景红颗粒活血化瘀作用研究

王云飞 孙洋洋 帕依曼·亥米提 潘晓晗 徐向伟 何承辉*

1.新疆维吾尔自治区药物研究所，新疆 乌鲁木齐 830004；2.天津药物研究院新药评价有限公司，天津 300301

中医认为气血是构成和维持人体生命活动的基本物质，“气为血帅，血为气母”,两者在物质和功能上互生互助[1]。血瘀证是中医临床常见病理症候[2]，与多种疾病相关，如冠心病、心绞痛，动脉粥样硬化等[3-5]，其中医治疗原则为活血化瘀[6]。近年来中医药在早期预治心脑血管疾病[7-8]，发现有效的作用靶点[9-10]，开辟新的治疗方法等方面有很好的疗效和广阔的应用前景[11-12]，成为该领域的研究热点。

景红颗粒是由红景天、赤芍、黄芪等药材组成的复方制剂，药材红景天中的苷类成分红景天苷和赤芍中的单萜及其苷类成分芍药苷，黄芪中的皂苷类有效成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷，这些有效成分都具有益气行血、活血化瘀、通络开窍等功效[13]。

景红颗粒临床应用多年，疗效确切，具有活血通脉、养心益气、化瘀止痛的功效，用于气虚血瘀所致的冠心病、心绞痛等心血管疾病[13]。本研究采用急性大鼠血瘀模型，评价景红颗粒对大鼠血小板聚集功能和血液流变学的影响，阐述传统中医病机和现代疾病发生发展机制以及两者的联系，明确药理作用机制，为景红颗粒临床用药的有效性及新药研发提供研究基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 景红颗粒由新疆维吾尔自治区药物研究所提供，新疆银朵兰维药股份有限公司生产，批号180920。为黄棕色至棕色颗粒剂，铝塑袋包装，每袋6 g。临用时以0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配制成所需浓度药液，供动物给药用。参芍胶囊保定天浩制药有限公司生产，批号181003。每粒胶囊250 mg。临用时,倒出胶囊内容物，以0.5%CMC-Na配制成所需浓度药液，供动物给药用。腺苷二磷酸钠(Adenosine Diphosphate,ADP)：SIGMA公司产品，批号01905。花生四烯酸钠(Arachidonic,AA)：SIGMA公司产品，批号SLBT0162。胶原(Collagen,CG)：CHRONO-LOG公司产品，批号3479。BCA蛋白浓度测定试剂盒，索莱宝科技有限公司(Solarbio)产品，批号20190904。GF254薄层色谱硅胶：青岛海洋化工厂；有机溶剂均为国产分析纯。1.2 动物 SD大鼠，SPF级，由斯贝福(北京)生物技术有限公司提供，动物生产许可证号SCXK(京)2019-0010。

Wistar大鼠，SPF级，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，生产许可证号SCXK(京)2016-0006。

1.3 仪器与设备 540型血小板聚集仪，美国CHRONO-LOG公司产品。LBY-6COMPACT全自动血液流变仪，北京普利生仪器有限公司产品。

1.4 实验方法

1.4.1 血瘀模型大鼠的制作 大鼠雌雄各半，参照文献方法[10]除正常对照组外，于实验前一天皮下注射0.1%盐酸肾上腺素0.8 mL/kg，共2次，间隔6 h，期间(约3 h)将大鼠放入冰水中游泳 5 min，禁食不禁水过夜，造成血瘀模型。

1.4.2 血瘀大鼠血小板聚集检测 雄性SD大鼠，按体重随机分为6组，每组10只。每天灌胃给药1次，连续给药7 d，给药体积均为10 mL/kg。正常对照组和模型对照组给予0.5%CMC-Na、受试物药组给予景红颗粒，剂量分别为0.9、1.8、3.6 g/kg；阳性药组给予参芍颗粒200 mg/kg。给药第6天造模，次日给药后60 min水合氯醛麻醉(360 mg/kg,ip)，腹主动脉取血，3.2%枸橼酸钠抗凝，全血与抗凝剂体积之比9∶1，800 rpm离心10 min制备富血小板血浆(PRP)，3000 rpm离心10 min制备贫血小板血浆(PPP)。以PPP调PRP，使其血小板计数保持在(3.5～4.0)×108个/mL。比浊法测定血小板聚集率。以PPP调100%，PRP调零，在连续搅拌下加入诱导剂二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸钠(AA)、胶原(CG)，引起血小板聚集。观察不同药物对血小板聚集功能的影响，并与溶剂对照组比较，计算血小板聚集抑制率。

1.4.3 血液流变学参数测定 雄性Wistar大鼠，随机分为6组，每组10只。每天灌胃给药1次，连续给药7 d，给药体积均为10 mL/kg。正常对照组和模型对照组均给予0.5%CMC-Na，受试药组给予景红，剂量分别为0.9、1.8、3.6 g/kg，相当于人临床拟用量的0.5、1、2倍；阳性药组给予参芍，剂量为200 mg/kg，相当于临床用量。给药第6天造模，次日给药后60 min水合氯醛麻醉，腹主动脉取血7 mL，5 mL置肝素化试管抗凝，进行全血粘度测定，3000 rpm、25 ℃离心10 min后取血浆测定血浆粘度，2 mL置红细胞压积管枸橼酸钠抗凝，并同时以红细胞压积管测定红细胞压积。

