血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶在喉鳞状细胞癌病人临床诊断及预后判断中的意义分析

王晓辉，沙树奎，闫嘉俊，姚明月

作者单位：南阳市中医院耳鼻咽喉头颈外科，河南 南阳473003

喉鳞状细胞癌是喉癌来的主要病理类型，也是耳鼻喉科常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率在头颈部上皮来源的原发性恶性肿瘤中排名第二。喉鳞状细胞癌病人临床诊断时通常处于中晚期，病人预后较差。探索喉鳞状细胞癌临床分期及预后的潜在标志物对喉鳞状细胞癌病人的早期诊断并及时采取措施、改善病人预后具有积极的意义。基质金属蛋白酶及其抑制剂是细胞外基质重构的关键酶，也是恶性肿瘤发生、发展、转移及细胞凋亡的重要参与者，其可作为临床恶性肿瘤诊断的标志物。本研究分析VEGF 及MMPs 在喉鳞状细胞癌病人临床诊断及预后判断中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以河南省南阳市中医院耳鼻咽喉头颈外科2010年12月至2015年12月收治的喉鳞状细胞癌病人180例为研究对象（观察组）。其中男99 例，女81 例，年龄范围62～77 岁，年龄（66.7±8.4）岁，其中Ⅰ期34 例，Ⅱ期48 例，Ⅲ期56 例，Ⅳ期42例。以河南省南阳市中医院耳鼻咽喉头颈外科同期健康体检者160例为对照组，男85例，女75例，年龄范围62～76岁，年龄（66.5±8.3）岁。两组研究对象在性别比例、年龄分布等一般资料比较，差异无统计学意义（

χ

=0.120，

P

=0.730；

t

=0.221，

P

=0.826）。

1.2 观察指标

分析各组研究对象血清中血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮细胞生长因子受体1（VEGFR1）、血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）、血管内皮细胞生长因子受体3（VEGFR3）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）和金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP1）及金属蛋白酶组织抑制因子2（TIMP2）水平的变化，并分析不同VEGF、MMP2和MMP9表达强度病人预后情况。

1.3 试剂与检测方法

抽取各组研究对象清晨空腹静脉血6 mL，3 000 rpm离心10 min后分离上层血清，-20 ℃保存，待用。VEGF、VEGFR1蛋白检测试剂盒购自碧云天生物科技有限公司；VEGFR2、VEGFR3检测试剂盒购自R&D公司；MMP2和MMP9蛋白检测试剂盒购自IBL 公司；TIMP1 检测试剂盒购自CST 公司；TIMP2蛋白检测试剂盒购自Santa Cruz公司。所有检测的操作过程均按照试剂盒说明书进行。

2 结果

2.1 不同临床分期喉鳞状细胞癌病人VEGF 表达分析

研究发现，不同临床分期观察组VEGF 的表达水平均高于对照组（

P

＜0.05）；不同临床分期观察组VEGF 及其受体表达存在明显的差异性，随着病人临床分期的升高，血管内皮生长因子的表达逐步增强（

P

＜0.05），见表1。

表1 喉鳞状细胞癌180例与健康体检者160例VEGF表达分析/±s

2.2 不同临床分期喉鳞状细胞癌病人MMP2 和MMP9 蛋白表达分析

研究发现，不同临床分期喉鳞状细胞癌病人MMP2 和MMP9 蛋白表达水平均高于对照组（

P

＜0.05）；不同临床分期喉鳞状细胞癌病人MMP2 和MMP9 表达存在明显的差异性：随着病人临床分期的升高，MMP2 和MMP9 的表达逐步增强（

P

＜0.05），见表2。

表2 喉鳞状细胞癌180例与健康体检者160例MMP2和MMP9蛋白表达分析/±s

2.3 不同临床分期喉鳞状细胞癌病人TIMP1 和TIMP2蛋白表达分析

研究发现，不同临床分期喉鳞状细胞癌病人TIMP1和TIMP2蛋白表达水平均高于对照组（

P

＜0.05）；不同临床分期喉鳞状细胞癌病人TIMP1 和TIMP2 表达存在明显的差异性：随着病人临床分期的升高，TIMP1 和TIMP2 的表达逐步增强（

P

＜0.05），见表3。

表3 喉鳞状细胞癌180例与健康体检者160例TIMP1和TIMP2蛋白表达分析/±s

2.4 VEGF 表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后的相关性分析

研究发现VEGF 表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后有明显的相关性，随着血管内皮生长因子蛋白表达的增强，病人的预后逐渐变差，见图1。

