HPVL1和EGFR在宫颈癌及癌前病变中的表达及意义研究

钟辉，刘锦钰，龙璐雯，化金金，马静

（安徽省淮北市妇幼保健院病理科，安徽 淮北 235000）

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤疾病，该病占居女性恶性肿瘤发病率第二位，严重威胁女性生命安全[1]。关于宫颈癌的发病，相关研究表明人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）为宫颈癌与癌前病变的重要致病因子，当前对HPV研究已深入到对各亚型分子中，其中主要的亚型分子为衣壳蛋白L1（HPVL1），通常而言，HPVL1蛋白若阳性表达可提示为低级别上皮内瘤变，阴性表达则提示为高级别上皮内瘤变与宫颈癌，因此，认为HPVL1 对判定宫颈癌及癌前病变具有一定的价值[2]。表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）则是表皮生长因子（EGF）细胞增殖及信号传导受体，在很多的实体瘤中存在EGFR 高表达或异常表达情况，这与肿瘤细胞增殖、血管生成及肿瘤侵袭相关，分析EGFR 对判断宫颈癌及癌前病变具有一定价值[3]。本研究旨在探讨HPVL1与EGFR在宫颈癌及癌前病变中的表达与意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2009年1月至2015年5月于本院门诊及住院的40例宫颈癌、300例宫颈癌前病变患者、10例子宫颈HPV感染及20例尖锐湿疣患者作为研究对象，所有宫颈癌病例均经过病例组织活检确诊，且均为初发病例。本研究经医院医学伦理委员会批准同意。

1.2 检测方法 对获取的病理标本，采取原位杂交技术对宫颈癌、癌前病变做HPV-DNA分型检测，HPV检测阳性的病例则开展HPVL1、EGFR检测，其中EGFR采用免疫组织化学标记，HPV-L1 采用核酸分子杂交技术和免疫组化技术，EGFR 检测试剂盒购自福州买新公司，HPV-L1 美国哀帝旺斯医疗科技有限公司，相关检测操作步骤严格参照试剂盒说明书进行，在光镜下进行检测。

1.3 观察指标 宫颈癌的分期参照国际产科协会制定的标准：原位癌或者上皮内癌为0 期；癌症发生局限于宫颈部位为Ⅰ期；癌症病变已经超出宫颈组织，但并未达到盆壁或者阴道下1/3 位置为Ⅱ期；癌症浸润至盆壁或者累及阴道下1/3 位置，存在肾盂积水为Ⅲ期；癌症扩散超过真骨盆或者侵犯膀胱或者直肠黏膜部位为Ⅳ期。

宫颈癌前病变的标准参照世界卫生组织（WHO）制定的标准（颈不典型增生依据细胞异型程度、上皮累及范围）：①轻度不典型增生（CINⅠ级），细胞异型程度较轻，异型细胞仅占到上皮层的下1/3；②中度不典型增生（CINⅡ级），细胞出现明显的异型，局限在上皮层下2/3 的位置；③重度不典型增生（CINⅢ级），细胞明显异型，几乎累及全部上皮层。宫颈原位癌的特点是癌细胞仅局限于上皮内，基底膜完整无间质浸润。宫颈浸润癌依据分化程度分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级，其中Ⅰ级为高分化癌，表现为癌巢的中部多数角化并可见癌珠；Ⅱ级为中度分化癌，分化达到宫颈上皮中层细胞，细胞大小不一且癌巢无明显角化；Ⅲ级为未分化的小细胞。

阳性判断标准为细胞核出现黄色/棕黄色颗粒，阳性强度判断借助综合阳性细胞百分比、染色强度半定量积分法。对患者进行随访，在每年3～6 个月进行1 次供应细胞复查，必要时进行活检，随访5年，分析HPVL1、EGFR 在宫颈癌与宫颈癌前病变中的表达情况。