1.4.4 对血栓纤维蛋白量的影响 雄性SD大鼠，按体重随机分为5组，每组10只。给药方法同上。末次给药后1 h，35%水合氯醛麻醉(350 mg/kg,ip)，大鼠仰卧位固定，分离颈总动脉，置于BT87-3型实验性体内血栓形成测定仪的刺激电极和温度探头钩上，温度探头在远心端，刺激电极靠近心端。记录从刺激开始到动脉温度骤降所需的时间(s)，作为动脉血栓形成时间。实验结束取出颈动脉内的血栓，将其置于1 mL 0.5N NaOH溶液中，待血栓溶解后测定血栓纤维蛋白含量。

2 结果与分析

2.1 景红颗粒对血小板聚集功能的影响 造成“血瘀”模型后，ADP、AA、CG均可诱导模型大鼠PRP产生明显的血小板聚集现象，连续7 d给予景红0.9、1.8、3.6 g/kg能对血小板聚集产生明显的抑制作用，1.8 g/kg景红与参芍比较，无明显差异。结果见表1。

表1 景红对大鼠血小板聚集率的影响

2.2 景红颗粒对血瘀大鼠血液流变学参数的影响

2.2.1 对全血粘度的影响 造成“血瘀”模型后，可见动物全血粘度增加，与模型对照组相比有明显的统计学差异(P<0.01～0.001)。高剂量景红可明显降低低切变率下全血粘度，对高切变率下全血粘度未见明显影响。说明药物可抑制"血瘀"模型所造成的全血粘度增加。阳性药物参芍不影响各切变率下全血粘度。结果见表2。

表2 景红对大鼠全血粘度(mPa·s)的影响

2.2.2 对血浆粘度和血细胞压积的影响 造成“血瘀”模型后，可见动物血浆粘度增加，与溶剂对照组相比有明显的统计学差异(P<0.05)。给予景红0.9、1.8、3.6 g/kg后血浆粘度与模型对照组无明显差异。对红细胞压积亦无明显影响。阳性药物参芍对血浆粘度和红细胞压积无明显影响。结果见表3。

表3 景红对大鼠血液流变学指标的影响

2.3 对大鼠血栓形成的影响

2.3.1 对动脉血栓形成时间的影响 结果表明，大鼠灌服景红能剂量依赖性延长电刺激引起的动脉血栓形成时间，与溶剂对照组比较0.9、1.8、3.6 g/kg分别延长了9.8%(P>0.05)、23.4%(P<0.05)、36.6%(P<0.01)。参芍明显延长血栓形成时间，延长了17.7%(P<0.05)。1.8 g/kg景红与参芍比较，无明显差异。结果见表4、图1。

表4 景红对大鼠实验性血栓形成时间的影响

2.3.2 对血栓纤维蛋白量的影响 结果表明，大鼠灌服景红0.9、1.8、3.6 g/kg能剂量依赖性减少电刺激引起的动脉血栓纤维蛋白量，与溶剂对照组比较分别减少了20.6%(P>0.05)、32.4%(P>0.05)、52.6%(P<0.01)。参芍不影响血栓纤维蛋白。1.8 g/kg景红与参芍比较，无显著性差异(P>0.05)。结果见表5、图1。

表5 景红对大鼠动脉血栓纤维蛋白量的影响

3 讨论

正常的血液流变性能保持组织灌注和代谢功能。凝血和纤溶系统是调节人体血液凝固和纤维蛋白溶解的调控系统[14]，是维持血液的正常功能、血管通畅的关键调控因素，血小板在血栓形成过程中发挥重要作用[15]。血液功能的异常表现为凝血及纤溶活性异常，血液流变性异常，血流动力学异常等[16-17]。全血粘度、血浆粘度、红细胞压积等指标的改变是气滞血瘀症的物质基础[18]。

中医药在治疗气虚血瘀型冠心病心绞痛中能发挥独特且重要的作用[19-21]，治疗上多以活血化瘀为主要手法，辅以益气、温阳、化浊等治疗原则[22-24]。冠心病心绞痛在中医理论中属“胸痹”的范畴，胸痹的病机大致分四种，肾气虚衰心脉痹阻、饮食不节痰郁化火、情志失调肝郁气滞以及素体阳虚外感寒邪而导致心血瘀阻而发病，也就是心脉发生了血瘀证。血瘀证往往伴随血液和血管异常而导致血液循环障碍[25]。本研究采用的动物模型是一种经典的血瘀模型，属于中药药理研究常用经典方法，即给小鼠注射肾上腺素，造成其活动增加，类似于中医所讲阳气过度消耗而致阳虚，再进行低温游泳模拟外感阴寒之邪并在强迫运动中进一步消耗其阳气，造成气(阳)虚血瘀模型[26]。病机类似于气虚血瘀型，素体阳虚胸阳不振者遇阴寒之邪趁虚而入，则寒凝气滞，血行不畅而致心血瘀阻。实验结果表明，模型大鼠较正常动物血粘度增高，较正常血小板对诱导剂(ADP、AA)敏感度上升，血液呈高凝、高黏的状态，说明造成了“血瘀”的模型。

本实验目的是探讨景红颗粒治疗冠心病心绞痛的机制，并针对其活血通脉、养心益气的治则选用了气虚血瘀的模型。景红颗粒也遵循这些治则进行了组方，结果表明该药可改善模型大鼠血液流变学，抑制血小板聚集，还可明显延长正常动物血栓形成时间，减少血栓纤维蛋白量，说明景红颗粒有明显的抗血栓作用，也体现了中医所讲的活血化瘀作用。综上所述，景红颗粒的药理作用及其机制是：通过抗血小板聚集、抗栓作用和改善血液流变学的作用，发挥其活血化瘀的功效，可用于防治冠心病心绞痛，还可能通过该作用防治其他血栓性疾病。研究结论为景红颗粒在新药研发和临床应用阶段提供理论基础。