骨髓细胞学检查结合免疫标记对全血细胞减少症诊断价值研究

王 蕊， 金 芳， 孟 伟， 王 艳

1.河北省第七人民医院 检验科，河北 保定 073000；2.河北医科大学第二医院血液内科，河北 石家庄 050000

全血细胞减少症一般由骨髓造血功能降低导致，根据病理生理特点分为骨髓生成障碍和外周血消耗过多两种，具有治疗起效慢、病程长、易复发等特点，早期明确诊断对指导临床治疗具有关键性作用[1]。既往临床多采用骨髓单个核细胞直接抗人球蛋白试验对其进行诊断，但敏感度和阳性率相对较低，易出现漏诊和误诊。有研究报道，骨髓细胞学检查结合免疫标记可反映骨髓增生情况、形态及分布特点，可为临床诊断全血细胞减少症提供重要依据[2]。本研究旨在探讨骨髓细胞学检查结合免疫标记对全血细胞减少症的诊断价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取自2016年12月至2018年12月河北省第七人民医院收治的200例全血细胞减少症患者为研究对象。纳入标准：符合全血细胞减少症诊断标准，即血常规检测中至少1次及以上血红蛋白<110 g/L，白细胞计数<4×109个/L，血小板计数<100×109个/L；临床资料完整；患者及其家属知情同意。排除标准：合并心、肝、肾等重要脏器疾病或内分泌疾病等。根据病因不同，将患者分入造血系统疾病组(n=192)和非造血系统疾病组(n=8)。造血系统疾病组中，男性101例，女性91例，平均年龄(49.08±6.02)岁；非造血系统疾病组中，男性5例，女性3例，平均年龄(50.83±5.16)岁。两组患者性别比例、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 仪器 Sysmex XN-2000细胞分析仪及配套试剂(日本Sysmex公司)；IMCC-20A专用免疫微柱离心机和37℃专用免疫微柱孵育箱(长春博讯生物技术有限责任公司)，以及配套试剂(上海血液生物医药有限公司)。

1.2.2 方法 对所有患者进行骨髓细胞学检查和免疫标记。骨髓细胞学检查：采集患者手指末梢外周血涂片，并用骨髓穿刺针在髂前或髂后上棘取材，取骨髓(0.2～0.3 ml)穿刺液涂片，经多部位骨髓穿刺和骨髓活检，制成厚薄均匀的骨髓涂片后刘氏染色，进行骨髓细胞形态学观察，并根据需要进行细胞化学染色，观察有核细胞增生程度及是否存在特殊细胞，观察骨髓增生程度及红细胞、白细胞等水平。免疫标记：8支微柱凝胶管置入37℃专用免疫微柱孵育箱15 min后，再置入专用免疫微柱离心机内离心，离心速度和时间均严格按照厂商推荐标准执行，离心后骨髓细胞均匀沉于微柱管底部为阴性，悬浮于凝胶表面或凝胶中间为阳性。

1.3 观察指标 比较两组患者的外周血血小板计数、红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白水平，计算骨髓细胞学、骨髓细胞学+免疫标记的诊断准确率。

2 结果

造血系统疾病组外周血血小板计数、红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白分别为(31.26±5.82)×109个/L、(2.03±0.41)×1012个/L、(2.12±0.34)×109个/L、(67.81±8.12)g/L，均低于非造血系统疾病组的(45.25±6.89)×109个/L、(2.77±0.72)×1012个/L、(2.58±0.42)×109个/L、(81.13±7.27)g/L，差异有统计学意义(P<0.05)。骨髓细胞学诊断准确率为98.00%(196/200)，骨髓细胞学+免疫标记诊断准确率为100.00%(200/200)。

3 讨论

全血细胞减少症是指外周血中红细胞、白细胞、血小板均不同程度减少的疾病的总称，是临床比较常见的一种血液学表现。目前认为，全血细胞减少症的主要病因是再生障碍性贫血、急性白血病、骨髓增生异常综合征、肝硬化、感染、肿瘤等[3]。了解全血细胞减少症的病因对诊断、鉴别诊断、治疗措施的实施及预后的评价十分重要[4]。既往临床对全血细胞减少症的病因诊断首先需要对外周血进行检查，判断是否全血细胞减少，再根据患者外周血血象特点初步判断病因[5]；然后根据临床表现确定检查项目，如骨髓象检查、免疫球蛋白检查等；如仍未明确病因诊断，则需要开展免疫标记检验、染色体检验、溶血试验、抗核抗体谱及其他自身抗体检查等[6]。

近年来，骨髓细胞学检查在血液疾病的诊断中发挥了重要的作用，其能够清晰显示骨髓细胞形态学改变，有助于提升患者的临床诊断准确率。骨髓细胞形态学检查通过制备骨髓涂片并进行观察，区分形态学的特征及血细胞的类型。形态学检验结合免疫标记、遗传学及分子生物学技术是非常重要的检验手段，甚至是某些疾病诊断或鉴别诊断的“金标准”[7]，但如今，由于过度追求检验的经济效益和时效性，再加上自动化理念的引导，部分医院出现了不重视形态学的现象。骨髓细胞学检查和免疫标记结合应注重质量控制。一是分析前质量控制。通过加强培训，对新上岗的临床医师及样本护送人员进行必要的培训，只有提供完整的临床资料和合格的检验样本，才能使检验报告更加及时、准确、可靠。骨髓涂片到达细胞室后，及时对其进行登记和编号，认真核对申请单与样本是否属同一患者，最好把编号和患者姓名一同写在玻片上，以便在阅片时进行二次核对。二是分析中质量控制。在进行显微镜检查时，阅片前应仔细阅读临床资料，不详之处及时与临床医师沟通，从基本病史和普通检查中发现有价值的线索，有关细胞形态学和细胞化学染色结果的判断需要由专业资质人员出具检验报告，并由双人审核签发检验报告单。三是分析后质量控制。原始资料做好标记并归档保存至少10年，未染色的涂片建议保存1年，以备查证、外送会诊或加作其他项目。

本研究结果显示：骨髓细胞学诊断准确率为98.00%(196/200)，骨髓细胞学+免疫标记诊断准确率为100.00%(200/200)。这提示，骨髓细胞学检查结合免疫标记诊断全血细胞减少症的准确率高，有助于提升临床诊断效果。本研究优势在于，操作过程中完善全血细胞减少症首诊处理程序，根据全血细胞减少症的程度明确本院有无诊断和治疗条件，根据患者的临床表现特征，采取正确、合理的检查手段，为尽快明确病因诊断提供了基础；同时，骨髓细胞学检查全面质量控制，制定计划，明确预期目标，确保报告正确率。

综上述所，骨髓细胞学检查结合免疫标记对全血细胞减少症的诊断价值较高，有较好的临床应用价值。