图1 VEGF表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后的相关性分析。

2.5 MMP2 蛋白表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后的相关性分析

研究发现MMP2表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后有明显的相关性，随着MMP2 表达的增强，病人的预后逐渐变差，见图2。

图2 MMP2蛋白表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后的相关性分析。

2.6 MMP9 蛋白表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后的相关性分析

研究发现MMP9表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后有明显的相关性，随着MMP9 表达的增强，病人的预后逐渐变差，见图3。

图3 MMP9蛋白表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后的相关性分析。

3 讨论

随着现代诊疗技术的进步和生活环境的恶化，喉鳞状细胞癌的发病率和死亡率有逐年升高的趋势。喉鳞状细胞癌病人临床诊断时通常处于中晚期，预后较差。因此，探索其发病、临床分期及预后的标志物，对早期临床诊断和改善病人预后具有十分重要的意义。本研究在分析VEGF 及MMPs 在喉鳞状细胞癌病人临床诊断及预后判断中的价值时发现不同临床分期喉鳞状细胞癌病人VEGF、MMP2、MMP9 和TIMP1 及TIMP2 蛋白表达存在明显的差异性：随着喉鳞状细胞癌临床分期的增加，血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶家族成员的表达逐步增强，差异有统计学意义；且VEGF、MMP2和MMP9 表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后有相关性，随着血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶家族成员表达的增强，病人的预后逐渐变差。因此，VEGF 及MMPs 表达与喉鳞状细胞癌病人临床分期密切相关，且可作为病人预后的标志物。

基质金属蛋白酶及其抑制剂参与了多种恶性肿瘤的发展、发展及恶化过程，且与病人的预后有一定的相关性。在研究垂体肿瘤转化基因1、基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶-9在胃癌组织中表达意义的研究中发现其可作为胃癌临床诊断的重要标志物。在分析脂联素在非小细胞肺癌组织中的表达及其与基质金属蛋白酶-9 和肿瘤血管生成关系的研究中也证实MMP9的过表达与肿瘤血管生成呈明显的正相关性。以往的研究还发现胃癌组织高迁移率族蛋白A2 与基质金属蛋白酶-9 表达与肿瘤侵袭转移密切相关，且基质金属蛋白酶-2、9及其抑制剂MMI-166是肿瘤发展、发展及转移的重要参与分子和标志物。马艳艳等也发现兔肝VX2肿瘤射频消融术后残癌与基质金属蛋白酶9的表达密切相关。本研究也发现不同临床分期喉鳞状细胞癌病人MMP2、MMP9蛋白表达存在明显的差异性：随着病人临床分期的升高，基质金属蛋白酶家族成员蛋白表达逐步增强，且存在显著的差异性；且MMP2 和MMP9 表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后有明显的相关性，提示基质金属蛋白酶也是喉鳞状细胞癌病人临床诊断与预后的重要标志物。

血管内皮生长因子及其受体也是肿瘤多种病理及生理过程的重要参与者和调节者，也与肿瘤的发生及恶化过程相关。在分析肾母细胞瘤肿瘤相关巨噬细胞和血管内皮生长因子表达的研究中发现肿瘤细胞的生理及病理过程与血管内皮生长因子表达明显相关。在研究上皮性卵巢恶性肿瘤组织中环氧合酶血管内皮生长因子CD34 蛋白和碱性成纤维细胞生长因子表达的研究中发现血管内皮生长因子表达与上皮卵巢恶性肿瘤的临床分期密切相关，且此过程与碱性成纤维细胞生长因子有关。以往的研究也发现葡萄膜恶性黑色素瘤中血管内皮生长因子水平与肿瘤的转移过程相关，且奥沙利铂联合多西他赛对卵巢癌病人的治疗作用与其调节血管内皮生长因子的异常表达有关。以往的研究还证实肿瘤相关巨噬细胞浸润和血管内皮生长因子在膀胱癌中的表达是肿瘤转移及恶化的关键过程。本研究也发现不同临床分期喉鳞状细胞癌病人血管内皮生长因子表达存在明显的差异性：随着病人临床分期的升高，血管内皮生长因子及其受体的表达逐步增强；且血管内皮生长因子表达水平与喉鳞状细胞癌病人预后有明显的相关性，提示基质金属蛋白酶也是喉鳞状细胞癌病人临床诊断与预后的重要标志物。

因此，VEGF及MMPs表达与喉鳞状细胞癌病人临床分期密切相关，且可作为病人预后的标志物。