石蜡切片技术在开放性实验教学中的应用

何琳莉 黄一凡

摘 要：在组织学和病理学研究中，石蜡切片技术是一种常用的实验技术。为了实现对学生实验动手能力的更好培养，更好地帮助其将所学理论知识与实践紧密结合起来，文章试图就石蜡切片技术在开放性实验教学中的应用展开深入的研究探讨，帮助学生将该技术的实验原理、方法牢固掌握，从而为后续免疫组化开放性实验的开展奠定坚实的基础。

关键词：病理学 石蜡切片技术 开放性实验教学

在各种切片制作方法中，石蜡切片技术是一种应用最为普遍的技术。该技术不仅用于病理学、生命科学领域对细胞组织形态变化的观察，在其他诸多学科领域中也获得了较为广泛的应用，在临床手术中是一种不可或缺的重要诊断方法[1]。将石蜡切片技术应用到开放性实验教学中来，帮助学生将切片的制作过程顺利掌握，学会判断切片质量好坏。同时学生通过动手制作切片以及阅片，有助于将学生的积极性有效调动起来，以达到培养学生动手实践能力的目的。

1 材料与方法

1.1 实验试剂和器材

试剂：10%甲醛水溶液、75%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、中性树胶以及石蜡等。

材料：盖玻片、载玻片、正常小白鼠肾组织标本。

器材：水浴箱、包埋机、烤箱以及莱卡轮转切片机等。

1.2 实验过程

取材固定、清晰脱水、透明浸蜡、包埋切片、染色封片等是石蜡切片技术的主要步骤[2]。第一步，教师将石蜡切片技术的原理、石蜡切片的详细制作过程对学生进行一个细致的介绍，让学生对该技术有一个大概的认识和了解;第二步，教师借助多媒体播放教学视频让学生观看石蜡切片技术的整个操作步骤以及学习以怎样的标准来对切片的质量加以判断;第三步，分小组在教师的安排下前往医院病理科实地观摩怎样制作切片;第四步，在教师指导下于实验室亲自动手运用石蜡切片技术制作石蜡切片。

1.3 实验步骤

（1）取材固定：取病理科阑尾手术标本作为实验材料，组织厚度大概为0.2～0.3cm。然后使用10%甲醛对阑尾组织加以固定。固定的目的在于使实验材料保持固有的结构和形态[3]。

（2）清洗脱水：具体步骤是80%乙醇2h→95%乙醇Ⅰ2h→95%乙醇Ⅱ2h→无水乙醇Ⅰ30min→无水乙醇Ⅱ30min。这一步至关重要，主要目的是为了使组织材料的急剧收缩得以減少，应按照由低到高浓度递增这样的顺序进行。

（4）透明浸蜡：二甲苯透明0.5h→石蜡Ⅰ1h→石蜡Ⅱ1h→石蜡Ⅲ1h→浸蜡（设置温度为58℃）。

（5）包埋切片：学生在教师的指导下叠包埋用的材料，然后进行包埋。包埋的时候需要注意顺时针对盛有石蜡和组织材料的小瓶轻轻摇晃，摇晃之后倒入事先叠好的包埋材料中，然后把包埋材料缓缓浸入事先准备好的冷水之中，不能完全浸入，直到表层石蜡凝固为止，随后包埋好的蜡块再使用刀片加以修整。

（6）染色封片：具体步骤是二甲苯Ⅰ0.25h→二甲苯Ⅱ0.25h→无水乙醇Ⅰ2min→无水乙醇Ⅱ2min→95%乙醇Ⅰ1min→80%乙醇Ⅰ1min→自来水冲洗1min→苏木素、蒸馏水洗0.25h→蒸馏水洗→1%盐酸乙醇加以分化→自来水冲洗→1%稀氨水予以返蓝→流动自来水冲洗→蒸馏水洗→0.5%伊红2min→自来水冲洗→80%乙醇20s→95%乙醇30s→无水乙醇Ⅰ1min→无水乙醇Ⅱ1min→二甲苯Ⅰ5min→二甲苯Ⅱ3min→最后使用中性树胶予以封片。染色的主要目的在于让细胞组织内不同结构能够呈现出不一样的颜色，便于学生观察。

2 结果

本次开放性实验教学中，石蜡切片技术的教学过程开展顺利，达到了预期的教学效果。相较于以前只可以从书本上看到动物组织的显微结构，此时通过教师的讲授、观看教学视频、实地参观最后再在教师的引导下自己动手操作。由于是学生自己动手制作出来的切片，所以使学生对该技术产生了更加深刻的印象，极大地提升了学生对开放性实验的参加兴趣。石蜡切片技术操作简便，同时有着较强的实用性，将其应用到开放性实验教学中来，有着尤为深远的意义。

3 讨论

在传统的实验教学中，大多是学生肉眼观察已经制作好的大体标本或者是在显微镜下观察已经事先染色好的组织切片，这样的教学模式自然很容易使得学生认为太过枯燥无味，未能将实验教学注重培养学生实验操作能力的特点很好地体现出来。而将石蜡切片技术应用到开放性实验教学中来，让学生能够亲自动手参与到组织制片以及HE染色过程中来，无疑更容易将学生的学习兴趣很好地调动起来。同时，在自己动手实验这个过程中，也有利于学生对照所学知识来判断切片的质量，了解每一张切片背后都有一个复杂的制作过程，使学生更加真切地认识到组织切片的来之不易，以及其在临床诊断中的重要性，毕竟直接关乎到病人病情的诊断。

项目名称：2017年川北医学院开放性实验项目;项目编号：川北医教[2017]7号：10。

参考文献：

[1] 刘浩，董文文，钟胜华，等.快速石蜡切片技术在病理检验中的临床价值[J].深圳中西医结合杂志，2019，29（12）：88-89.

[2] 王秀文.石蜡切片法中染色技术的改良[J].植物研究，2015，35（01）：158-160.

[3] 金银姬，陈立本，刘晓庆，等.快速石蜡切片技术在病理检验中的应用[J].动物医学进展，2012，33（12）：211-213.

川北医学院病理教研室（川北医学院附属医院病理科） （四川省南充市 637000）