1.4 统计学方法 采用SPSS 21.0 统计学软件进行数据分析，计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验，计量资料以“±s”表示，行t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基础资料 40例宫颈癌患者年龄29～80岁，平均年龄（56.1±2.4）岁；病理分期：Ⅰ～Ⅱ期26例（65.00%），Ⅲ～Ⅳ期14例（35.00%）；癌细胞分化：高分化5例（12.50%），中分化22例（55.00%），低分化13例（32.50%）；随访5年，随访率100%，5年期生存率为80.00%（32/40），死亡率为20.00%（8/40）。300例宫颈癌前病变患者年龄20～80岁，平均年龄（56.2±2.3）岁；病变增生情况上CIN Ⅰ～Ⅱ级235例（78.33%），CINⅢ级65例（21.67%）。10例子宫颈HPV 感染年龄21～50岁，平均（33.2±2.1）岁。20例尖锐湿疣年龄20～42岁，平均（29.1±1.5）岁。

2.2 HPVL1 在宫颈癌与癌前病变中的表达情况 宫颈癌HPVL1 阳性表达率明显低于其他患者（P＜0.05），尖锐湿疣与癌前病变的阳性表达率高于子宫颈HPV 感染（P＜0.05），但尖锐湿疣与癌前病变的阳性表达率比较差异无统计学意义，见表1，图1～3。随访宫颈癌患者，5年期生存的患者HPVL1蛋白表达显著高于死亡患者。

2.3 EGFR 在宫颈癌及癌前病变中的表达情况 在子宫颈HPV感染中无EGFR阳性表达，宫颈癌患者阳性表达率高于其他患者，癌前病变的EGFR阳性表达率高于尖锐湿疣，见表2。宫颈癌患者随着病理的分期的增加EGFR 阳性表达率也增高，EGFR 阳性表达随分化程度的降低而增强。癌前病变者随CIN分级提高EGFR阳性表达也提高。

表1 不同患者HPVL1蛋白阳性表达情况Table 1 The positive expression of HPVL1 protein in different patients

图1 尖锐湿疣中挖空细胞HPVL1阳性表达Figure 1 Positive expression of HPVL1 in knockout cells in condyloma acuminatum

图2 低级别上皮内病变增生鳞状上皮HPVL1阳性表达Figure 2 The positive expression of HPVL1 in low-grade intraepithelial lesions and squamous epithelium

图3 高级别上皮内病变少量细胞HPVL1阳性表达Figure 3 HPVL1 was positively expressed in a few cells of high grade intraepithelial lesion

3 讨论

表2 EGFR在不同患者中的阳性表达情况Table 2 The positive expression of EGFR in different patients

HPV是宫颈癌发生的主要病因，HPV包含很多亚型，其中HPVL1亚型同病变发生存在关联[4-6]。本研究中显示，在宫颈癌患者中HPVL1阳性表达率低，癌前病变、尖锐湿疣及HPV阳性率高，提示可以将其作为检测宫颈癌的一项重要指标，主要是HPV-L1蛋白是HPV的主要衣壳蛋白，包裹病毒DNA于球心，防止病毒基因组不受核酸酶的破坏，实现病毒致病活性，是HPV感染复制早期的结构蛋白。对机体而言，HPV-L1蛋白作为外来抗原类物质，可以识别和侵袭宿主细胞的特定部位，HPVL1 表达在HPV复制早期阶段呈阳性表达，当HPV DNA整合到宿主细胞DNA后则呈阴性表达。但研究发现大部分的HPV并不一定会引起宫颈癌，需要其他因子协同，而EGFR就被认为是一种重要的协同因子[7]。EGFR是体内细胞表面的一种蛋白质，可与EGF结合，参与细胞正常生长及分离，而当EGFR基因发生突变则会使基因疯狂表达EGFR蛋白并组装于细胞膜表面，导致细胞膜表面EGFR受体过多，加速细胞异常生长及分裂，进而导致肿瘤发生及发展[8]。本研究结果显示，在EGFR的阳性表达率上，宫颈癌高于癌前病变，而癌前病变又高于尖锐湿疣与宫颈HPV感染，表明EGFR对预测宫颈癌及癌前病变有重要价值。此外，本研究结果还发现，在宫颈癌患者中，EGFR阳性表达率上均是随着病理分期增加而增加，随分化程度降低增加，癌前病变患者随CIN分级提高而增加，以上结果提示HPVL1与EGFR可作为监测宫颈癌与癌前病变的重要指标。

综上所述，宫颈癌与癌前病变患者通过监测HPVL1、EGFR 可为肿瘤的发生发展提供参考，进而为早期治疗疾病提供有利帮助。