五维甘草那敏胶囊的含量及含量均匀度研究

杨小林，白英豪，王思琦，卢 娟，王 宇

(信阳市食品药品检验所，信阳 464000)

五维甘草那敏胶囊由马来酸氯苯那敏、维生素B6、维生素B2、烟酰胺及泛酸钙5种成分加工而成，为抗组胺药。现行质量标准[1]含量测定项，流动相有机溶剂比例低于5%，易导致柱效下降，色谱系统不稳定[2]；且每种成分处方量均低于25 mg·粒-1，未建立对各组分含量均匀度进行控制的方法。按照《中国药典》2015年版四部操作规定，对这些成分进行含量均匀度检查。为了更有效地控制五维甘草那敏胶囊的质量，本文参考文献[3-10]，首次建立了能同时测定5种成分含量及含量均匀度的HPLC法，并进行了方法学研究。该方法操作简便、结果准确、专属性强，为本品质量控制提供了参考。

1 仪器与试药

1.1仪器 LC-2030C 型高效液相色谱仪，紫外检测器，2401型紫外分光光度计(日本岛津公司)；XS-205型十万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多国际贸易上海有限公司)；SB-5200DT型超声波提取器(宁波新芝生物科技有限公司)。

1.2试药 马来酸氯苯那敏(批号100047-201507，质量分数为99.7%)、维生素B6(批号100116-201705，质量分数为100.0%)、维生素B2(批号100369-201504，质量分数为98.2%)、烟酰胺(批号100115-201604，质量分数为99.9%)和泛酸钙对照品(批号100370-201903，质量分数为97.5%)，均由中国食品药品检定研究院提供，供含量测定用；甲醇为色谱纯(默克股份两合公司)；磷酸为分析纯(天津市天力化学试剂有限公司);水为自制超纯水。五维甘草那敏胶囊(批号：19063023、20030511、19103062)，贵州泛德制药有限公司。

2 方法与结果

2.1色谱条件 采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇(A)-1 mL·L-1磷酸(B)为流动相，梯度洗脱(0～25 min，5%A～45%A)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：210 nm。

2.2溶液的制备

2.2.1混合对照品溶液 分别精密称取5种成分对照品10、10、10、20和40 mg，置于同一100 mL量瓶中，加1 mL·L-1磷酸适量超声使溶解，放冷，再用1 mL·L-1磷酸稀释至刻度，摇匀，即得。避光操作。

2.2.2供试品溶液 取本品1粒，置于50 mL量瓶中，加1 mL·L-1磷酸适量超声使溶解，放冷，用1 mL·L-1磷酸稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。避光操作。

2.2.3阴性样品溶液 按照处方比例制备不含马来酸氯苯那敏、维生素B6、维生素B2、烟酰胺及泛酸钙的阴性样品0.40 g，置于50 mL量瓶中，加1 mL·L-1磷酸适量超声使溶解，放冷，用1 mL·L-1磷酸稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3专属性考察 取2.2项下制备的混合对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10 μL，按照2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图，见图1。由图1可知，供试品与对照品色谱图相应的位置有相同的色谱峰，且阴性样品溶液无干扰。

图1 HPLC图A.混合对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性样品溶液；1.烟酰胺；2.马来酸；3.维生素B6；4.泛酸钙；5.维生素B2；6.氯苯那敏。Fig.1 HPLC chromatogramsA.mixed reference substance solution；B.sample solution；C.negative sample solution；1.niacinamide；2.maleic acid；3.vitamin B6 ；4.calcium pantothenate；5.vitamin B2；6.chlorpheniramine.

2.4线性关系考察 精密吸取2.2.1项下制备的混合对照品溶液2、5、10、15、20 μL，注入高效液相色谱仪，按照2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图。分别以5种成分的进样量为横坐标(x)、峰面积为纵坐标(y)绘制标准曲线，经回归分析，得5种成分的回归方程，分别为：y1=1.8×106x1+6.6×104(r1=0.999 4)，y2=3.3×105x2+3.5×104(r2=0.999 9)，y3=5.8×105x3+5.0×103(r3=0.999 9)，y4=3.2×106x4-1.7×105(r4=0.999 1)和y5=2.7×105x5+4.7×104(r5=0.999 0)。结果表明，5种成分的进样量分别在0.20～2.02、0.20～2.03、0.20～2.04、0.40～4.0、0.80～8.05 μg范围内线性关系良好。

2.5精密度实验 精密吸取2.2.1项下制备的混合对照品溶液10 μL，连续进样6次，按照2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图，结果得到5种成分峰面积的RSD值分别为0.51%、0.46%、0.67%、0.74%、0.61%(n=6)。结果表明，该仪器精密度良好。

2.6稳定性实验 取2.2.2项下制备的供试品溶液，在0、2、4、6、8、12 h分别精密量取10 μL，按照2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图。计算得到5种成分峰面积RSD值分别为0.82%、1.14%、1.50%、1.36%、1.03%(n=6)，结果表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.7重复性实验 精密称取五维甘草那敏胶囊内容物细粉6份，按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，按照2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图并计算含量。结果5种成分的平均含量分别为标示量的98.6%、100.5%、97.6%、99.2%、100.2%；RSD值分别为0.75%、0.63%、0.58%、0.66%、0.75%(n=6)。结果表明，该方法重复性良好。

2.8回收率实验 精密称取已知含量的五维甘草那敏胶囊(批号19063023)样品6份，每份0.45 g，置于50 mL量瓶中，分别加入混合对照品溶液(5种成分质量浓度依次为0.51、0.50、0.51、1.01、2.02 mg·mL-1)8.0、10.0、12.0 mL。按照2.2.2项下方法操作，制备加样供试品溶液，再按照2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图并计算各成分回收率。结果见表1。

表1 回收率实验结果 (n=6)Tab.1 Results of recovery tests (n=6)

2.9含量及含量均匀度的测定 取3批五维甘草那敏胶囊各10粒，分别置于50 mL量瓶中，按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，滤过，精密量取续滤液与2.2.1项下制备的混合对照品溶液各10 μL，按照2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图，按照外标法以峰面积分别计算每粒的含量，求出10粒的平均含量。同时以每粒的含量计算含量均匀度。结果见表2。

表2 含量及含量均匀度测定结果Tab.2 Determination of content and content uniformity

3 讨论

3.1方法的选择 现行质量标准中5种成分的含量测定均采用HPLC法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相分别为0.1 mol·L-1醋酸钾-水(85∶15)(用醋酸调节pH值至4.02)和0.02 mol·L-1磷酸氢二钠-乙腈(96∶4)。而有机相用十八烷基键合硅胶色谱柱时，流动相中有机溶剂一般不低于5%，否则易导致柱效下降，色谱系统不稳定[2]。为了简化和提高现行质量标准，本文建立了能同时测定五维甘草那敏胶囊中5种成分含量及含量均匀度的HPLC法。

3.2波长的选择 根据各成分在流动相中的紫外吸收图谱来确定检测波长。5种成分分别在217、201、223、207、200 nm波长处有最大吸收，综合考虑，最终选择210 nm作为测定波长。

3.3流动相的选择 参考相关文献[11-20]，流动相系统考察了甲醇-1 mL·L-1磷酸、甲醇-庚烷磺酸钠缓冲液和甲醇-磷酸盐缓冲液系统。结果甲醇-1 mL·L-1磷酸流动相系统可使5种成分达到完全分离，且峰形良好，流动相对待测组分的分离无干扰。同时也考察了不同品牌的色谱柱，分离重复性良好。以甲醇-1 mL·L-1磷酸为流动相时，样品中组分能完全溶解，避免了溶剂的干扰。