Vinculin 蛋白在乳腺癌中的表达与临床意义*

张秀梅，丛 林，周永华

(江苏省兴化市人民医院病理科，兴化 225700)

目前在全球范围内，女性乳腺癌的发病率及致死率一直居高不下，且发病呈年轻化趋势[1-3]。乳腺癌是多基因、多分子所致的肿瘤，癌细胞的增殖、迁移、浸润等过程受到复杂的分子网络调控，其中细胞骨架蛋白发挥了重要作用[4-5]。Vinculin 蛋白(纽蛋白)是细胞骨架肌动蛋白结合蛋白之一，在介导的细胞-基质黏附过程中起到重要作用，而细胞-基质黏附在肿瘤发生发展过程中发挥关键作用[6]。Vinculin在非小细胞肺癌[7]、前列腺癌[8]、结肠癌[9]中呈低表达，且与预后密切相关。Vinculin 在乳腺癌中的表达如何以及与临床特征关系如何，国内外鲜见报道。现就此问题进行相关的研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以2014 年1 月—2015 年12 月在兴化市人民医院收治确诊的106 例乳腺癌患者为研究对象，均经病理证实为浸润性导管癌，离肿瘤边缘2 cm 为癌旁组织。所有患者均为单侧乳房病灶，术后每6 个月电话随访1 次，患者出现死亡即随访截止，最长随访36 个月。所有患者均签署知情同意书。排除标准：合并其他肿瘤者；合并其他系统严重疾病者；严重肝、肾功能不全者；入院前有过放化疗者。本研究经兴化市人民医院伦理委员会批准。

1.2 免疫组织化学 取患者癌组织及对应癌旁组织，常规石蜡包埋切片，然后应用免疫组织化学法检测Vinculin 蛋白在癌组织及对应癌旁组织的表达情况。兔抗Vinculin 一抗(ab91459)购于Abcam 公司。工作液浓度为1∶500～1∶1 000。用已知阳性组织作阳性对照，磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)代替一抗作为阴性对照。

由经验丰富的两位病理科医师通过双盲方法对免疫组织化学结果采用半定量积分法进行判读。Vinculin 阳性定位于肿瘤细胞质/膜，间质中少量表达。阳性细胞呈色反应记分：0 分，无特异性着色；1 分，浅棕色；2 分，棕黄色；3 分，深棕色。阳性细胞所占比例记分：0 分，＜5%；1 分，5%～25%；2 分，＞25%～50%；3分，＞50%～75%；4 分，＞75%。每张切片的评分取两位病理医师结果的平均数。以所有评分的均数为判定标准，大于均数判定为高表达，否则判定为低表达。

1.3 统计学方法 应用SPSS 21.0 软件进行统计分析。所得计量资料符合正态分布，以表示，采用独立t 检验。计数资料以构成比表示，采用χ2检验。Vinculin 蛋白表达与乳腺癌临床特征的相关性采用Spearman 相关分析。Vinculin 蛋白表达与乳腺癌患者预后采用Kaplan-Meier 生存函数分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Vinculin 蛋白在乳腺癌中的表达情况 免疫组织化学结果显示Vinculin 蛋白在癌旁组织中高表达率为92.45%(98/106)，显著高于癌组织中的22.64%(24/106)(χ2=105.73,P＜0.01)(图1)。

图1 正常乳腺组织及浸润性导管癌中Vinculin 蛋白的表达(EnVision 二步法)(200×)

2.2 Vinculin 蛋白表达与乳腺癌临床病理特征的关系 Vinculin 蛋白表达水平在乳腺癌患者的TNM分期、癌分化程度以及淋巴结转移不同组中差异均有统计学意义(均P＜0.05)，见表1。Spearman 相关分析结果显示，Vinculin 蛋白高表达率与TNM 分期、淋巴结转移呈负相关(r=-0.25、-0.20,P＜0.05)，Vinculin蛋白高表达率与分化程度呈正相关(r=0.37,P＜0.05)。Vinculin 蛋白表达水平在乳腺癌患者的年龄、绝经状态、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,Her-2)表达以及肿瘤直径大小不同组中差异均无统计学意义(均P＞0.05)，见表1。

表1 Vinculin 蛋白表达与乳腺癌临床特征的关系

2.3 Vinculin 蛋白表达与乳腺癌预后的关系 Kaplan-Meier 生存函数分析结果显示，Vinculin 蛋白高表达的乳腺癌患者3 年无疾病进展平均生存期为34.25 个月(95%CI:32.28～36.22)，Vinculin 蛋白低表达患者为28.10 个月(95%CI:26.63～29.57)，Vinculin蛋白高表达乳腺癌患者3 年无疾病进展生存期明显长于低表达者(χ2=19.13,P＜0.01)，见图2。

3 讨论

图2 乳腺癌患者无疾病进展生存曲线

乳腺癌是女性最常见的肿瘤，随着诊疗技术的发展，大部分乳腺癌患者预后良好，但部分患者预后较差，因此寻找新的诊治靶点一直是乳腺癌研究的热点。乳腺癌患者预后较差主要是由于肿瘤发生转移，目前认为肿瘤发生转移是一个机械事件，涉及细胞间黏附、细胞-基质黏附、细胞形状变化、细胞运动的改变，在该过程中细胞骨架蛋白发挥了重要作用[10]。Vinculin 蛋白分子可以通过整合素以及talin 蛋白(踝蛋白)连接细胞外基质至肌动球蛋白细胞骨架，其对于细胞的收缩力传递至关重要[11-12]。

Vinculin 蛋白表达改变会对机体生理功能产生重要影响，表达异常与多种疾病有关。Vinculin 是细胞-基质黏附和细胞间黏附的主要参与者，在肿瘤细胞的迁移侵袭过程中发挥了重要作用。Vinculin 蛋白表达减少可以改变细胞迁移的特性[6,11-12]。本研究结果显示，乳腺癌组织中Vinculin 蛋白高表达率明显低于癌旁组织，Vinculin 蛋白高表达率与TNM 分期、淋巴结转移呈负相关，Vinculin 蛋白高表达率与分化程度呈正相关。而Vinculin 蛋白表达水平在乳腺癌患者的年龄、绝经状态、ER、PR、Her-2 表达以及肿瘤直径大小不同组中差异无统计学意义。Vinculin 蛋白高表达乳腺癌者3 年无疾病进展生存期明显高于低表达者。表明Vinculin 蛋白低表达增加了乳腺癌的恶性程度，预后较差，提示Vinculin 蛋白有可能是乳腺癌诊治新的靶点。但是本研究样本量较少，且Vinculin 蛋白作用机制仍不明了，Vinculin蛋白如何促进乳腺癌细胞侵入组织并发生转移的关键作用机制有待进一步的研究。

综上所述，Vinculin 蛋白在乳腺癌组织中呈低表达状态，与乳腺癌的恶性程度密切相关，影响患者的预后，可能是乳腺癌病理分级判断以及评估预后的生物学指标之一。