30%氯氟吡·灭·2甲微乳剂高效液相色谱分析

肖萌，殷勇

(1.中国人民武装警察部队警官学院，四川 成都 610213；2.四川利尔作物科学有限公司，四川 成都 610000)

30%氯氟吡·灭·2甲微乳剂是一种新型除草剂，其中：氯氟吡氧乙酸异辛酯，化学名称为4-氨基-3,5-二氯-6-氟-2-吡啶氧乙酸异辛酯，是一种选择性内吸传导型苗后除草剂，在土壤中易降解，半衰期较短，可防除阔叶杂草[1-3]；灭草松化学名为3-异丙基-(1H)-苯骈-2,1,3-噻二嗪-4-酮-2,2-二氧化物，是一种触杀型及内吸性除草剂，可防治阔叶杂草和莎草科杂草[4-6]；2甲4氯化学名为2-甲基-4-氯苯氧乙酸，是一种选择性内吸传导激素型除草剂，可防治阔叶杂草[7]。经药效试验证明，氟氯吡氧乙酸异辛酯，灭草松和2甲4氯三者复配可扩大除草谱，提高除草效果[8]。

目前，氯氟吡氧乙酸异辛酯、灭草松和2甲4氯单剂的分析方法已有报道[9-14]，而在复配制剂中，对这3种化合物同时分析的方法尚未见报道。笔者建立了一种高效液相色谱分析方法，可以对30%氯氟吡氧乙酸异辛酯·灭草松·2甲4氯微乳剂中3种有效成分同时进行定量分析。该法也适用氯氟吡氧乙酸异辛酯、灭草松和2甲4氯原药及制剂的分析。

1 实 验

1.1 试剂与仪器

甲醇，色谱纯，Sigma-Aldrich公司；磷酸，分析纯，成都科龙化工试剂厂；新蒸二次蒸馏水；氯氟吡氧乙酸异辛酯标样(质量分数≥98.0%)，沈阳化工研究院；灭草松标样(质量分数≥98.0%)，沈阳化工研究院；2甲4氯标样(质量分数≥98.0%)，沈阳化工研究院；30%氯氟吡氧乙酸异辛酯·灭草松·2甲4氯微乳剂，四川利尔作物科学有限公司。

Agilent 1260高效液相色谱仪，具二极管阵列检测器(DAD检测器)；Agilent 1260色谱数据处理工作站：版本C. 01. 07. SR2[255]，Hypersil BDS C18不锈钢柱色谱柱(250 mm×4.6 mm，内装5 μm C18填充物)，滤膜孔径0.45 μm，25 μL微量进样器，超声波清洗器。

1.2 色谱条件

采用梯度洗脱，洗脱条件见表1所示。

表1 梯度洗脱条件

柱温25 ℃；检测波长0 min为255 nm，7 min改变波长为235 nm；进样体积5 μL；保留时间：灭草松5.78 min、2甲4氯10.31 min、氯氟吡氧乙酸异辛酯22.29 min。标样及试样的高效液相色谱见图1。

图1 标样及试样的高效液相色谱

1.3 实验步骤

1.3.1 标样溶液的配制

称取氯氟吡氧乙酯异辛酯标样0.05 g(精确至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度后，摇匀备用。称取灭草松标样0.11 g和2甲4氯标样0.03 g(精确至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，移取10 mL上述氯氟吡氧乙酯异辛酯标样溶液于此容量瓶中，将其用甲醇溶解，并定容至刻度，摇匀，用超声波清洗器超声5 min，后脱气3 min，用0.45 μm滤膜过滤，备用。

1.3.2 试样溶液的配制

称取30%氯氟吡氧乙酸异辛酯·2甲4氯·灭草松微乳剂0.5 g(精确至0.000 2 g)至50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，用超声波清洗器超声5 min，后脱气3 min，用0.45 μm滤膜过滤，备用，作为测定氯氟吡氧乙酸异辛酯、灭草松和2甲4氯的试样。

1.3.3 测定方法

在液相色谱条件下，待仪器稳定后，连续测定数针标样溶液，计算各针峰面积的重复性，直到相邻两针氯氟吡氧乙酸异辛酯、灭草松和2甲4氯的峰面积相对变化小于1.5%时，按照标样溶液—试样溶液—试样溶液—标样溶液的顺序分别进行测定。

1.3.4 计算方法

将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中的氯氟吡氧乙酸异辛酯、灭草松和2甲4氯峰面积分别进行平均，两次平行测定结果相对偏差不大于2%时，结果取其平均值。按式(1)计算各物质的质量分数(X1)。

(1)

式中：A1是标样峰面积的平均值；A2是试样峰面积的平均值；ms是标样的质量；mx是试样质量；p是标样的质量分数。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 流动相

根据氯氟吡氧乙酸异辛酯、灭草松和2甲4氯的理化性质，对比其在甲醇和乙腈的溶解度，选择甲醇作为溶剂。为了得到更好的峰形和分离效果，在选择流动相时，对甲醇和水、乙腈和水按不同的比例在色谱柱上进行比较实验。

