油红O染色在甲醛固定的乳腺富于脂质癌中的实践应用

姜贝贝，刘晓红，曹瑞雪，于国丽，李培峰

在临床病理诊断中，常规HE切片中常可见到胞质透亮或胞质内有许多大小不等的圆形空泡，此现象是水泡样变、黏液样物质、脂肪或脂质组织，还是溶解了的糖原，往往不易区分，这就要依赖于脂肪染色、黏液染色、糖原染色等来鉴别。黏液染色和糖原染色可用石蜡包埋后切片染色即可，而脂肪染色不能用常规石蜡包埋组织切片。日常病理诊断工作中，很多标本可能未行冷冻或者在冷冻时未考虑脂肪染色的问题，但在常规HE染色切片观察时却要考虑或验证其脂质或脂肪成分。为弥补新鲜冷冻时未行脂肪染色，本文收集1例已明确诊断为乳腺富于脂质癌的剩余标本，用甲醛固定后的标本来制作冷冻切片进行油红O脂肪染色，并记录甲醛固定30天内的标本中脂肪染色情况。

1 材料与方法

1.1 材料收集解放军第九六〇医院经10%磷酸盐缓冲中性福尔马林固定的乳腺富于脂质癌1例，分成4小块，每块大小1.5 cm×1.5 cm×0.8 cm。另收集20例经10%磷酸盐缓冲中性福尔马林固定的带有正常脂肪的组织作为对照，每例取1小块，每块大小1.5 cm×1.5 cm×0.8 cm。

1.2 试剂与配方油红O染色试剂为本科室自行配制。油红O贮备液：将油红O粉剂0.5 g和100 mL 50%乙醇倾入三角烧瓶中，轻轻晃动使其充分溶解，过滤后保存至小口砂塞瓶内，密封备用。油红O工作液：油红O贮备液36 mL，加蒸馏水24 mL，充分混合后静置10 min即可使用。

1.3 方法分别将固定7、15、21、30天的乳腺富于脂质癌组织和另20例对照组组织，按照同一实验条件进行油红O染色：(1)固定肿块流水冲洗2 h[1]，滤纸吸干水分放入冷冻切片机中制作冷冻切片，6 μm厚切片，贴于载玻片上，并贴上新鲜脂肪组织作为阳性对照；(2)将切片于50%乙醇中稍洗；(3)油红O工作液浸染(加盖)10～15 min；(4)用50%乙醇稍洗，再用蒸馏水稍洗；(5)用苏木精浅染细胞核，流水洗5 min，再用蒸馏水稍洗；(6)用滤纸或干净纱布把组织周围水分抹干，甘油明胶封片。需注意：(1)油红O工作液只能当天使用，不能保存；(2)不能用中性树胶封片。

2 结果

本实验中作为阳性对照的新鲜脂肪组织油红O染色显示，圆形或卵圆形片块状橙红色着色；固定7、15、21、30天的乳腺富于脂质癌标本中，瘤细胞胞质内均显示小圆滴状橙红色着色。固定30天的20例富含正常脂肪的组织中，脂肪部分均显示圆形或卵圆形片块状橙红色着色。

乳腺富于脂质癌HE染色可见胞质透亮，细胞呈巢团状排列(图1A)。油红O染色显示：固定7天后的肿瘤细胞胞质内见橙红色小脂滴(图1B)；固定30天后的肿瘤细胞胞质内见橙红色小脂滴(图1C)；衬染肿瘤细胞核均呈蓝色。固定30天的正常脂肪组织中脂肪部分显示圆形或卵圆形片块状橙红色着色(图2)。

①A①B①C②

3 讨论

在常规HE染色切片中经常可见胞质透亮或胞质内有许多大小不等的圆形空泡，这种空泡有时与水泡样变、溶解了糖原或脂质等不易区分，这最好用脂肪染色、糖原染色联合应用，互相验证来鉴别。糖原染色用石蜡包埋切片染色即可，常采用PAS法[2]，此法可将黏多糖类物质染成紫红色。对于糖原染色阴性的病例需进一步行脂肪染色证实空泡内成分是否为脂质。而油红O脂肪染色[3]法不能用于常规石蜡制片后的染色，因为石蜡包埋组织处理过程中需用一些有机溶剂，脂类物质易被脱水液和透明液中的高浓度乙醇和二甲苯等脂溶性试剂所溶解。本实验验证了甲醛固定后标本中脂质的残留情况，实验结果显示，30天内的中性甲醛固定标本均可以染出脂质，未影响胞质内成分的定性，可以准确的为病理鉴别诊断提供技术支持。大部分病理科的取材剩余标本保存30天，在遇到类似病例时，用中性甲醛固定的乳腺组织在30天内均可以用此方法来弥补术中冷冻切片以明确诊断。