数变化，健康对照假定为1，两组间的循环miR水平比较用Mann-Whitney U 检验

2.3 血清循环微小RNA-150预测AMI后HF的诊断价值

绘制ROC曲线确定miR-150预测AMI后HF的诊断效能，发现AUC为0.802（95%CI：0.708～0.895，P=0.000），通过约登指数计算找出截断值为0.45，此时对应的灵敏度和特异度分别为67.5%和77.5%，此时预测阈值截断值为0.4，见图2。

图2 血清循环miR-150预测AMI后HF的ROC曲线图

3 讨论

本研究通过比较miR-150在AMI后HF组和AMI后非HF组患者之间的表达差异，发现AMI后HF组患者的水平明显低于AMI后非HF组患者，表明miR-150可能与AMI后HF发展密切有关。miR-150作为AMI后HF的预测因子，本研究通过绘制ROC曲线分析其预测的准确性：AUC为0.802，灵敏度和特异度分别为67.5%和77.5%，对应的截断值为0.4。与传统的AMI后HF预测经典标志物BNP相比（有文献报道AUC为0.616），其预测价值更佳［10］。另外，本研究发现BNA在AMI后HF组患者的浓度明显高于AMI非HF组，故miR-150与BNP联合鉴别诊断AMI后HF和AMI后非HF也是后续扩大样本量研究提高诊断价值的重要思路。

MiR-150在淋巴结和脾脏中高表达，在免疫原性、造血和胚胎造血中起着重要的作用，低表达的miR-150可能导致自身免疫性疾病和造血系统恶性肿瘤［11］。目前有关miR-150的临床研究主要集中在血液系统疾病［11］、肺癌［12］、结肠癌［13］、胃癌等［14］，但对心血管疾病的作用研究较少，目前认为miR-150具有保护心肌损伤的作用，并对心脏肥大，或通过各种机制引起的心肌纤维化亦具有保护作用。Scrutinio等［15］研究发现血清循环miR-150水平在急性HF患者中明显下调（与稳定期HF患者相比），表明该指标可能成为一种HF的严重程度的潜在生物标志物。Zhang等［8］研究显示AMI患者血浆中miR-486和miR-150的水平显著高于健康对照，二者对AMI尤其是NSTEMI有重要的诊断价值，联合ROC曲线分析显示，在区分AMI患者和健康对照时AUC值为0.771；鉴别NSTEMI患者和健康对照时AUC值为0.845。本研究比较AMI后HF组和AMI后非HF组之间miR-150的表达差异，得出miR-150预测AMI后HF的AUC为0.802，与已有文献研究结果一致。

综上所述，miR-150可作为AMI后HF的潜在预测因子，但本文由于患者数较少，结果的可靠性仍有待后续大样本验证；同时，后续实验可通过体内外基础研究进一步明确miR-150调控AMI预后的作用机制，为AMI的诊断、治疗和预后提供新的靶点和思路。