国产离子交换高效液相色谱法糖化血红蛋白仪的性能评价

谭洪辉 （广东省高州市人民医院检验科，广东高州 525200）

糖化血红蛋白(HbA1c)是血液中红细胞内的血红蛋白A 组分的某些特殊部位与葡萄糖结合的产物，该产物由缓慢而不可逆的非酶促反应而形成[1]，可以反映患者近8～12 周的血糖控制情况，是临床上诊疗糖尿病及评估血糖控制水平的有效指标[2]。根据国际标准化组织ISO15189[3]和卫生部《医疗机构临床实验室管理办法》要求[4]，本研究对科室新引进的离子交换高效液相色谱法(HPLC)国产的糖化血红蛋白仪MQ-6000 进行临床性能评价，确认其是否满足临床应用要求。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取本院2019 年7 月各内科住院确诊的50 例糖尿病患者及40 例健康体检者为研究对象，其中男28 例，女22 例，平均年龄(46.6±7.4)岁，所有研究对象抽取EDTA-K2 抗凝血液2 mL 标本送检。

1.2 仪器和试剂

MQ-6000 高效液相色谱法糖化血红蛋白仪(上海惠中公司)，试剂、高低质控品和标准品均由上海华臣公司提供；美国BIO-RAD D-10 糖化血红蛋白分析仪，试剂、校准品、质控品均由美国BIO-RAD 公司提供。2 台仪器均每天进行高、低2 个水平质控品测定，质控在控后进行性能评价试验。

1.3 方法学评估

1.3.1 携带污染率 依据我国卫生行业标准YY/T1246-2014《糖化血红蛋白分析仪》[5]评价方法，选取低值和高值样本各1 份，连续测定高值样本3 次，记为H1、H2 和H3，马上连续测定低值样本3 次，记为L1、L2 和L3，携带污染率=|L1-L3|/(H3-L3)×100%，携带污染率≤3%为符合验证要求。

1.3.2 批内及批间精密度 依据我国卫生行业标准WS/T 461-2015[6]精密度评价方法，选取高值和低值患者新鲜全血各1 份，每天检测2 批次标本2 次(间隔大于2 h)，连续检测20 d，以20 d 的80 个检测结果计算同批次以及不同批次之间的变异系数。批内变异系数≤2%，批间变异系数≤3%为可接受结果[6]。

1.3.3 正确度 依据CLSI EP15-A3[7]文件的准确度评价方法，测定国家卫健委临检中心2020 年第1 次室间质控物，每天对同一水平测定2 次后取平均值，连续测定5 d，计算测定值与靶值之间的相对偏差，测定值在允许范围内，相对偏差为±8%区间内为可接受结果[5]。

1.3.4 仪器比对 依据CLSI EP9-A3[8]文件的可比性评价方法，以同方法学的美国BIO-RAD D-10 为对比仪器，选取线性范围内浓度均匀分布的20 份标本在2 台血液分析仪上随机测定，记录结果。以极端化偏差处理法(ESD)进行离群值检验后剔除离群值。以MQ6000 仪器测定均值为横坐标，以BIORAD D-10 测定均值为纵坐标，绘制散点图。选择(Passing-Bablok，P-B)模型拟合回归方程，计算相关系数r和偏倚。以相关系数r≥0.975，偏倚≤10%为可接受结果。

1.3.5 线性范围 依据CLSI EP6-A2[9]文件的线性范围评价方法，参照试剂说明书的检测线性范围(4.0%～17.0%)，收集高低值标本(分别记为H 和L)，按0H+5L、1H+4L、2H+3L、3H+2L、4H+1L、5H+0L稀释成6 个浓度的样本，每个浓度样本重复测定2次，计算平均值。以稀释比例预期值(通过已知的高低浓度样品值计算)为x，以各尝试实际测定平均值为y作线性回归，计算相关系数r值及测定均值与预期值的相对偏倚。以r≥0.990，相对偏倚＜10%，判断线性范围在实验已涉及浓度线性范围，为可接受结果[5]。