分别用纯水、0.1%磷酸水溶液和0.2%磷酸水溶液作水相(甲醇作有机相)，对30%氯氟吡氧乙酸异辛酯·2甲4氯·灭草松微乳剂进行分析，发现用纯水作水相时，3种有效成分无法分离开，峰形很差，重现性差；当用0.1%磷酸水溶液或0.2%磷酸水溶液作水相时，3种有效成分分离度好，并且都能进行分析测定；考虑到常规色谱柱使用的pH值范围是2.0～8.0，如果因pH值使用不当，很难将色谱柱恢复，0.2%磷酸水溶液的pH值为2.02，已为色谱柱使用的下限，因此选择0.1%磷酸水溶液作水相。

用乙腈作有机相时，30%氯氟吡氧乙酸异辛酯·2甲4氯·灭草松微乳剂中灭草松和2甲4氯的峰形拖尾现象严重，并且峰面积相差太大，测定结果不准确；而用甲醇作有机相时，3种有效成分峰形好、分离度高，能满足分析测定的要求(图2)。最终确定流动相为甲醇+水(0.1%磷酸水溶液)，当流速控制在1.0 mL/min时，各有效成分峰形对称，分离度均大于1.5，基线平稳，保留时间短。

图2 甲醇作有机相时的液相色谱

2.1.2 洗脱程序

由于3种有效成分极性差别较大，无法用等度洗脱对30%氯氟吡氧乙酸异辛酯·2甲4氯·灭草松微乳剂进行分离测定，因此选用梯度洗脱的方法，体积比分别为60∶40、60∶40、65∶35、95∶5、95∶5、60∶40、60∶40。

2.1.3 色谱柱

选择常规的BDS柱进行分离测定，经验证，主峰与杂质峰的分离度都大于1.5，实现了完全分离；主峰的拖尾因子在0.5～2.5之间；理论塔板数高，柱效好。

2.1.4 检测波长

分别配制一定浓度的有效成分的标准溶液，向高效液相色谱仪中注入相同量(5 μL)，比较在不同波长下有效成分的峰面积；通过DAD检测器在190～400 nm波长范围内进行紫外扫描,结果见图3。由图3可见，氯氟吡氧乙酸异辛酯在220～240 nm范围内有较大吸收，灭草松在200～225 nm范围内有较大吸收，2甲4氯在220～270 nm范围内有较大吸收。考虑制剂中助剂对吸收的影响，以及样品中3组分的峰高及峰面积要尽量接近，确保测量的准确，最终选定0 min检测波长为255 nm，7 min改变波长为235 nm。

图3 3种有效成分的紫外吸收光谱

2.2 方法的线性相关性

配制不同浓度的氯氟吡氧乙酸异辛酯、灭草松和2甲4氯标准溶液，在色谱条件下每个浓度的样品重复进样2次，并且相邻两针的峰面积相对偏差小于1%，取其峰面积平均值。以3种有效成分的质量为横坐标、峰面积值为纵坐标绘制标准曲线，结果表明，氯氟吡氧乙酸异辛酯的质量为0.02～0.16 g时(其中质量浓度为80～640 mg/L)，具有良好的线性范围，线性回归方程为y=28 199x+3.240 2，R2为0.999 9；灭草松的质量为0.05～0.20 g时(其中质量浓度为1 000～4 000 mg/L)，具有良好的线性范围，线性回归方程为：y=76 773x+611.53，R2为0.999 0；2甲4氯的质量为0.015～0.06 g时(其中质量浓度为300～1 200 mg/L)，具有良好的线性范围，线性回归方程为：y=121 057x+195.47，R2为0.999 2。

2.3 方法的精密度测定

从同一份30%氯氟吡氧乙酸异辛酯·灭草松·2甲4氯微乳剂中准确称取5个试样进行分析测定，计算氯氟吡氧乙酸异辛酯、灭草松和2甲4氯的标准偏差分别为0.02，0.10和0.03，变异系数分别为0.49%，0.45%和0.45%(表2)。

2.4 分析方法的准确度测定

采用标准添加法，在测得质量分数的氯氟吡氧乙酸异辛酯、灭草松、2甲4氯试样中分别加入不同量的氯氟吡氧乙酸异辛酯、灭草松、2甲4氯标准品，进行分析测定，结果见表3。由表3可见，氯氟吡氧乙酸异辛酯的平均回收率为99.5%、灭草松的平均回收率为100.0%、2甲4氯的平均回收率为100.3%。

表2 方法的精密度

表3 方法的准确度

3 结 论

建立了30%氯氟吡氧乙酸异辛酯·灭草松·2甲4氯微乳剂的高效液相色谱分析方法。选择甲醇和0.1%磷酸水溶液作为流动相，采用梯度洗脱程序。该法具有较高的准确度和精密度、线性关系良好，适用于复配制剂中氯氟吡氧乙酸异辛酯、灭草松和2甲4氯的分析检测，是产品质量控制和应用研究中较为理想的分析方法，同时也为农药制剂的分析方法开发提供借鉴及思路。