黔产迎春花质量标准研究

姜 莲 程 韬 王影超 舒 柯

贵州省食品药品检验所，贵州 贵阳 550004

迎春花，又称金腰带、黄素馨，为木犀科植物迎春花JasminumnudiflorumLindl.的干燥叶和花。春、夏、秋三季均可采摘，晾干或晒干。药用价值在我国历史悠久，主要功效为解毒消肿、清热利尿、止血止痛，用于发热头痛、小便热痛、跌扑损伤、外伤出血、口疮、痈疖肿痛、下肢溃疡[1]。产于贵州思南、贵阳、安顺等地。我国山西、陕西、甘肃、山东、河南、江苏、四川、云南也有分布[2]。王佩珩等[3-4]对迎春花的化合物进行分析，得到裂环烯醚萜类化合物、黄酮类化合物、迎春花黄色素、多糖类化合物、挥发油类和脂肪酸类等。为提高迎春花的质量控制水平，本实验建立显微鉴别、薄层鉴别、水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物及总黄酮的含量测定，为迎春花的研究及质量控制提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 奥林巴斯BX51型显微镜(OLYMPUS)，双光束紫外可见分光光度计TU-1901(北京普析通用仪器有限责任公司)，电子调温电热套98-I-C(天津泰斯特仪器有限公司)，四用式暗箱紫外分析仪ZF-8(骥辉分析仪器(上海)有限公司)。

1.2 材料 3批迎春花药材均自贵州，分别产至贵州安顺(批号：180801)、贵州贵阳(批号：180802)、贵州贵阳(批号：180803)，样品及对照药材经贵州省食品药品检验所标本馆熊慧林老师检定，均为迎春花，并存于贵州省食品药品检验所；芦丁(110752-201514)来源于中国食品药品检定研究院；硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G薄层板(批号：20170408)及自制硅胶G薄层板；试剂：稀甘油、水合氯醛试液、三氯甲烷、甲醇、硫酸、乙醇均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别 取本品内容物置显微镜下观察：本品粉末淡棕色。叶表皮细胞含砂晶，有气孔；木纤维常见，直径5～30 μm，花粉粒圆形、类圆形、椭圆形，直径20～45 μm，外壁薄，壁上偶见壁沟，花粉粒表面具网格状纹理。

2.2 薄层鉴别 取本品粉末2 g，加70%乙醇30 mL，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取迎春花对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(75∶35∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。如图2所示。

2.3 检查

2.3.1 水分 按《中国药典》2015年版四部通则0832第二法，测定并计算3批迎春花的水分含量(%)，平行操作2次，取平均值作为结果，结果：3批迎春花的水分为12.1%～13.5%。样品测定结果为见表1。

2.3.2 总灰分 按《中国药典》2015年版四部通则2302总灰分测定法，测定并计算3批迎春花的总灰分含量(%)，平行操作2次，取平均值作为结果，结果：3批迎春花的总灰分为5.0%～5.8%。样品测定结果为见表1。

2.3.3 酸不溶性灰分 按《中国药典》2015年版四部通则2302总灰分测定法，测定并计算3批迎春花的酸不溶性灰分含量(%)，平行操作2次，取平均值作为结果，结果：3批迎春花的酸不溶性灰分为0.7%～1.2%。样品测定结果为见表1。

表1 水分、总灰分、酸不溶性灰分测定结果

2.4 浸出物 按《中国药典》2015年版四部通则2201浸出物测定法进行测定，分别用乙醇、50%乙醇、水作为溶剂，热浸法和冷浸法分别测定浸出物，平行操作两次，取平均值作为结果。根据测定结果，选择浸出物含量最高的方法作为浸出物方法，故浸出物测定法为以稀乙醇为溶剂的冷浸法，其测定结果见表2。

表2 浸出物测定结果 (%)

2.5 总黄酮的含量测定[5]

2.5.1 供试品溶液的制备 取迎春花粗粉约1.2 g，精密称定，精密加入50 mL 70%乙醇，置具塞锥形瓶中，密塞，称定重量，加热回流40 min，放冷，再次称定重量，用70%乙醇不租减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.5.2 对照品溶液的制备 取芦丁对照品20 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加70%乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取25 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL含芦丁0.2 mg)。

2.5.3 标准曲线的制备及线性关系考察 精密量取对照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分别置25 mL量瓶中，各加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，放置6 min，再加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min。加氢氧化钠试液10 mL，再加水稀释至刻度，摇匀，放置15 min，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在500 nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线(如图3所示)，得回归方程：Y=0.0133X-0.0047(r=0.9999)，在7.909～47.454 μg芦丁与吸光度之间线性关系良好。

2.5.4 测定法 精密量取供试品溶液1 mL，置25 mL量瓶中，加70%乙醇至6 mL，照标准曲线制备项下的方法，自“加亚硝酸钠溶液1 mL”起，依法测定吸光度，同时取供试品溶液1 mL，除不加氢氧化钠试液外，其余同上操作，作为空白，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量(mg)，计算，即得。

2.5.5 精密度、稳定性与重复性试验 取对照品溶液在500 nm的波长处测定吸光度，重复测定6次，RSD=0.2%，表明精密度良好。取供试品溶液，按“2.5.4”项方法测定吸光度，连续测定120 min，计算得含量的RSD=0.2%，表明稳定性良好。取同一批迎春花药材共6份，每份1.2 g，精密称定，按“2.5.1”项方法制备供试品并测定含量，计算得平均含量为2.50%，RSD=0.1%，表明重复性良好。见表3。

表3 重复性试验

2.5.6 准确度试验 精密称取已知含量迎春花粉末0.6 g，平行操作6份，分别精密加入含芦丁对照品(0.2967 mg/mL)50 mL，按“2.5.1”项制备供试品溶液，并按“2.5.4”方法测定吸收光，计算回收率。结果回收率为101.5%，RSD=0.3%,表明方法的准确度良好。见表4。

表4 回收率试验数据 (n=6)

2.5.7 样品测定 取3批迎春花样品，按“2.5.1”“2.5.4”项下方法制备供试品溶液并测定吸光度，测定总黄酮的含量，结果见表5。

3 结果与讨论

迎春花为贵州习用药材，其现行标准质量控制项目较少，文献关于迎春花质量研究也较少，本研究从定性、定量对迎春花药材进行研究，定性研究中显微特征明显,薄层色谱分离效果较好，重现性佳, 水分、灰分、浸出物测定方法可行。

迎春花的花、叶中含有较为丰富的黄酮类，已有研究证实迎春花提取液具有很好的抗心律失常、镇痛镇静、耐缺氧等作用，故含量以总黄酮为指标，分别考察了不同的提取方式(超声、回流)，不同的提取溶剂(乙醇、70%乙醇、稀乙醇、25%乙醇)，不同的提取时间(回流30 min、40 min、50 min)，结果文中方法提取完全，重现性好，准确度高，方法可行。

随着中药现代化和国际化，民族药资源的开发利用、保护极其重要，应更好地保证该品种的合理开发利用，药材安全有效，质量可控稳定。本研究可为迎春花的质量控制提供参考依据。