1.3.6 参考区间 依据CLSI C28-A2[10]文件的参考区间评价方法，按年龄性别均等分布选取40 例健康体检者的血样，对厂商给出参考范围(4.0%～6.0%)进行验证，只允许10%的数据超过所验证的参考范围，否则需建立参考范围。

1.4 统计学处理

数据采用Microsoft Excel 2013 和SPSS 20.0 软件进行计算和处理。

2 结果

2.1 携带污染率

通过计算得携带污染率为0.72%，小于行业标准(＜5%)[5]，高浓度样本对低浓度样本基本无携带污染，符合行业标准，见表1。

表1 携带污染率 (%)

2.2 批内及批间精密度

通过计算批内及批间的CV，批内CV 及批间CV均小于3%，符合我国卫生行业标准[5]，见表2。

表2 批内及批间精密度 (%)

2.3 正确度

根据国家临检中心2020 年第1 次室间质控物测定均值与靶值之间对比，5 个浓度水平的测定值均在允许范围内，相对偏倚≤8%[5]，见表3。

表3 正确度 (%)

2.4 仪器比对

ESD 法检验后未发现离群值，MQ6000 与D-10 仪器比对回归方程为y=1.073 4x-0.417 1，r=0.990 6，偏倚0.17%～3.00%。r≥0.975，偏倚≤10%。

2.5 线性范围

线性方程为y=0.998 6x-0.363 9，r=0.993；6 个稀释比例的实测值与预期值的相对偏倚均＜10%，提示线性范围验证为可接受结果，见表4。

表4 线性范围 (%)

2.6 参考区间

通过检测40 例健康体检者标本后发现MQ-6000 HbA1c 参考区间4.0～6.0，测试个体范围(%)4.3～6.6，超限2 个，符合率95%＞90%，符合应用要求。

3 讨论

HbA1c 被认为能够反映平均血糖水平，与糖尿病并发症密切相关，是监测评估血糖控制水平的金标准[1，11]。HbA1c 检测方法有多种，主要有电泳法、色谱法、免疫比浊法和HPLC 法。HPLC 具有抗干扰性好、精密度好和准确度高等优势，被美国糖化血红蛋白标准化计划(NGSP)推荐为检测HbA1c 的参考方法[12]，同时也为我国糖化血红蛋白检测质量标准化的推荐方法[13]。

每台检测仪器在投入使用之前，确保仪器性能稳定至关重要，其中检测结果的质量是否符合质量要求是最重要因素。同时医学实验室认可准则:ISO15189规定，在引进新的检验仪器和建立新的检验项目时，临床实验室应对检测系统的性能进行验证，以判断其能否符合临床应用要求[14]。另根据检验医学一致化和标准化的目标和循证医学的要求，相同项目在不同检测系统之间的结果应该做到结果互认。

本研究依据各项性能评价文件对MQ-6000 糖化血红蛋白仪各项主要性能进行了验证。计算得出其携带污染率为0.72%，远小于行业标准的5%，表明高值样本不影响低值样本的检测。精密度是用来量值一系列重复测定结果的分散程度，通过高值和低值样本的批内及批间重复性试验，批内及批间CV 均小于行业标准的3%，表明仪器精密度良好。准确度是多次测定的均值与真值相符合的程度，通过相同方法学仪器的比对试验和临检中心的室间质评，相同方法学两种检测系统的相关性良好(r=0.975），5 个水平的测定值均在允许范围内，与靶值之间相对偏倚小于行业标准(±8%)，表明仪器准确度良好。另外仪器线性范围较大(4.0%～17.0%)，参考区间适用于大多数(＞90%)正常个体。

综上所述，MQ-6000 离子交换高效液相谱法糖化血红蛋白仪在携带污染率、批内及批间精密度、准确度、线性范围和参考区间方面均符合CLSI 文件要求，且与厂商标定的分析性能一致，可满足临床应用需求。